全 文 ：· 中药检定 ·
H P LC 一
李福荣` *,史卫锋
271000 )
M S 法测定白花丹参中丹酚酸 B 的含量 “
2 ,夏作理 2” ( 1 . 泰山医学院药学院,泰安市 271 016 ; 2 . 泰山医学院生命科学研究所,泰安市
中图分类号 R 28 4 . 1 : R 9 27 . 2 文献标识码 A 文章编号 1 ()0 1一 0 408 (2 00 7 )2 1一 163 7一 0 2
摘 要 目的 : 建立以 高效液相色谱 一 质谱法测 定白花丹参中丹酚酸 B 含量的方法 。 方 法 : 色谱柱为 S y m m et yr fi le d R P CI ,
( 150m m 又 2
.
l m m
,
3
.
5x, m )
, 流动相为 甲醇 一 水 , 流速为 o . Z m L · m i n ` ,检测波长为 Z s s n m : 质谱为 W a t e r s m ie r o m a s s ZQ 40 00 质
谱仪 , 离子模式为选择 离子 ( sI R ) 。 结果 : 丹酚酸 B 在 0 . 05 一 60 昭 · m L 一 `浓度范围内与峰面积积分值呈 良好线性关 系 ( : = 0 , 9 9
8) ; 平均加样回收率为 9 . 18( 沁 , R S D = 0 . 4 % ( n 一 3) 。 结论 : 本方法可为白花丹参的质量评价和道地药材质量标准的建立提供理
论依据 。
关键词 高效液相色谱 一 质谱 ; 白花丹参 ;丹酚酸 B ;含量测定
D e t e r m i n a t i o n o f S a l v i a n o l i e A c i d B i n aS l
v i a m i l t i o r r h i z a B g e
.
f
.
a lb a b y H P L C
·
M S
L l F u r o n g ( P h
a rm a e e u t i e a l S e h o o l o f T a i s h a n M e d i e a l oC l l
e g e
,
T a i a n 2 7 1 0 1 6
,
C h i n a )
S H I W
e i f e n g
,
X I A Z u o l i ( I
n s t i t u t e o f L i f e S e i e n e e s
,
T a is h a n M e d ie a l C o l le g e
,
T a i a n 2 7 10 0 0
,
C h i n a
A B ST R A C T O BJ E C T IV E
: T o d e t e r m i n e S a lv ia n o li e a e id B i n S a l二 ia , n i l t io r r h i z a B g e
.
f
.
a l b a b y H P L C
一
M S
.
M E T H O D S
:
T h e s a m p le w a s s e p a r a t e d o n S y m m e t r y fi e l d R P C , s ( 150m m X 2
.
lm m
,
3
.
5拌m ) , e o l u m n . T h e m o b i le p h a s e e o n s is t e d o f
m e t h a n o l
一
w
a t e r w it h a f lo w r a t e o f 0
.
2m L
·
m i n
一 l . T h e d e t e e t io n w a v e l e n g t h w a s 28 5 n m ; t h e M S w
a s
W
a t e r s m ie r o m a s s
Z Q 4 00 0
, a n d t h e io n m o d e w a s S IR io n
.
R E S U L T S : T h e li n e a r r a n g e o f s a lv ia n o li e a e i d B w a s o
.
0 5一 6即g · m L 一 , ( r = 0 . 9 99 8 ) ,
a n d t h e a v e r a g e r e e o v e r y w a s 9 9
.
18 %
,
R S D = 0
.
44 % (
n = 3 )
.
CO N C L U S IO N : T h e d e t e r m in a t i o n m e t h o d h a s p r o v i d e d a
t h e o r e t i e a l b a s i、 fo r t h e q u a li t y e v a l u a t i o n o f S a l刀 ia m i l t i o r hr i z a B g e
.
f
.
a l b a a n d e s t a b li s hm e n t o f q u a li t y e r i t e r ia o f g e n u i n e
d r u g s
,
K E Y W O R D S H P L C
一
M S ; S
a
l刃 ia 刀: i l z i o r hr i z a B g e
.
f
.
a l b a ; S a l v i a n o l ie a e id B ; C o n t e n t d e t e r m i n a t io n
白花丹参是唇型科植物丹参 S o l v iu 。 : ilt i or 从 i az B g 。 .
的白花变型 , 为山东特有珍稀物种 1 2 ’ 。 丹参味苦 , 性微寒 , 人
血 、肝经 , 具有祛痰止痛 、活血通经 、清心除烦等功效 ”` ,l4 。 白花
丹参除具有丹参的功效和用途外 , 还对治疗血栓闭塞性脉管炎
具有独特疗效 l5] 。 白花丹参同丹参一样 , 含有 2 种重要成分 ,分
别为脂溶性的丹参酮类和水溶性的丹酚酸类 “` ’。 本文采用高效
液相色谱 一 质谱 ( H P L C 一 M )S 技术 , 对白花丹参中丹酚酸 B
的含量进行了测定 。
1 材料
1
.
