全 文 ：溶性是非常必要的。近几年来 ,未见有关石杉型三萜糖苷类化合
物及其生物活性的研究报道 , 作者从扁枝石松中分离得到一个已
知的石杉型三萜糖苷类化合物 , 并正在对其生物活性进行试验。
继续深入的研究对石杉型三萜糖苷类化合物的发现及其生物活
性的阐明具有一定的科学意义。
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收稿日期:2009-07-31;　修订日期:2009-11-20
基金项目:国家 “十一五 ”科技支撑计划课题(No.2006BAI06A17-03)
作者简介:韦松基(1952-),男(壮族), 广西藤县人 ,现任广西中医学院教
授 ,学士学位 ,主要从事中药及民族药的开发及研究工作.
＊通讯作者简介:蒙万香(1983-),女(壮族),广西龙胜人 ,现为广西中医
学院在读硕士研究生 ,学士学位 ,主要从事中药及民族药的开发及研究工
作.
壮药饭汤子中总黄酮的含量测定
韦松基 , 蒙万香＊ , 戴忠华
(广西中医学院 ,广西 南宁　530001)
摘要:目的 建立饭汤子总黄酮的含量测定方法 ,对饭汤子中的总黄酮成分进行定量研究。方法 采用紫外分光光度法对
饭汤子总黄酮的含量进行研究。结果 采用 50%乙醇热回流提取饭汤子中的总黄酮 ,以 NaNO2 -Al(NO3)3 -NaOH为显
色系统进行含量测定 ,线性范围为 23.5 ～ 116.5μg/ml, r=0.999 8, 平均加样回收率为 101.1%, RSD=1.08%(n=5), 饭
汤子药材中平均总黄酮含量为 11.83%, 不同产地的饭汤子药材总黄酮含量差异较大。结论 此含量测定方法操作简便 ,
快捷 ,重复性好 , 为饭汤子药材质量控制提供了依据。
关键词:饭汤子;　总黄酮
中图分类号:R29;R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2010)06-1356-03
DeterminationofTotalFlavonoidsinViburnumsetigerum
WEISong-ji, MENGWan-xiang＊ , DAIZhong-hua
(GuangxiTraditionalChineseMedicalUniversity, GuangxiNanning530001)
Abstract:ObjectiveToestablishamethodfordeterminationoftotalflavonoidsinViburnumsetigerum.MethodsThecontents
oftotalflavonoidsinthesampleswereassayedbyultravioletspectroscopy.ResultsThetotalflavonoidswereextractedwithevapo-
rativerefluxfromViburnumsetigerumby50% alcohol, itscontentwasdeterminedbyultravioletspectroscopewithNaNO2 -Al
(NO
3
)
3
-NaOHsystem, thelinearrangevariedfrom23.5 ～ 116.5 μg/ml, r=0.999 8, theaveragerecoverywas101.1%, RSD
=1.08%(n=5).TheaveragecontentoftotalflavonoidsinViburnumSetigerumwas11.83%, andthecontentsoftotalfla-
vonoidsinViburnumsetigerumweredifferentbecauseoftheirdifferentregions.ConclusionThemethodiseasytooperatandis
repeatable, whichprovidesabasisforqualitycontrolofViburnumsetigerum.
Keywords:Viburnumsetigerum;　Totalflavonoids
　　饭汤子为忍冬科荚蒾属植物茶荚蒾 Viburnumsetigerum
Hance的根 ,又名鸡公柴 、跑路杆子 、水茶子 、霜降子 、虎柴子等 ,
味微苦 , 性平 ,有清热利湿 、活血止血之功效 , 主治小便白浊 、肺
痈 、吐血 、热瘀经闭 [ 1 , 2] 。饭汤子为广西壮医用于治疗乙型肝炎
的常用壮药 , 疗效确切。目前仅有其护肝作用的实验研究报
