全 文 ：　第 24 卷第 1 期
2005年 1月 　 　 　　　　 　
无 锡 轻 工 大 学 学 报
Journal of Wuxi University of Light Industry
　 　 　　　　Vo l. 24　No . 1
Jan. 　2005
　文章编号:1009-038X(2005)01-0065-04
　　收稿日期:2004-06-14;　修回日期:2004-10-28.
作者简介:纵伟(1965-), 男 ,安徽肖县人 , 副教授 ,天然产物博士研究生;*通讯作者.
大叶紫薇叶中熊果酸的分离纯化及结构
纵伟1 , 　夏文水1* , 　崔宝良2
(1. 江南大学 食品学院 ,江苏 无锡 214036;2. 无锡杰西医药研究所 ,江苏 无锡 214036)
摘　要:利用溶剂萃取 、薄层层析对大叶紫薇提取物中三萜化合物进行分离 ,通过 DSC , UV , IR
和 HPLC /M S对分离产物中具有降血糖的成分 3进行结构分析 ,结果表明:以氯仿∶丙酮为展开
剂 ,可在硅胶板中将大叶紫薇中三萜化合物有效分离 。对分离出的成分 3 , DSC 测定其熔点为 283
～ 287 ℃,焓值为 43. 727 J /g;UV 最大吸收波长为 206 nm;MS 测定其相对分子质量为 457;IR
光谱符合乌苏果烷型结构.经分析 ,具有降血糖的成分 3即为熊果酸.
关键词:大叶紫薇;熊果酸;分离;定性
中图分类号:O 652. 6 文献标识码:A
Isolation and Identification of Ursolic Acid from Lagerstroemia specious L.
ZONG Wei
1 , 　XIA Wen-shui1* , 　CUI Bao-liang2
(1. School of Food Science and Technolog y , Southern Yang tze Unive rsity , Wuxi 214036 , China;2. Jie xi Pharma
Ceutical Techno log y , CO. ltd , Wuxi 214000 , China)
Abstract:Solvent-ext raction and thin-layer chromato graphy we re used to ex t ract and separate
t riterpene f rom Lagerstroem ia specious L. St ructures o f the composi tion #3 w ere ident ified by
DSC 、UV 、 IR and HPLC /M S. The re sults showed that , t ri terpene can be eff iciently separated
w ith thin-layer chromatog raphy using :ace tone as the developer. The resul t also indicated that ,
the melting point , enthalypy , optimum abso rbance w ave lenghth , and molccular w eight w ere 283
～ 287 ℃,43. 727 J /g , 206 nm , and 45%, respect ively. IR spect rum fi t that of ursane st ructure.
T he resul t show ed compound #3 w as ursolic acid.
Key words:Lagerstroemia specious L. ;urso lic acid;isolation;identification
　　大叶紫薇(Lagerstroem ia specious L. )为千屈
菜科的落叶乔木 ,具有降血糖[ 1 , 2] 、抗氧化[ 3 , 4] 和降
血脂[ 5] 等作用 ,然而 ,对大叶紫薇降血糖的功能成
分还存在一定的争议 ,因此 ,研究大叶紫薇降血糖
的分子结构具有重要意义.作者通过对大叶紫薇溶
剂萃取 、薄层层析分离 ,将大叶紫薇中三萜类成分
进行了有效分离 ,并通过 DSC , UV , IR HPLC /MS
对其中具有降血糖功能的组分进行了结构分析 ,确
定了其中一降糖成分为熊果酸.
1　材料和方法
1. 1　实验材料和仪器
大叶紫薇叶(Lagerstroem ia specious L. ):采
自广东省珠海市;硅胶 G:青岛海洋化工厂生产;乙
腈为色谱纯;甲酸 、乙醇 、石油醚 、乙酸乙酯 、正丁
醇 、氯仿 、丙酮 、环己烷 、三氯乙酸 、碘 、硫酸皆为分
析纯;羧甲基纤维素钠为食品级.
SBXZ-1A 旋转蒸发器:上海申波仪器公司生
产;SHB 型水循环真空泵:郑州杜甫仪器厂生产;
101-3-BS 电热鼓风干燥箱:上海跃进医疗器械厂生
产;奥林巴斯 U310 数码照相机:奥林巴斯公司生
产;Waters P latform ZMD 液质联用仪:美国 Wa-
ters公司生产.
