全 文 ：2013年 云南中医学院学报 第36卷
正交试验法优选滇丹参中水溶性成分提取工艺
柳丽娟 1，马云淑 2，黄金娥 2，马 莎 3
（1.德阳广播电视大学，四川德阳 618000；2.云南中医学院中药学院，云南昆明 650500；
3.曲靖医学高等专科学校，云南曲靖 655000）
摘要：目的 用正交试验法优选滇丹参水溶性有效成分丹酚酸 B的最佳提取工艺。方法 以高效液相色谱法测
得的丹酚酸 B的含量和提取物出膏率为指标，采用以乙醇浓度、加醇量、提取时间、提取次数为影响因素的正交试验
法，对滇丹参中丹酚酸 B的提取工艺进行优选。结果 滇丹参中水溶性成分丹酚酸 B的最优提取工艺为 8倍量 20%
乙醇回流提取 3次，每次 1h。结论 此工艺稳定可行，可为滇丹参水溶性有效成分的提取提供实验依据。
关键词：滇丹参；丹酚酸 B；高效液相色谱；正交试验；滇丹参出膏率
中图分类号：R284.2文献标志码：A 文章编号：1000- 2723（ 01）01- 0012- 03
收稿日期：2012- 03- 27修回日期：2013- 01- 04
作者简介：柳丽娟（1984～），女，陕西延安人，助教，主要从事药学教育和研究工作。
滇丹参为唇形科植物滇丹参（Salvia yunnanen－
sisC.H.Wright）的干燥根和根茎。滇丹参是云南楚雄
彝族常用药，也称紫丹参。滇丹参与传统用药丹参
功用和主治相同，都具有祛瘀止痛，活血通经，清心
除烦之功效。临床上常用来治疗月经不调，经闭痛
经，癥瘕积聚，胸腹刺痛，热痹疼痛，疮疡肿痛，心烦
不眠；肝脾肿大，心绞痛等[1]。
现代科学研究表明，丹参主要有效成分包括脂
溶性成分和水溶性成分两大类[2]。水溶性成分中丹
酚酸（salvianolic acids）为活性成分，具有抗动脉粥
样硬化、保护心肌细胞、防心脑缺血损伤、抗血小板
凝聚、抗肝纤维化、改善记忆、抗肿瘤等作用[3-4]。以
丹酚酸 B为有效成分的药物已成为研究开发的热
点。滇丹参与丹参具有相同的活性成分，相关文献
中关于云南用滇丹参的研究报告甚少，特别是关于
滇丹参中水溶性丹酚酸类成分。本研究同时以出膏
率和以 HPLC测定丹酚酸 B含量为指标，采用正交
试验对滇丹参提取工艺进行多因素优选。实验结果
为含滇丹参的中药制剂中丹酚酸 B的提取提供实
验依据与参考。现将结果报道如下。
1 仪器与试药
1.1 试药
实验用滇丹参（Salvia yunnanensisC.H.Wright）
为楚雄老拨云堂药业有限责任公司提供。丹酚酸 B
对照品（批号：111562-200812），购于中国生物药品
鉴定所。甲醇为色谱纯，娃哈哈纯净水，其余试剂均
为分析纯。
1.2 仪器
TYS-500A型高速多功能粉碎机（浙江省永康
市红太阳机电有限公司），TDA温度控制仪（北京永
光明医疗仪器厂），高效液相色谱仪（四元泵，美国
Aglient 1100 series，二极管阵列检测器），电子分析
天平，ZK-82A电热真空干燥器（上海实验仪器厂），
DHG-9023A型电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科
技有限公司），超声仪（上海科导超声仪器有限公
司），20mL移液管。
2 药材的提取
2.1 提取正交设计[5-7]
选用 L9（34）正交设计表，4 因素为：醇浓度、加
醇量、提取时间、提取次数，每因素设 3水平。试验
因素与水平见表 1。
表 1 试验因素与水平表
水平
因素
A 乙醇
浓度/%
B 加醇
量/倍
C 提取
时间/h
D提取
次数
1
2
3
10
20
30
6
8
10
0.5
1
1.5
1
2
3
JournalofYunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine
云南中医学院学报第36卷第1期
2013年2月
Vol. 36 No. 1
2. 2013
12
第1期
2.2 丹参酚酸 B的提取工艺
经过查阅文献，丹参酚酸 B在稀醇溶液中溶解
性好，故以稀醇提取为佳。取滇丹参药材粉末 9份
（5g/份），按表 1设计提取。实验平行 3组，提取液过
滤后减压浓缩得滇丹参浸膏，以出膏率及其丹酚酸
B含量为指标，考察滇丹参药材提取最佳条件参数。
3 测定方法与结果
3.1 色谱条件[8]
采用高效液相色谱法，色谱柱 Lichrospher
1C18254F RP，250mm×4.6mm，5μm。流动相：甲醇-
乙睛-甲酸-水（30：10：1：59），柱温 20℃，进样量
10μL，流速 1mL/min，检测波长 286nm，运行时间
20min。
3.2 标准曲线
精密称定丹酚酸 B对照品 1mg，加 75%的甲醇
定容至 10mL。制成浓度为 0.1mg/mL标准品液，分
别精密吸取 2μL、5μL、10μL、15μL、20μL、25μL 注
入高效液相色谱仪，按上述条件测定，丹酚酸 B的
保留时间约为 13min，见图 1。以进样量 x（μg）为横
坐标，峰面积 y（mAU）为纵坐标，得回归直线方程
y=908.2x，r2=1。表明丹酚酸 B在 0～2.5ug范围内具
有良好的线性关系。
A. 丹酚酸 B标准品 B. 样品
图 1 丹酚酸 B高效液相色谱图
3.3 精密度实验
分别精密量取丹酚酸 B对照品溶液（C=0.1mg/
mL）10uL，注入色谱仪，平行进样 5次，以峰面积值
计算，其RSD=0.73%.