1 仪器
粉碎机 (青州市益康中药机械有限公司 ) ; K Q 22 0 B 型超
声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司 ) ; 微量进样器 (上海医
用激光仪器厂 ) ; 2 69 5 液相色谱 一 ZQ 400 质谱联用仪 (美国
w
a t e r s 公司 ) ; 3 K 3 0 离心机 (德国 S ig m a 公司 ) 。
1
.
2 试药
丹酚酸 B 对照品 (中国药品生物制品检定所 , 批号 :
一115 62 一 2 004 0 2 ) ; 白花丹参 (采 自泰山脚下 , 经泰山医学院药
学院中药实验室李同德高级实验师鉴定为正品 ) ; 甲醇 (色谱
纯 , 美国 T e d ia 公司 ) ; 水为去离子水 (法国 M il lio n 一 p o r e 公
司 ) ;其余试剂均为分析纯 。
△ 山东省中医药管理局资助项目 (20 03 132 )
* 讲师 ,硕士 。 研究方向 : 药物化学 。 电话 : 0 53 8 一 6 2 2 9 8 3 9 。 E 一 m a :il
f r li@ t s m e
.
e d u
.
e n
件通讯作者 : 教授 。 研究方向 : 中药药理 。 电话 : 0 538 一 6 2 22 26 0
E二 a 11: z lx i a @ t s m e . e d u . e n
2 方法与结果
2
.
1 溶液的配制
2
.
1
.
1 标准溶液的配制 : 准确称取丹酚酸 B 对照品 0 . l m g ,
用 50 % 甲醇溶解于 20 m L 容量瓶中 , 定容 ,作为标准溶液。
2
.
1
.
2 供试品溶液的配制 : 将白花丹参粉碎 , 取 1 9 , 溶于
I Om L 水中 , 60℃恒温超声震荡 hl , 然后在离心机中以 3 50O r ·
m in
一 `离心震荡 10 m in ,将上层液取出 , 在下层沉淀中加 6 m L
水 , 60 ℃恒温超声震荡 3 0nr in ,再放人离心机中以 3 SO0r · m in `
离心 10rn in ,取上清液 ,将 2 次上清液合并 , 定容至 2 5m L ,将定容
好的溶液通过 0 . 4印 m 微孔滤膜过滤 , 取 1 20 拜L 滤液 , 加人
3 00 2
,
L 甲醇 , 即得 。
2
.
2 色谱条件
色 谱 柱 : S y m m e t r y fi e ld R P C l s ( 150m m X 2 . l m m ,
3
.
5拜m ;) 流动相 : 甲醇 一水 (梯度洗脱 , 在 20 m in 内甲醇体积分
数从 20 % 线性上升到 60 % ) ;流速 : O . Zm L · m in ’ , 检测波长 :
2 85 n m ;进样量 : 2 0拜L ;柱温 :室温 。
2
.
3 M S 条件
离子源 : E SI ; 极性 : 正离子 ; 毛细管电压 : 3 . sk V ; 锥孔电
压 : 30 V ;萃取锥孔电压 : 3 V ;射频六极杆透镜电压 : 一 0 . 2V ; 源
温度 : 1 0 5℃ ;去溶剂温度 : 160℃ ;去溶剂气流量 : 350 L · h ` ;锥
孔气流量 : 30 L · h 一 ` 。
2
.
4 数据处理系统
M
a s s l y n x 4
.
0 数据处理工作站 。
2
.
5 离子模式选择
由于丹酚酸 B 分子中含有大量的酚经基和竣基 , 呈酸性 ,
中国药房 2 0 0 7年第 1 8 卷第 2 1 期 C h in a P h a r m a e y 2 0 0 7 V o l . 1 8 N o . 2 1 · 16 3 7 ·
故选择负离子扫描模式 ; 又由于分子结构容易断裂 , 断裂后碎
片 m一H 为 5 19 ,故采用选择离子 ( S IR )扫描模式 , S IR 为5 19 。
2
.
6 标准曲线的绘制
取 ,’2 . 1 . 1” 项下标准溶液 , 以不同体积进样 , 以丹酚酸 B 的
峰面积积分值 ( Y )为纵坐标 , 相应的浓度 ( X )为横坐标作回归
曲线 , 由系统软件进行分析 , 得线性回归方程为 Y = 8 94 . 5 X 一
29 73 8 (
: = 0
,
9 99 8 )
。 结果表明 , 丹酚酸 B 在 0 . 0 5一 6 0拜g ·
m L ’ 浓度范围内与峰面积积分值呈良好线性关系 。
2
.
