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木芙蓉叶提取工艺的研究
姚莉韵 , 王国艳 , 王丽平
(上海第二医科大学化学教研室 , 上海 200025)
摘要:目的:研究木芙蓉叶中总黄酮提取法的最佳工艺条件。方法:采用 L9(34)正交试验法 , 采用 70%乙醇回流法与水
煎法 、75%乙醇温浸法比较。结果:乙醇回流提取法最好。结论:木芙蓉叶总黄酮提取的最佳工艺条件 A1B3C3D3 。
关键词:木芙蓉叶;芦丁;总黄酮;正交试验
中图分类号:R284.2 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2000)12-0827-03
Study on Extraction Process of Leaves of Hibiscus Mutabilis L.
YAO Li-yun , WANG Guo-Yan , WANG Li-Pin
(Shanghai S econd Medica l U niversity , Shanghai 200025 , China)
Abstract:Objective:To study the optimum extraction condit ions of f lavonoids f rom the leaves of Hibiscus mu-
tabi lis L.Methods:The orthogonal design L9(34)was used.The 70% alcohol refluent method w as compared
w ith the decoction o r 75% alcohol w arm-infusion process.Results:The 70% alcohol reflux w as the best
method.Conclusion:A1B3C3D3 is the best ext raction condition of flavonoids f rom the leaves of Hibiscus muta-
bilis L..
Key words:leaves of Hibiscus Mutabilis L .;rutinum;flavonoid;orthogonal design
收稿日期:2000-03-04
基金项目:上海市高等学校科技发展基金项目(批准合同编号 98ZD33)
作者简介:姚莉韵(1966～ ),女 ,上海市人 ,副教授 ,从事中草药提取分离及含量测定工作。电话:021-63846590-464.
木芙蓉叶为部颁法定药材 ,又名芙蓉花叶 ,为锦
葵科植物木芙蓉 Hibiscus mutabi lis L.的叶 ,味微辛
而滑 、无毒 ,具有凉血 、解毒 、消肿 、止痛等功效[ 1] 。
近年来研究证明 ,木芙蓉花 、叶中含有芸香甙等黄酮
类化合物[ 2 ,3] 。其叶的煎剂对金黄色葡萄球菌 、伤
寒杆菌等均有抑制作用[ 4] ;其水浸出液还具有明显
的抗炎活性且无毒[ 5] 。为探索最佳提取工艺 ,保证
有效成分的提取率 ,特以主要成分总黄酮含量为指
标 ,用正交试验设计优选出最佳提取工艺 ,并进行了
70%乙醇回流法与水煎法 、75%乙醇温浸法总黄酮
提取率的比较。
1 仪器与试药
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中 成 药
Chinese T raditional Patent Medicine
Dec., 2000
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UV-2100型可见-紫外分光光度计(日本岛津公
司),木芙蓉叶购自温州市药材公司 ,芦丁对照品由
中国药品生物制品检定所提供 ,所用试剂均为分析
纯。
2 方法与结果
2.1 样品的提取:分别称取 20g 木芙蓉叶粗粉 9
份 ,按表 1 、表 2 选择的因素和水平进行回流提取 ,
趁热过滤得滤液 ,测其总体积 ,分别量取 1.0ml滤液
作为供试品溶液 。其余滤液在相同条件下减压浓缩
并真空干燥 ,称取干膏重量。
2.2 总黄酮的测定[ 6]
2.2.1 标准曲线的制备:精密称取芦丁对照品
20mg ,置 100m l量瓶中 ,加甲醇溶解至刻度 ,摇匀即
得对照品溶液 。分别精密吸取 1.0 , 2.0 , 3.0 , 4.0 ,
5.0和 6.0ml至 25ml量瓶中 ,各加 95%乙醇 6ml ,
加 5%亚硝酸钠溶液 1ml ,摇匀放置 6min;然后加
10%硝酸铝 1ml ,摇匀放置 6min ,加 10%氢氧化钠
10ml ,最后加 95%乙醇至刻度 ,摇匀放置 15min 测
定。以同法配制空白对照 ,用400nm ～ 800nm 波长