1. 2　实验方法
1. 2. 1　大叶紫薇叶的提取　大叶紫薇叶原料经预
处理 ,清洗干净并采用真空干燥 ,粉碎到 60 目 ,加 8
倍量的水(质量比),加热至沸 ,保持 30 min ,过滤;
滤渣继续提取 2次 ,最后一次提取的滤渣加 8倍量
的体积分数95%乙醇 ,在超声功率 200 W下提取时
间 20 m in , 过滤;滤渣继续提取 2次 ,合并 3次乙醇
提取液 ,真空浓缩 ,真空干燥.
1. 2. 2　醇提取物的萃取和薄层层析分离
1)总三萜的萃取:醇提取物依次用石油醚 、乙
酸乙酯和正丁醇分别萃取 3次 ,各萃取液分别浓
缩 、干燥 ,得石油醚 、乙酸乙酯和正丁醇萃取物.
2)展开剂的选择:首先按点滴实验法[ 6] 确定展
开剂的底剂 ,将总三萜提取物溶液间隔地点在质量
分数为 5%羧甲基纤维素钠硅胶板上 ,溶剂挥发干
后 ,用吸满不同展开剂的毛细管依次将环己烷 、石
油醚 、乙酸乙酯 、正丁醇 、氯仿 、丙酮点在样品点的
中心 ,借毛细管的作用 ,使得展开溶剂从圆心向外
扩展 ,显色剂显色 ,形成不同的同心圆色谱 ,比较不
同展开剂的展开效果.
3)显色条件的选择:碘加热产生碘蒸汽直接显
色;三氯乙酸 、碘蒸汽 、硫酸甲醇和硫酸乙醇溶液用
喷枪分别喷在展开后晾干的薄板上 ,三氯乙酸薄板
以 105 ℃加热 20 min显色;硫酸甲醇和硫酸乙醇溶
液 105 ℃加热 5 ～ 10 min显色 ,比较不同显色剂的
显色效果.
4)熊果酸的液质联用分析:液相色谱条件:分
析柱:LunaC-18(2. 6 mm ×250 mm , 5 μm);V(流
动相乙腈)∶V(0. 1%甲酸水溶液)=60∶40;柱温:
30 ℃;体积流量:1 mL /min;进样量:20μL;检测波
长:205 nm .
质谱条件:离子方式:EIS-(m /z 200-1500);毛
细管电压:3. 88 kv , 锥孔电压:38 V;离子源温度:
120 ℃;脱溶剂气温度:250 ℃;光电倍增器电压:
650 v ;分析器真空度:2. 6 ～ 5 mBar;气体流量:
4. 2 L /h.
2　结果与讨论
2. 1　薄层层析分离条件的选择
2. 1. 1　展开剂的选择　从图 1可见 ,采用氯仿作
为基本展开剂时 ,在点样点周围的同心圆数量多于
其它溶剂 ,表明氯仿对大叶紫薇叶总三萜具有较好
的展开能力 ,可作为展开剂的底剂. 为使得被分离
物质在薄板上有较强的洗脱力 ,帮助化合物在薄板
上移动 ,可加入丙酮作为调节剂. 通过比较发现 ,采
用 V(氯仿)∶V(丙酮)=4∶1 作为展开剂 ,各斑点
具有较好的分离度.
1.石油醚;　2.氯仿;　3.乙酸乙酯;　4.丙酮;　5.正丁醇
图 1　不同溶剂对醇提取物的展开的影响
Fig. 1　The effect of different developer
2. 1. 2　显色条件的选择　三萜化合物常用的显色
剂有三氯乙酸 、碘蒸汽 、硫酸甲醇和硫酸乙醇等 ,这
些显色剂各有其优缺点. 三氯乙酸为显色剂时 ,在
100 ℃加热 20 min ,三萜类物质显黄色 ,但灵敏度不
高 ,有时需要紫外灯下观察以提高灵敏度;碘蒸汽
易挥发 ,显色后挥去碘 ,斑点可作定量分析 ,但它缺
乏特异性 ,对非三萜物质也显色;硫酸甲醇和硫酸
乙醇为显色剂时 ,105 ℃加热 5 ～ 10 min ,三萜类物
质显红褐色或紫色 ,都具有较高的灵敏度. 考虑到
乙醇无毒 ,价格便宜 ,所以选用硫酸乙醇为显色剂.
在此基础上 ,进一步优化显色剂中硫酸和乙醇的比
例 ,经不同质量分数的硫酸乙醇显色 ,结果见表 1.
　　从表 1可见 ,采用体积分数 10%硫酸乙醇进行
显色 ,斑点明显 ,背景浅 ,所以采用该体积分数的硫
酸乙醇作为显色剂.
