全 文 ：九江医学 2 003 年第 81 卷第 4 期 ;
J iju i
a n g M de ie a l J ou ma l 2 00 3
,
18 ( 4 ) 193
A B 一 8 树脂分离提取复叶耳蔗中总黄酮含量的测定
张 磊 李辉敏
九江学院医学院药学教研室 (九江 332 00 )
摘要 目的 :测定复叶耳藏中总黄酮含量 ,并比较不同浓度乙醇解吸附 BA 一 8 树脂上复叶耳藏中总黄酮的作
用强弱 。 方法 : A B 一 8 大孔吸附树脂吸附复叶耳蔽总黄酮启用不同浓度乙醇解吸附 , 采用紫外分光光度法测定其
黄酮含量 。 结果 : 复叶耳燕每 10 9 生药中含总黄酮量为 0 . 53 57 9 。 5 % 乙 醇洗脱液中含黄酮量 为总黄酮的
0
.
7 90 5%
,
50 % 乙醇洗脱液中含黄酮量为总黄酮的 65 . 2 76 % , 95 % 乙醇洗脱液中含黄酮量为总黄酮的 2一 689 % 。 结
论 : 复叶耳旅中含有大量黄酮 。 以 50 % 乙醇为流动相解吸附 , 分离提取基本完全
关键词 复叶耳旅 补A」3 一 8 大孔吸附树脂 ;总黄酮
中国图书分类法分类号 R 28 9 . 5
D E T E C T I ON AN D E X T R A C T IO N O F T O T A L F L A V O N E F R OM
A RA C H N IO D E S E X I L I S B Y A B 一 8 R E S IN
Z h a n g cL i L i H
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3 32 0 0 0 )
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.
79 05 % o f t h e t o n , l fl ;、 vo n e a l l d 6 5
.
27 6% in 50% e tha on l w as h i
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.
6 89 % in 9 5% w a s h i n g n u id
,
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复叶耳 ’旅系鳞毛 藏科复叶耳旅 ( Ar ac h n iod es
e xi li s )
, 俗名细 叶凤尾草 , 药用其根茎 ,具有清热 _利
湿作用 , 可用于痢疾 、 烫 火伤等川 。 复叶耳旅所含
主要化学成分为黄酮类化合物和三菇类等 。 大孔吸
附树脂是近年来国内外新发展 的处理技术 , 并在医
药领域 (特别是天然药物精制 )中广为运用 , 是提取
精材中草药中水溶性有效成分的一种有效方法 2[] 。
本文用 BA 一 8 大孔吸附树脂分离提取复叶耳旅总
黄酮 , 以芦丁为对照品 ,用二紫外分光光度法测定其含
量 , 并比较了不同浓度乙醇解吸附 月3一 8 树脂上黄
酮的效果 。
i 材料
1
.
1 材料 T U 一 19 01 型紫外分光光度计 (北京普
析通 _用 仪器有 限责任公 司 ) ; AW 320 型电 子天 平
( S H IM A D Z U OO R P O R A T IO N ) ; R E 一 52 A A 型旋
转蒸发器 (上海亚荣生化仪器厂 ) 。 芦丁标准 品 (中-
国药品生物制品鉴定所 ) 。 复叶耳获根茎 (采自天然
野生品 ,经九江学院医学院姚果源教授鉴定 ) 。 月 3
一 8 大孔吸附树脂 (南开大学化工厂 ) 。
1
.
2 方法
1
.
2
.
1 乙醇煎煮提取 取复叶耳威根茎 6 00 9 , 第
一次用 8 倍量乙醇煎煮 Z .h 第二次用 6 倍量乙醇煎
煮 -l h ,第三次用 6 倍量乙醇煎煮 l h ,过滤 , 滤液合
并 , 5 0 ℃ 下减压 回收乙醇 ,得流浸膏。
1
.么 2 大孔吸附树脂柱的制备 .3[ ” 〕 取市售朋 -
8 大孔吸附树脂 ,用乙醇浸泡 24 h, 充分溶胀 。 以乙
醇湿法装柱 。 用乙醇反洗 , 冲去小的颗粒和碎片 ,继
续用乙醇在柱 上流动清洗 。 不时检测流出的乙醇 ,
至与水混合不 成白色浑浊为止 (取 1 m L 乙醇加 5
m L 水 ) 。 然后 以一大量的蒸馏水洗去乙醇 ,备用 。
1
.
2
.
3 大孔吸附树脂分离提取总黄酮 :取所得复叶
9 1 4九江医学 0 0 3 2年
耳蔽醇提流浸膏 609 (相当于生药 31 89)减压挥干
溶剂后 以适量甲醇溶解 ,过滤 ,得滤液 。 将滤液与适
量已处理的 AB 一 8 大孔吸附树脂拌样 ,挥去甲醇 。
将挥干甲醇的样品加于 A B 一 8 大孔吸附树脂柱上 。
用蒸馏水洗去杂质后 , 用 5% 、 50 % 、 95% 乙醇为流
动相梯度解吸附 ,分别洗至流出液近无色 , 然后分别
收集流出液 , 50 ℃减压回收乙醇 ,浓缩备用 。
1
.
2
.
4 总黄酮的含量测定
( 1 )标准液的配制川 : 精密称取在 120 ℃减压
干燥至恒重的芦丁对照品 10 . 6 m g , 置 50 m L 容量
瓶中 , 加 60 % 乙醇溶液稀释至刻度 , 摇匀 , 即得
0
.