3.4 重复性实验
精密吸取样品的溶液，取样 10uL，连续进样 6
次，记录色谱峰面积，峰面积基本保持不变，表明此
色谱条件重复性良好，RSD=0.76%.
3.5 稳定性实验
精密吸取样品溶液，在室温下放置，分别于
0，2，4，6，8，24h 取样 10uL，记录色谱峰面积，峰面
积基本保持不变，表明样品溶液在 24h内保持稳
定，RSD=0.94%.
3.6 加样回收率实验
取已知含量的样品 10mg，加入与样品具有相
同量的丹酚酸 B 对照品，加 75%的甲醇定容至
20mL超声溶解，过滤，取续滤液过 0.45um 微孔滤
膜，进高效液相色谱仪检测。平均回收率为 96.89%，
RSD=0.98%.
3.7 样品的测定
取滇丹参粗粉 5g/份，按正交表中所列条件煎
煮，合并煎液。以 3 000r/min转速离心 20 min除杂，
澄清液减压浓缩，浓缩液转移至蒸发皿中水浴浓缩
至干，再置 40℃烘箱中干燥至恒重，取出，置干燥器
中，冷却至室温，称重，计算干膏收率，即出膏率，结
果见表 2。
精密称取提取干燥物 20mg，加 75%的甲醇定
容至 20mL超声溶解，过滤，取续滤液过 0.45um微
孔滤膜，进样高效液相色谱仪，按标准曲线项下方
法测定峰面积，计算滇丹参原生药材中丹酚酸 B的
提取量，结果见表 2。
3.8 结果
试验重复 3次后，结果见表 2与表 3。直观分析
可知影响出膏率的因素大小顺序为：提取次数>加
醇量>乙醇浓度>提取时间，其最佳提取参数为
A2B3C1D3；影响丹酚酸 B含量的因素大小顺序为：提
取次数>加醇量>提取时间>乙醇浓度，其最佳提取
参数为 A2B3C1D3。方差分析结果表明，对于出膏率，
柳丽娟，等：正交试验法优选滇丹参中水溶性成分提取工艺
13
2013年 云南中医学院学报 第36卷
表 2 滇丹参中丹酚酸 B正交实验结果（n=3）
实验号 A B C D 出膏率/%
原生药材中丹酚酸 B
的提取量/mg/g
1
2
3
4
5
6
7
8
9
K1
K2
K3
R
1
1
1
2
2
2
3
3
3
53.24/47.43*
58.16/59.21
49.52/50.83
2.88/3.39
1
2
3
1
2
3
1
2
3
44.72/44.94
54.64/53.83
61.56/58.71
5.61/4.59
1
2
3
2
3
1
3
1
3
56.68/58.3
53.28/52.05
50.97/47.13
1.90/3.72
1
2
3
3
1
2
2
3
1
29.02/29.55
62.09/61.60
69.81/66.32
13.60/12.26
7.5780
20.7750
24.4880
21.6810
10.620
25.8560
15.4620
23.2420
10.820
∑Y=160.99
7.5801
19.1478
20.7032
21.6807
10.7488
26.7814
15.6744
23.9347
11.2233
∑Y=157.47
注：*：出膏率/原生药材中丹酚酸 B提取量
提取次数影响有显著性意义；对丹酚酸 B提取率，
各因素影响均没有显著性意义。综合直观分析和方
差分析，选择最终条件为 A2B2C1D3。以此条件提取滇
丹参粗粉 3 批，每批 5g，提取出膏率平均为
25.25%，RSD=2.86%（n=3），丹酚酸 B 含量平均为
25.53mg/g，RSD=2.49%（n=3）。可见丹酚酸 B含量较
高，说明提取条件稳定可行。
4 讨论
滇丹参中丹酚酸类成分为其主要有效成分及
活性成分，但其长时间受热或溶于溶剂中具有不稳
定性，含量会降低。在滇丹参的提取过程中，应综合
考虑这两方面的因素。本实验最终选择 8倍量 20%
乙醇提取 3次，每次 1h。
在测定滇丹参出膏率时，考虑到丹酚酸 B成
分遇热不稳定，为尽量减少干燥时丹酚酸 B成分的
损耗导致含量测定中的其提取量降低，故将样品置
40℃烘箱中干燥至恒重。
目前，对滇丹参中丹酚酸 B的提取条件考察方
面的文献报道为数尚少，多数报道是考察丹参中丹
酚酸 B的提取工艺[5-6]。且相关报道仅认为低浓度的
乙醇对丹参中丹酚酸 B的提取条件较优，尚未见具
体考察比较低醇（10%，20%，30%乙醇）对丹酚酸 B
提取的影响。
参考文献
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[6] 叶勇，谭汉梯，江帅. 正交试验法优选丹参中丹酚酸 B的
（下转第 21页）
注：出膏率/原生药材中丹酚酸 B提取量，F临界值 F0.01（1，2）=99；F0.05（1，2）=19，P*<0.05。
表 3 方差分析表
方差来源 离差平方和 自由度 均方（MS） F值
A
B
C
D
误差
12.50/24.5*
47.78/32.51
5.49/20.89
313.07/266.81
5.49/20.89
2
2
2
2
2
6.25/12.25
23.89/16.26
2.75/10.45
156.53/133.41
2.75/10.25
2.28/1.19
8.70/1.56
1/1
56.99*/12.77
14
第1期
（上接第 14页）
提取工艺[J]. 湖南中医药大学学报，2006，26（6）：22.
