全 文 ：不同产地布渣叶总黄酮含量及其清除自由
基活性研究
潘天玲 ,李坤平 ,林赞菲＊ ,黄碧玲＊
(广东药学院 药科学院 ,广东 广州 510006)
摘要:目的 测定 13个不同产地布渣叶样品中总黄酮含量及其清除自由基活性。方法 采用 Al(NO3)3-
NaNO
2
-NaOH体系比色法测定总黄酮含量,采用 1, 1-二苯基-2-苦基肼自由基(DPPH· )、羟自由基(· OH)和
超氧自由基(O2 -· )等模型测定布渣叶总黄酮清除自由基活性。结果 各产地总黄酮含量差异较大 , 其中
以广西来宾样品含量最高 ,达到了 55.22mg· g-1 ,平均为 27.06 mg· g-1。各产地总黄酮样品均具有清
除 DPPH·活性 ,其自由基清除率随供试品总黄酮浓度的增大而提高 , 呈现一定的量效关系;但其清除
· OH和 O2 -·活性与总黄酮浓度关系不明显。结论 不同产地布渣叶总黄酮含量差异较大;各产地布渣
叶总黄酮均具有较好的自由基清除活性。
关键词:布渣叶;总黄酮;自由基;清除活性
中图分类号:R284.1;R285.5　文献标识码:A　文章编号:1006-8783(2009)05-0452-03
ContentsoftotalflavonoidsinMicrocospaniculataL.anditsradical-scavenging
activity
PANTian-ling, LIKun-ping, LINZan-fei＊ , HUANGBi-ling＊
(DepartmentofPharmacy, GuangdongPharmaceuticalColege, Guangzhou510006, China)
Abstract:ObjectiveToanalyzethecontentsoftotalflavonoidsinMicrocospaniculataL.fromdiferent
habitatsandtheradical-scavengingactivityoftotalflavonoids.MethodsContentsoftotalflavonoidsinthe
extractswereanalyzedbyspectrophotometrybasedonAl(NO3 )3 -NaNO2-NaOHreactionsystem, andthe
radical-scavengingactivitytowards1, 1-diphenyl-2-picryhydrazyl(DPPH· )radical, hydroxylradical
(· OH)andsuperoxideanionradical(O2-· ), weredeterminedinvitro.ResultsContentsoftotalflavonoids
inMicrocospaniculataL.variedwithhabitatsand55.22 mg·g-1 wasthehighest.Theaveragecontent
was27.06 mg·g-1.Althesampleshadradical-scavengingactivityagainstDPPH· , · OHandO2-· .
Therewasacleardose-efectrelationshipbetweentheradical-scavengingactivityagainstDPPH· andthe
concentrationofflavonoids, butnothisrelationshipwasfoundwhenagainst· OHandO2-· .Conclusion
ContentsoftotalflavonoidsinMicrocospaniculataL.variedwithhabitats, andaltheplantshaveradical-
scavengingactivity.
Keywords:MicrocospaniculataL.;totalflavoniods;radical-scavengingactivity
＊广东药学院 2009届毕业实习生
收稿日期:2009-06-23;修回日期:2009-09-28
作者简介:潘天玲(1977-),女 , 硕士 ,实验师 , 从事药用植物
资源开发与利用研究。
　　自由基是生物体内化学性质极其活跃的物质 ,
其大量存在会对生物膜 、蛋白质 、核酸等生物大分子
造成危害 。研究表明 ,肿瘤 、衰老 、心脑血管等疾病
的发生与其有着密切的联系 [ 1, 2] 。黄酮类化合物是
自然界广泛存在的一类天然产物 ,具有抗氧化 、抗突
变 、抗衰老等多种生物活性 ,其自由基清除活性是当
前的研究热点之一 [ 1-3] 。