2 1 2 11 19m/ L 的标准液 。
( 2) 标准曲线的绘制 :见图 1 。 精密吸取标准液
1
.
0 m l
创 、
2
.
0 m L
、
3
.
0 m L
、
4
.
0 m L
、
5
.
0 m L
、
6
.
0 m L
和 0 m (L 空白,), 分别置 10 m L容量瓶中 ,各加 60 %
乙醇溶液使成 7 m L , 精密加人 5 % 亚硝 酸 ,钠 0 . 3
m L
,摇匀 ,放置 6 m in , 精密加入 10 % 三氯化铝溶液
0
.
3 m L
,摇匀 ,放置 10 m in ,加人 l mo !几 ,氢氧化钠
溶液 2 m L分别用 6 0 % 乙醇稀释至刻度 ,摇匀 ,放置
10 m in
, 置比色杯中 ,在 5 10 n m 处测吸光度 , 测 3 次
取平均值 ,计算标准曲线的回归方程和相关系数 ,得
到回归方程为 : A = 0 . 0 3 9 1 + 14 . 6 18 C , r = 0 . 9 9 9 1。
中 , 于旋转蒸发仪上减压 70 ℃蒸干 , 加 60 % 乙醇溶
解 ’ ,过滤 、 用 60 % :乙醇洗涤圆底烧瓶 3 次 , 每次 2
m L
,合并滤液 。 滤蔽置于 25 m L 容量瓶中 ,加 60 %
乙醇至刻度 ,摇匀 。 分别在各容量瓶中精密量取 10
m l
甘于 50 m L 容量瓶中 , 同标准曲线下标准品的处
理 , 于 sl o nl 处测吸光度 ,分别计算其黄酮含量 。
2 结果
复叶耳蔗乙醇总提取物中含总黄酮量为 10 0 9
生药中有 0 . 58 83 9 ,各乙醇梯度洗脱液中含黄酮 的
结果 见表 1。
表 1 不同浓度乙醇解吸附对总黄酮含量的影响
乙醇浓度 吸光度 含量 ( g / 10 9 生药 ) 提取效率 /%
5%
5 0%
9 5%
0
.
8 78
0
.
9 18
0
.
57 8
0
.
0 04 6
0 , 3 8 4又
0
.
0 158
0
.
78
6 5
.
7 6
2
.
7 0
回归曲线
浓度
O
;
02 0
, 以 . 。二06 0 . 08 0 . 1 0 . 12
吸光度rltL.FF.r1,l吐L.卜`LI.0ǎb49助,二白肠6几`L-O众.0
图 l 总黄酮含量测定标准曲线
样品的处理 : 分别取复叶耳蔽乙醇提取物 0 . 5 9
(相当于生药 1 . 154 9 )和 5 % 乙醇洗脱液浓缩并定
容到 10 m L .后取 2 . 5 m L 、 50 % 乙醇洗脱液浓缩并
定容到 2 50 m L 后取 3 . 5 m L 、 95 % 乙醇洗脱液浓缩
并定容到 2 5 0 m L后取 5 m L各适量 ,置于圆底烧瓶
3 讨论
黄酮类化合物易溶于甲醇 、 乙醇 、 醋酸乙醋 、 乙
醚等有机溶剂中。 而乙醇对人体较为安全 , 因此本
法选 6 0 % 乙醇为溶剂提取总黄酮 。 胆 一 8 大孔吸
附树脂为弱极性 ,黄酮类具有多酚结构和糖贰链 ,具
有一定的极性和亲水性 ,生成氢键的能力较强 , 有利
于弱极性树脂的吸附 , 因此本法选用 A B 一 8 树脂分
离提取总黄酮 。 通过本次实验研究证明 , 每 10 9
复叶耳旅生药含黄酮量为 0 . 58 83 9 。 ’ 由各个洗脱液
得到的黄酮量可知 , 50 %乙醇作为洗脱液可基本洗
脱完全 。 `
参 考 文 献
1 丁恒山 . 中国药用抱子植物 .上海 : 上海科技出版社 , 1982 . 2 30
2 马山 . 大孔吸附树脂在药学领域中的研究应用 . 中成药 , 19 97 , 19
( ! 2) :沐
3 董方言. 现代实用中药新剂型新技术 . 北京 : 人民卫生.出版社 ,
20 0 1
.
4 2 7
4 张妍 . 山植中总黄酮几种提取分离方法的考察及含量测定 . 哈尔
滨医科大学学报 , 20 1 , 3 5 ( 3) .二 18 3
( 20 03
一 10 一 28 收福 )
责`任编辑 梁光霞 )
.( 上接 19 2 页 ) 临床大力推广 。 3
参 考 文 献
1 T h e N a t io : l a l ln st it u t e of N
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e、一t e .义 h e n l ie s t or ke . N E ,艰 1 J M司 , 19 9 5 , 3 3 3 15 8 1
2 中华 l公学会 . 脑卒 中患 者临床神经 功能缺损程度 _评分标准
( 19 9 5 )
. 中华神经科杂志 . 19 9 6 , 2 9 ( 6 ) : 3 8 7
Ri r艰 le b PA , 段h e lli r堪 e r PD . cS 】甘 a nz C , aH e ke W . T I、 rol l lbo lyt ie
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,
2 0 0 2
、
3 3 ( 5 ) : 14 3 7
毛春 ,张苏明 缺血性脑卒中超早期溶栓治疗的进展 , 内科急危重
症杂志 , 2似 ) , 6 (2 ) : 94
( 200 3 一 06 一 16 收稿 )
.
(责任编辑 梁光馥 )