[7] 赵琦，张军武. 正交试验法优选黄芪中总黄酮提取工艺
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[8] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典 [S]. 一部. 北京：
化学工业出版社，2010：22. （编辑：徐建平）
Study on Extracting Process of Water Soluble Component of Salvia yunnanensis C. H. Wright
LIU Li-juan1，MA Yun-shu2，HUANG jin-e2，MA Sha3
（1. Deyang Radio and Television University，Deyang Sichuan 618000；2. Yunnan University of Traditional Chinese Medicine，
Kunming Yunnan 650500；3. Journal of Qujing Medicine College，Qujing Yunnan 655000）
ABSTRACT：Objective To optimize the extracting process of the water-soluble active component of Salvia yunnanensis C. H.
Wright by orthogonal design. Methods The extracting process was studied by orthogonal design，which includes ethanol concentration
and alcohol amount and extracting hours and extracting times，with the content of salvianolic acid B by RP-HPLC and the yield of
extraction of the Salvia yunnanensisC. H. Wright. as the indexes for screening the extracting condition. Results The best extraction
condition of salvianolic acid B from Salvia yunnanensis C. H. Wright. was：adding eight times 20％ ethyl alcohol，extracting for 3
times，each time 1hr. Conclusion The optimized extracting process for salvianolic acid B from Salvia yunnanensisC. H. Wright was
satable and feasible with operability，and can provide experimental evidence for the extraction of the water-soluble active component
of Salvia yunnanensisC. H. Wright．
KEY WORDS：Salvia yunnanensisC. H. Wright；salvianolic acid B；RP -HPLC；orthogonal design；yield of extraction of the
Salvia yunnanensisC. H. Wright；
现代研究也证实活血化瘀对肺胀的重要性，如
廖小明、钟小兰[4]通过测定 76例 COPD患者以及 20
例健康人的血液流变学、血气分析，并观察活血化
瘀治疗后 COPD 患者各项指标改善情况，得出
COPD患者在血液流变学、动脉血气分析等检查结
果上存在明显异常，经活血化瘀法治疗后血液粘度
降低，血氧上升，二氧化碳下降。并进一步探究了活
血化瘀法改善肺微循环和预防肺小动脉血栓的机
制，主要是通过保护肺血管内皮细胞、降低血液粘
度及红细胞聚集这几个方面实现的。
综上所述，由于肺胀经常反复发作，迁延不愈，
把握其病机对于辨证施治也显得尤为重要。血瘀不
仅是肺胀病程中的必然产物和病理归宿，同时血瘀
也是在肺胀的早期就出现的病机改变，也是导致肺
胀经久不愈的重要原因。因此在临床上，对于肺胀早
期的患者，或是还没有发展为肺胀的其他肺系疾病
的患者，如果早期就应用活血化瘀的方法，根据病情
配合祛痰、健脾、纳肾等治法，就可以阻断血瘀证的
形成，畅通肺络，不仅可以治疗相应的症状，还可以
减缓肺胀等疾病的进展，可取得较好的临床疗效。
参考文献
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用[J]. 中国民族民间医药，2009，07：119-120.
（编辑：岳胜难）
Analysis of“Lung Connecting all Vessels”and Lung Distention
ZHANG Wei1, GU Ming-ming2
（1. Affiliated Hospital of Shandong University of TCM，Jinan Shangdong 250011；
2． Shandong University of TCM，Jinan Shandong 250014）
ABSTRACT：Based on the physiological function of lung in linking all vessels：lung’s regulating action towards blood circula－
tion，blood fluid and blood sport，this paper is to discuss the pathological mechanism of pulmonary distension caused by dysfunction of
lung in linking all the vessels through combining with clinics.
KEY WORDS：convergence of vessels in the lung；lung distension；stasis of blood
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
张 伟，等：浅析“肺朝百脉”与肺胀
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