道 [ 3] 。饭汤子化学成分未见报道 , 经化学成分预实验发现主要
含有糖类 、鞣质 、有机酸 、黄酮类 、蒽醌类 、内酯类。黄酮类化合物
具有抗癌 、抗氧化 、抗炎 、保肝护肝 、调节免疫等药理作用 [ 4] , 很
可能是饭汤子护肝作用的有效成分。而有关饭汤子总黄酮含量
测定方面的研究未见报道。 本文通过紫外分光光度法对饭汤子
总黄酮进行了定量测定 , 为饭汤子药材的质量控制提供参考依
据。
1　仪器与材料
1.1　仪器 SartoriusBP211D电子天平(赛多利斯科学仪器有限
公司);超声波清洗机 SK2200LHC(上海科导超声仪器有限公
司);Agilent8453紫外可见分光光度计(美国安捷伦)。
1.2　样品 饭汤子药材 ,经广西中医学院韦松基教授鉴定为忍冬
科荚蒾属植物茶荚蒾 ViburnumsetigerumHance。
1.3　试剂 芦丁对照品(含量测定用 , 0080-9705,中国药品生物
制品检定所);其余试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　提取溶剂的考察 取饭汤子粗粉(过 20目筛)3份 , 每份 0.5
g,精密称定 , 分别加入甲醇 、70%乙醇 、水各 50 ml,超声提取 1 h,
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滤过 ,滤液置于 50 ml容量瓶中 , 用相应的溶剂定容至刻度。分
别精密吸取以上制备溶液 2 ml置于 25 ml容量瓶 , 加入 5%
NaNO2 溶液 1.0 ml, 摇匀 , 置室温放置 5 min, 再加入 10%Al(NO3)3溶液 1.0ml, 摇匀 ,置室温放置 5 min, 再加入 4%NaOH
溶液 10.0 ml,分别以相应的溶剂定容至刻度 , 摇匀 ,放置 15min,
再分别以相应的溶剂为空白对照 , 在 500 nm波长处测定紫外吸
收峰峰位和吸光度 , (见表 1)。结果表明 , 饭汤子的乙醇提取液
总黄酮含量最高 ,故选择乙醇为提取溶剂。
表 1　提取溶剂的考察
提取溶剂 吸光度值A 总黄酮含量(%)
甲醇 0.687 79 8.15
70%乙醇 0.885 29 10.41
水 0.642 44 7.63
2.2　溶剂浓度的考察 取饭汤子粗粉(过 20目筛)5份 , 每份 0.5
g,精密称定 ,分别加入 30%, 50%, 70%, 90%乙醇液及无水乙醇
各 50 ml,超声提取 1 h,滤过 ,滤液定容至 50 ml容量瓶中 ,用相
应浓度的乙醇溶液定容至刻度。分别精密吸取以上制备溶液 2
ml置于 25 ml容量瓶 , 加入 5%NaNO2溶液 1.0 ml, 摇匀 ,置室温
放置 5 min,再加入 10%Al(NO3)3溶液 1.0ml,摇匀 , 置室温放置
5 min, 再加入 4%NaOH溶液 10.0 ml,再分别以相同浓度的乙醇
溶液定容至刻度 ,摇匀 , 放置 15 min, 以相同浓度的乙醇溶液作为
空白对照 ,在 500 nm波长处测定紫外吸收峰峰位和吸光度 , 结果
见表 2。结果表明 , 50%乙醇提取液的总黄酮含量最高 , 故选择
提取溶剂为 50%的乙醇溶液。
表 2　溶剂浓度的考察
提取溶剂 吸光度值A 总黄酮含量(%)
30%乙醇 0.889 38 10.48
50%乙醇 0.926 16 10.92
70%乙醇 0.885 29 10.42
90%乙醇 0.755 55 8.92
无水乙醇 0.646 65 7.69
2.3　提取方法的考察
2.3.1　方法一 索氏提取法:精密称取饭汤子粗粉 0.5g,加入 50
ml50%乙醇溶液 , 置索氏提取器中 , 提取 1 h,滤过 , 滤液移至 50
ml容量瓶中 , 用 50%乙醇定容至刻度 ,摇匀 , 待含量测定。
2.3.2　方法二 回流提取法:精密称取饭汤子粗粉 0.5g,加入 50
ml50%乙醇溶液 ,水浴加热回流提取 1 h, 滤过 , 滤液移至 50 ml
容量瓶中 ,用 50%乙醇定容至刻度 ,摇匀 , 待含量测定。
2.3.3　方法三 超声提取法:精密称取饭汤子粗粉 0.5g,加入 50
ml50%乙醇溶液 ,超声提取 1h,滤过 , 滤液移至 50ml容量瓶中 ,
用 50%乙醇定容至刻度 ,摇匀 , 待含量测定。
2.3.4　方法四 冷浸提取:精密称取饭汤子粗粉 0.5 g, 加入 50
ml50%乙醇溶液 , 冷浸 24 h, 滤过 , 滤液移至 50 ml容量瓶中 , 用
50%乙醇定容至刻度 ,摇匀 , 待含量测定。