66 无　锡　轻　工　大　学　学　报　　　　　　　　　　　　　第 24卷　
表 1　不同体积分数的硫酸乙醇显色效果
Tab. 1　The effect of dif ferent sulfuric acid ethanol concentra-
tion
硫酸乙醇
体积分数 /% 显色结果
5 斑点浅 , 背景浅
10 斑点明显 ,背景浅
20 斑点明显 ,背景深
2. 1. 3　薄层层析分离结果　对乙醇提取物分别采
用石油醚 、乙酸乙酯和正丁醇萃取的各组分进行薄
层分离 ,结果见图 2. 从图 2 可见 ,三萜类成分主要
存在于石油醚和乙酸乙酯萃取物中 ,石油醚和乙酸
乙酯萃取物中三萜类成分基本相同 ,由于石油醚组
分中还含有较多的低极性组分 ,产品呈油状 ,分离
困难 ,所以采用乙酸乙酯萃取物进行分离. 在制备
薄板上分离得条带 1 ～ 6 , 分别刮取各条带 ,得 6 个
样品.通过对所得的各样品进行降血糖功能测定 ,
发现样品 3 具有较强的降血糖功能 ,因此 ,对其进
行进一步的结构分析.
图 2　总三萜的萃取物的薄层层析分离
Fig. 2　TLC of triterpene
2. 2　结构分析
2. 2. 1　DSC 曲线　对样品 3 进行 DSC 测定 ,其结
果见图 3.从图 3可见 ,其熔点为 283 ～ 287 ℃,与熊
果酸相同 ,且熔距较短 ,表明其纯度较高;其焓值为
43. 727 J /g ,也与熊果酸相同.
图 3　样品 3 的 DSC曲线
Fig. 3　DSC of compound 3
2. 2. 2　紫外光谱　三萜类化合物一般具有较弱的
紫外吸收 ,仅具有较弱的末端吸收 ,从图 4可见 ,样
品 3的最大吸收为 206 nm ,与熊果酸相同.
图 4　样品 3的紫外光谱图
Fig. 4　UV of compound 3
2. 2. 3　红外光谱　三萜类化合物的结构分 A 区和
B区 , 红外光谱测定三萜类化合物的结构 ,主要是
根据区域 A 和区域 B的碳氢吸收来区别齐墩果烷 、
乌苏果烷等三萜化合物的基本骨架. 齐墩果烷型的
A 区有 2 个峰 (1392 ～ 1397 cm-1 , 1370 ～ 1355
cm-1),B区有 3个峰(1330 ～ 1315 cm-1 , 1383 ～ 1370
cm
-1 ,1364 ～ 1359 cm-1);乌苏果烷型的 A 区有 3个
峰(1392 ～ 1386 cm-1 , 1386 ～ 1370 cm-1 ,1364 ～ 1359
cm-1),B 区也有 3 个峰(1312 ～ 1308 cm-1 , 1276 ～
1270 cm-1 ,1250 ～ 1245 cm-1). 从图 5可见 ,样品 3
具有 A 的 3 个峰(1387. 10 cm-1 , 1376. 95 cm-1 ,
1359. 59 cm-1)和 B 区的 3 个峰(1310. 53 cm-1 ,
1273. 09 cm-1 , 1249. 20 cm-1), 具备乌苏果烷型的
结构.
图 5　样品 3 的红外图谱
Fig. 5　IR of compound #3
2. 2. 4　液质联用分析　对样品 3进行 HPLC /M S
分析 ,其总离子流图和质谱图见图 6 , 7 ,从质谱图
可见 ,其相对分子质量为 457. 1 ,与熊果酸的相对分
子质量相同.
67　第 1期 纵 伟等:大叶紫薇叶中熊果酸的分离纯化及结构
图 6　样品 3 的总离子流图
Fig. 6　TIC of compound 3
图 7　样品 3的质谱图
Fig. 7　MS of compound 3
3　结　论
采用以 V(氯仿)∶V(丙酮)=4∶1为展开剂 ,
可在硅胶板上将大叶紫薇中三萜化合物有效分离;
其中具有降血糖的功能性成分 3其熔点为 283 ～
287 ℃, 焓值为 43. 727 J /g , UV 最大吸收波长为
206 nm , IR光谱符合乌苏果烷型结构;MS 测定其
相对分子质量为 457 ,表明组分 3为熊果酸.
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(责任编辑:杨 萌)
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