7 检出限的确定
笔者将 P D A 检测器与 M S 仪串连使用 , 对不同浓度的样
品进行测试 。 结果表明 , M S 比紫外吸收光谱 ( U V )具有更高的
灵敏度和选择性 。 M S 采用 SI R 模式可检测含量为 2 . 5即m 级
的样品 ,其信噪比 (峰 /峰 )为 3 . 25 。
2
.
8 精密度试验
按照上述方法 , 对同一种对照品重复测定 6 次 。 结果 ,
R S D 一 0 . 47 % , 说明该方法较为准确 、可靠。
2
.
9 加样回收率试验
精密称取已知含量的白花丹参样品 3 份 , 分别精密加人一
定量的丹酚酸 B 对照品 , 按照样品处理方法进行处理 , 测定回
收率 ,结果详见表 1 。
表 1 加样回收率试验结果 ( n = 3)
T a b 1 R e s u l t s o f r e e o v e r y t e s t (
n = 3 )
样品含量 加人量 测得量 回收率 历 R SD
乍g · m L ’ 伞g · m L ’ 伞 g · m L ` / % / % / %
4 5 10 5 5
.
0 7 9 8
.
8 1
4 5 10 5 4
.
6 1 9 7
.
9 9
4 5 10 5 4
.
7 9 9 8
.
3 1
4 5 2 5 7 0
.
3 1 10 1
.
2 0
4 5 2 5 7 0
.
09 10 0
.
8 8 99
.
18 0
.
4 4
4 5 2 5 6 8
.
95 9 9
.
2 4
4 5 4 0 8 4
.
2 0 9 7
.
9 4
4 5 4 0 8 5
.
63 9 9
.
6 0
4 5 4 0 8 4
.
8 1 9 8
.
6 5
2
.
10 稳定性试验与重现性试验
供试品溶液避光保存 , 间隔一定时间测定 ,结果表明 , 其在
4 8h 内基本稳定 , R S D = 0 . 93 % 。 同一批样品分别称取 6 份 , 照
上法进行含量测定 ,结果 , R S D = 1 . 92 % 。
2
.
1 样品含且测定
取 “ 2 . 1 . 2 ” 项下供试品溶液 , 在相应的色谱 、 M S 条件下进
样 , 每份样品平行测定 3 次 , 对照品和样品 SI R 模式的 M S 详
见图 ;1 从样品全扫描离子流提取的丹酚酸 M S 和相应的 U v
光谱详见图 2 、 图 3 。 将数据代入回归方程计算样品中丹酚酸 B
的含量 ,结果详见表 2 。
3 讨论
H P L C 一 M S 法是应用较广的一种检测方法 , 具有灵敏度
高 、 精确度与准确度好的特点 , 而 SI R 检测方式又使灵敏度提
高了 2一 3 个数量级 , 对检查易带电的微量极性化合物是一种
简便 、 易行的方法 。
通过图 2 和图 3 的比较可以发现 , 在 U V 光谱分离不太好
的情况下 , 不影响 SI R 模式检测的结果 。 所以 , 我们可以把 M S
日二` 卜一一叫- O目臼二夺es 一 , 尸10 2 0 30 t /m i n 10 20A B
图 1 S IR 质 t 色谱图
A
. 丹酚酸 B 对照品 ; B . 样品
Fi g 1 S IR m a s s c h or m a t o g r a m
A
.
S a lv i a n o li
e A e id B s t a n d a r d ; B
.
s a m P le
3 0 t /m i
n
踢树翩.0
3 00 40 0 50 0 6() 0 70 0 80 0 m /
z
图 2 样品的质谱
12 16 2 0 t /m i n
图 3 U V 光谱
F i g 2 T h e m a s s s讲 e t卜 F i g 3 U V e h or m a t o g r a m
u m o f s a m P l e
表 2 样品含 t 测定结果
T a b 2 R e s u l t s o f c o n t e n t d e t e r m i n a t i o n o f s a m P l e s
样品 丹酚酸 B含量 (标示量 /% ) R SD /%
洲Oùfù` J工气ún,1人R尹O
.…nU八COà3 6 . 3 23 7 . 0 33 6 . 8 7
3 6
.
8 7
l,1
内Jl工
仪看成是 H P L C 仪的一个独立且高灵敏的检测器 。
丹酚酸 B 是白花丹参的重要药效成分 ,本试验结果可为白
花丹参的质量评价和道地药材质量标准的建立提供理论依
据。
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1 4 85
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(收稿 日期 : 2 0 0 7一 0 1一 1 1 修回 日期 : 2 0 0 7一0 3 一 12 )
1 6 3 8
·
C h in a P h a r m a e y 2 0 0 7 V o l
.
1 8 N o
.
2 1 中国药房 20 0 7 年第 18 卷第 21 期