进行扫描 ,得出λmax512±1nm 为检测波长 。测定吸
光度值 ,得回归方程 C =82.015A -0.0939 , r =
0.9999。
2.2.2 样品的测定:分别取供试品溶液 1.0ml ,至
25ml量瓶中 ,按标准曲线项下自“各加 95%乙醇
6ml”起 ,依法测定吸收度值 ,并按回归方程计算样
品液中总黄酮含量。
2.2.3 加样回收率的测定:取已知含量木芙蓉叶样
品液 1.0ml 6份 ,分别加入一定量芦丁对照品溶液 ,
自“各加 95%乙醇 6ml”起与标准曲线制备相同方法
测定吸收度 ,求得平均回收率 99.5%, RSD=1.09
(n=6)。
2.3 正交试验及结果:根据初步预试验的结果 ,拟
定4 种因素 , 每种因素选择 3 个水平(表 1), 按
L9(34)正交试验设计表对木芙蓉叶进行回流提取实
验 ,结果见表 2 、表 3 。
Table 1 Fator and Level
Level
A
Concert rat ion of
alcohol
B
Volume of
alcohol
C
Frequence of
refluent
D
Time of
ref luent
1 70% 1∶8 1 1h
2 80% 1∶10 2 2h
3 90% 1∶12 3 3h
由表 2 直观分析 R 值看 , 最佳提取工艺是
A1B3C3D3 ,即用 12倍量 70%乙醇回流提取 3次 ,每
次 3h 。结果见表 3 ,乙醇浓度木芙蓉叶酮含量的影
响较大 ,其余因素不显著。
Table 2 L9(34)Arrangment and Results of Orthogonal Test
Number
1A
(%)
2B
mult-
iple
3C
f requ-
ence
4D
hour
Total amount of
f lavonoids
in leaves/mg/ g
1 1 1 1 1 12.20
2 1 2 2 2 20.02
3 1 3 3 3 21.62
4 2 1 2 3 10.90
5 2 2 3 1 10.39
6 2 3 1 2 9.91
7 3 1 3 2 9.41
8 3 2 1 3 7.12
9 3 3 2 1 10.18
K1 53.84 32.51 29.23 32.77
K2 31.20 37.53 41.10 39.34 G=∑3
i=1Ki=111.75
K3 26.71 41.71 41.42 39.64 CT=G 2/N=1387.56
K1 17.95 10.84 9.74 10.92 Q= 13 ∑K21
K2 10.40 12.51 13.70 13.11
K3 8.90 13.90 13.81 13.21 S=Q-CT
R 27.13 9.20 12.19 6.68
S 140.98 14.15 32.18 10.05
Table 3 Analysis of Variance
Source SS DF MS F Prob
Concertrat ion/A 140.98 2 70.49 14.03 P<0.1
Volume/ B 14.15 2 7.075 1.41 P>0.1
Frequence/ C 32.1 2 16.09 3.20 P>0.1
Residual/D 10.05 2 5.025
Total 197.36 8
F1-0.1(2 ,2)=9.0 F1-0.01(2 ,2)=99.0
2.4 不同溶剂提取效果比较
2.4.1 水煎法提取:称取 20g 木芙蓉叶加足量蒸馏
水浸泡 2h 后 ,煮沸 0.5 h ,过滤 ,共提取 2次 。合并
滤液 ,测量总体积 ,吸取 1.0ml滤液同上法测定总黄
酮含量 。滤液减压浓缩并真空干燥 ,称取干膏重量。
2.4.2 温浸法提取:称取 20g 木芙蓉叶浸 2次 ,每
次加入 75%乙醇 250ml温浸 3 h ,温度 40°C±1 ,合
并两次滤液 ,测量总体积 ,然后量取 1.0ml滤液同上
法测定总黄酮含量 。滤液减压浓缩并真空干燥 ,称
取干膏重量 。
2.4.3 结果比较:见表 4。
Table 4 Comparision of Content of flavonoids
from Different Extractive Ways
Extractive
w ays
Gram of
ext ract
g
Content of
flavonoids
in ext ract
mg/ g
Total
amount of
f lavonoids
in leaves mg/ g
Refluent ext ract 2.875 139.23 20.014
Warminfusion ext racect 1.62 37.49 3.039
Heat ext ract 8.75 23.30 10.193
3 小结