布渣叶 ,椴树科植物破布树(Microcospaniculata
L.)的叶 ,主要分布于我国广东 、广西 、海南等地 ,富
含黄酮类成分 [ 4-7] ,但未见有关其抗氧化和清除自
由基活性的报道。本文对不同产地布渣叶总黄酮含
量进行了分析 ,并选择了 DPPH· 、· OH和 O2 -·等
452
广东药学院学报 　
JournalofGuangdongPharmaceuticalColege　Oct.2009, 25(5) 　
体外模型对其自由基清除活性进行了考察 ,旨在为
其进一步的开发利用提供科学依据。
1　仪器与试药
数控超声波清洗机(KH-400 KDB型 ,昆山禾创
超声仪器有限公司 , 40 kHz, 320 W), RE-52AA旋转
蒸发器(河南巩义英峪予华仪器公司), TU-1810型
紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任
公司)。
D101大孔吸附树脂 (天津市海光化工有限公
司 );芦丁 (中国药品生物制品鉴定所 , 批号:
050923);1, 1-二苯基 -2-苦基肼 (DPPH, Sigma公
司);氢氧化钠 、亚硝酸钠 、硝酸铝 、乙醇 、甲醇 、水杨
酸 、双氧水 、硫酸亚铁 、三羟甲基氨基甲烷 、邻苯三
酚 、盐酸均为市售分析纯。布渣叶 , 2008年 7月 ～ 9
月采自广东广州 、阳江 、化州 、顺德 、中山 、沙坪 、阳
春 、龙口 、电白;广西来宾 、玉林 、武鸣;海南儋州等
地 ,由广州中医药大学中药学院李卫民教授鉴定为
椴树科植物破布树(MicrocospaniculataL.)的叶 ,干
燥 ,粉碎 ,备用;药材存放在广东药学院制药工程教
研室。
2　方法
2.1　供试品溶液的制备[ 6, 7]
精密称取不同产地布渣叶各 2.500 g,加入体积
分数 70%乙醇 50mL,于 30℃下超声提取 2次 ,第 1
次 30min,第 2次 20 min;合并两次滤液 ,减压回收
至无醇味 ,加水至 100 mL,静置 ,过滤 ,将滤液倒入
已放有 10g预处理好的 D101树脂的锥形瓶中 ,振
荡吸附 12h后过滤 ,分别用 50 mL去离子水 、30 mL
体积分数 20%乙醇和 30 mL体积分数 95%乙醇洗
脱;收集体积分数 95%乙醇洗脱液 ,减压蒸干后用
甲醇溶解并定容至 25 mL,即得。
2.2　标准曲线的制备 [ 5]
精密称取 120 ℃干燥至恒重的芦丁对照品 10.
2 mg,置 50 mL容量瓶内 ,用体积分数 70%乙醇溶
解并稀释至刻度 ,即得芦丁对照品溶液。精确吸取
0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.5、3.0 mL芦丁对照品溶
液于 10 mL量瓶中 ,分别补加体积分数 70%乙醇至
5 mL;然后顺次加入质量分数 5%NaNO2溶液 0.3
mL,放置 6 min,质量分数 10%Al(NO3)3溶液 0.3
mL,放置 6 min,质量分数 4%NaOH溶液 4mL,再加
入体积分数 70%乙醇溶液至刻度 ,摇匀 , 静置 15
min后于 510 nm处测定吸光度值 。以吸光度 A对
芦丁质量(m)进行线性回归 ,得到回归方程:A=
1.331 75 m-0.004 49(r=0.998 9)。在 0.081 6 ～
0.604mg范围内 ,线性关系良好 。
2.3　总黄酮含量的测定方法
取各待测样 0.1mL,按上述标准曲线显色方法
显色后在 510nm处测定吸光度值 A,根据上述标准
曲线方程计算总黄酮质量。
2.4 　清除 DPPH·活性测定[ 1, 2]
精密称取 DPPH2.74 mg,用 95%乙醇溶解并
定容至 100 mL。精密量取 DPPH溶液 2 mL,加入
0.1 mL经适当稀释的供试品溶液 ,混匀 , 30 min后
于 517 nm波长处测定其吸光度值 ,以(1)式计算清
除率 。
E(%)=A0 -AtA0 ×100% (1)
式中 , E:清除率;A0:初始 DPPH溶液的吸光度;At:
加入供试品溶液 30 min后 DPPH溶液吸光度 。
2.5　清除 ·OH活性测定
利用 Fenton反应进行测定 [ 2, 8] ,标准反应体系
中含 9.8mmoL/LH2O2 2mL, 9mmoL/LFeSO4 2mL,
9mmoL/L水杨酸乙醇溶液 2mL,供试品溶液 2mL;
以 H2O2启动反应 , 37℃反应 30min后在 510nm波
长处测吸光度值 ,以(2)式计算清除率。
E(%)=As-AbA0 -Ab×100% (2)
式中 E:清除率;A0:不加 H2O2反应体系吸光度;As:
标准反应体系吸光度;Ab:不加供试品反应体系吸
光度。
2.6　清除 O2 -·活性测定
采用邻苯三酚自氧化法 [ 2, 8] ,取 Tris-HCL缓冲
溶液(0.05moL/L, pH8.2)4.5 mL,供试品溶液 0.1
mL,混匀 ,加入 2.5mmoL/L邻苯三酚溶液 0.4 mL,
摇匀后于 25 ℃恒温水浴反应 4 min,最后加入 2滴
盐酸(8 moL/L)终止反应 ,测定溶液在 320nm波长
处的吸光度值 ,以(3)式计算清除率 。
E(%)=A0 -(As-Ab)A0 ×100% (3)
式中 E:清除率;A0:不加样品时反应体系的吸光度;
As:标准反应体系吸光度;Ab:不加邻苯三酚溶液反
应体系吸光度 。
3　结果与分析
13个不同产地布渣叶总黄酮及其总黄酮清除
DPPH· 、·OH和 O2 -·自由基活性分析结果见表 1。
453　第 5期　 潘天玲 ,等.不同产地布渣叶总黄酮含量及其清除自由基活性研究
表 1　不同产地布渣叶总黄酮及其总黄酮自由基清除活性结果
Table1　ContentsoftotalflavonoidsinMicrocospaniculataL.fromdiferenthabitats
样品序号 样品来源 采收时间 吸光度 w(总黄酮)/(mg· g-1)
自由基清除率 /%
DPPH· · OH O
2
-·
1 广西来宾 2008年 7月 0.732 55.22 75.19 30.81 55.51
2 广西玉林 2008年 7月 0.216 16.54 42.68 22.47 30.88
3 广西武鸣 2008年 7月 0.211 16.18 22.83 33.35 23.56
4 广东阳江 2008年 7月 0.718 53.98 71.91 33.91 52.58
5 广东中山 2008年 7月 0.460 34.87 44.77 33.71 39.52
6 广东龙口 2008年 8月 0.145 11.18 18.89 28.32 67.02
7 广东沙坪 2008年 8月 0.255 24.48 36.72 19.37 42.73
8 广东化州 2008年 8月 0.575 43.71 63.16 28.77 73.00
9 广东阳春 2008年 8月 0.184 14.10 21.51 30.30 66.14
10 广东顺德 2008年 8月 0.495 46.98 58.65 34.37 44.95
11 广东黄埔 2008年 9月 0.163 12.53 19.94 24.50 51.76
12 广东电白 2008年 7月 0.139 10.76 19.59 27.91 11.58
13 海南儋州 2008年 9月 0.146 11.20 19.04 28.24 19.27
　　由表 1可见 ,各产地布渣叶药材总黄酮含量差
异较大 , 其中以广西来宾样品含量最高 , 达到了
55.22 mg· g-1 ,广东电白样品总黄酮含量最低 ,仅
为 10.76 mg· g-1;不同产地样品平均总黄酮含量
为 27.06 mg·g-1。
13个样品均具有一定的清除 DPPH·的能力 ,
且其自由基清除率随供试品总黄酮浓度的增大而提
高 ,呈现一定的量效关系 ,其清除率(Y)和总黄酮浓
度(C)的关系可以表达为 Y=1.194 C+7.298(r=
0.966)。
同样 , 13个样品产地的布渣叶样品均具有一定
的清除 ·OH和 O2 -·的能力 ,但其量效关系不明显 ,
平均清除率分别为(28.925 ±4.626)%和(44.5±
19.147)%。整体上 ,对 · OH清除效果较稳定但清
除率较低 ,对 O2 -·大部分样品清除率较高 ,但不同产
地布渣叶总黄酮样品清除率差异较大 ,这可能与总
黄酮样品中具体的组分不同有较大关系 ,具体因素
还有待进一步探讨。
4　讨论
4.1　不同产地布渣叶因种源遗传性状 、生长的地理
环境 、采收季节等因素不同导致其总黄酮含量各异
是正常的。从上述分析结果来看 ,布渣叶药材的总
黄酮含量可以作为其质量控制指标 ,但此次研究选
择样本量较少 ,且未能考虑其采收时间等因素的影
响 ,其总黄酮平均含量 27.06 mg· g-1仅可作为药
材质量控制的参考依据。
4.2　由 13个不同产地布渣叶总黄酮自由基清除率
的测定结果可知 ,布渣叶总黄酮具有清除 DPPH· 、
·OH和 O2 -·自由基活性 ,是一种值得开发的自由基
清除剂 ,其构效关系尚需进一步研究。
致谢:感谢广东药学院黄纪云 、简银彩 、张樱丰
等同学 ,广西大学陈丛谨老师和海南大学陈致水老
师在研究过程中给予的帮助 。
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454 广东药学院学报　 第 25卷