3.1 通过正交试验结果直观分析和方差分析得出 ,
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木芙蓉叶总黄酮提取的最佳工艺条件 , 用 12 倍量
70%乙醇回流提取 3次 ,每次 3h ,其中乙醇浓度是
影响提取率的主要因素。以此法提取的总黄酮含量
21.62mg/g 叶(即 130.48mg/g 干膏),与表 2 中试
验 2含量 20.02mg/g 叶(即 139.23mg/g 干膏)较接
近 ,而后者工艺成本较低 ,且干膏中总黄酮含量也较
高 ,所以从降低成本 、节省原料考虑 ,采用 12 倍量
70%乙醇回流提取 3h ,然后 10倍量 70%乙醇回流
提取 2h ,此法所得黄酮含量 21.08mg/g 叶 。
3.2 从不同提取方法结果比较可知 ,乙醇回流法提
取总黄酮含量大大高于水煎法 、温浸法 ,说明乙醇回
流提取法效果最好 。
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白芷中欧前胡素的提取方法研究
梁明金 , 杨广德 , 贺浪冲
(西安医科大学药学院分析中心 ,陕西 西安 710061)
摘要:目的:建立提取白芷中香豆素类成分的方法。方法:以欧前胡素为指标 ,用薄层色谱法对提取香豆素类成分所用的
溶剂种类 、极性和提取方式进行系统研究。结果:用 4 倍量 95%乙醇回流提取 2 次(每次 1h)的方法提取白芷中的香豆
素类有效成分可以获得较高提取效率。结论:溶剂种类和提取方式对白芷中欧前胡素的提取效率有较大影响。
关键词:白芷;欧前胡素;香豆素;薄层色谱法
中图分类号:R284.2 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2000)12-0829-02
Solvent Extraction Methods of Imperatorin in Radix Angelicae Dahurica
LIANG Ming-jin , YANG Guang-de , HE Lang-chong
(Analytical Center , College of Pharmacy , X ian Medical Un iversity , X ian 710061 , China)
Abstract:Objective:To build an ex traction method of coumarins f rom Radix Angel icae Dahuricae.Methods:
The solvent varieties , polari ties , and ext raction methods were systematically studied by TLC with imperato rin as
marker.Results:The more effective w ay to ex t ract coumarins from Radix AngelicaeDahurica was refluent ex-
traction w ith 4 times amount of 95% alcohol twice (one hour each time).Conclusion:The Solvent varieties and
ex traction method showed greater ef fects than others on the ext raction efficiency of imperatorin.
Key words:Radix Angelicae Dahuricae ;imperato rin;coumarins;TLC
收稿日期:2000-03-04
基金项目:卫生部科学研究基金资助项目:钙拮抗剂类活性化合物的细胞膜色谱法筛选(批准号 98-1-243)
作者简介:梁明金(1975～ ),男 ,山东潍坊市人 ,硕士生 ,主要从事中草药有效成分的筛选及其体内代谢动力学研究。电话:029-5275142.
白芷(Radix Angelicae Dahurica)为伞型科植
物白芷和杭白芷的干燥根 。具有散风除湿 、通窍止
痛 、消肿排脓的功能。白芷中的主要有效成分为香
豆素类化合物(coumarins)[ 1 ,2] ,欧前胡素(impera-
torin)为其中之一。用细胞膜色谱法[ 3]筛选研究表
明香豆素类化合物对狗血管平滑肌细胞具有较强的
活性作用。药理实验表明香豆素类化合物具有抗菌
消炎 、解热镇痛 、降低动脉压力及离体蛙心收缩力等
作用[ 4] 。通常采用薄层色谱法[ 5]对欧前胡素进行
定量检测。作者对白芷中欧前胡素的提取方法进行
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