分别取上述提取液各 2 ml, 经显色后在 500 nm处测定紫外
吸收。结果见表 3。结果表明 , 回流提取法提取的饭汤子提取液
中总黄酮含量最高 ,故选择回流提取法。
表 3　提取方法的考察
提取方法 吸光度值A 总黄酮含量(%)
索氏提取 0.619 46 7.38
回流提取 1.059 60 12.47
超声提取 0.866 29 10.23
冷浸 24h提取 0.624 73 7.44
2.4　含量测定 [ 5]
2.4.1　供试品溶液的制备 精密称取饭汤子粗粉 0.5 g,加入 50
ml50%乙醇溶液 ,水浴加热回流提取 1 h, 滤过 , 滤液定容至 50
ml容量瓶中 , 用 50%乙醇定容至刻度 ,摇匀 , 备用。
2.4.2　标准溶液的制备 精密称取干燥至恒重的芦丁对照品
23.3mg,用 50%乙醇溶解并定容于 100 ml容量瓶中 , 摇匀 , 得浓
度为 0.233 0 mg/ml的标准溶液。
2.4.3　显色系统的筛选
方法 1:分别取 3.0ml的芦丁标准溶液和样品溶液于 25 ml
的容量瓶中 ,加 0.1 mol/L的三氯化铝溶液 6.0 ml和 1 mol/L的
醋酸钠溶液 9.0ml, 用 50%乙醇定容。
方法 2:分别取 3.0ml的芦丁标准溶液和样品溶液于 25 ml
的容量瓶中 , 加 5%的硝酸钠溶液 1.0 ml, 摇匀 5 min,再加 10%
的三氯化铝溶液 1.0 ml, 摇匀 5 min, 再加 4%的 NaOH溶液 10
ml,用 50%乙醇定容 , 摇匀 5 min。
方法 3:分别取 3.0ml的芦丁标准溶液和样品溶液于 25 ml
的容量瓶中 , 加 5%的亚硝酸钠溶液 1.0 ml, 摇匀 5 min, 再加
10%的硝酸铝溶液 1.0 ml, 摇匀 5 min,再加 4%的 NaOH溶液 10
ml,用 50%乙醇定容 , 摇匀 10 min。通过比较 , 方法 3显色灵敏 、
稳定 ,故采用 NaNO2 -Al(NO3)3 -NaOH显色系统。
2.4.4　测定波长的确定 精密吸取芦丁对照溶液和供试品溶液
各 5.0ml, 分别置于 25 ml容量瓶中 , 定容 , 摇匀后分别于 400 ～
800 nm范围内扫描 ,两种溶液在 400 ～ 800nm范围内均无最大吸
收峰。另取芦丁对照溶液和供试品溶液各 5.0 ml, 分别置于 25
ml容量瓶中 , 加入 5%NaNO2溶液 1.0 ml, 摇匀 , 置室温放置 5
min, 再加入 10%Al(NO3)3溶液 1.0 ml, 摇匀 ,置室温放置 5min,
再加入 4%NaOH溶液 10.0 ml,用 50%乙醇定容 , 摇匀 ,置室温放
置 10min后分别于 400 ～ 800nm范围内扫描。结果发现 ,芦丁对
照品溶液在 500nm处有较大吸收峰 ,供试品溶液也在 500 nm处
有最大吸收峰 , 如图 1。故将 500 nm确定为测定波长。另制备
不含样品的阴性对照溶液 , 同法显色后在 400 ～ 800 nm范围内扫
描 ,溶液在 500 nm处无吸收峰 ,不影响测定 , 故选择测定波长为
500 nm。
1.芦丁对照品　　2.样品
图 1　芦丁和样品在 400 ～ 800nm的扫描图谱
2.4.5　标准曲线的制备 精密吸取芦丁标准溶液 0, 1.0, 2.0, 3.0,
4.0, 5.0ml,分别置于 10ml容量瓶中 ,各加 50%乙醇至 5ml,再加
入 5%NaNO2溶液 0.5 ml, 摇匀, 置室温放置 5 min, 再加入 10%
Al(NO3)3溶液 0.5 ml,摇匀 , 置室温放置 5 min, 再加入 4%NaOH
溶液 4.0ml,用 50%乙醇定容 ,摇匀 ,置室温放置 10 min,以第一份
溶液为空白 ,在紫外分光光度计 500nm处检测吸收度 ,以吸收度A
为纵坐标 , 芦丁溶液的浓度 C(mg/ml)为横坐标 , 绘制浓度 -吸光
度标准曲线, 如图 2。得回归方程为:A=10.824C-0.019 9, r=
0.999 8,线性范围为 23.5 ～ 116.5μg/ml。见表 4。
表 4　标准曲线的制备
芦丁 C/mg· ml-1 吸光度(A)
0.023 3 0.234 88
0.046 6 0.475 21
0.069 9 0.746 29
0.093 2 0.986 89
0.116 5 1.240 00
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图 2　浓度 -吸光度标准曲线
2.4.6　测定方法 精密吸取供试品溶液 2 ml,置于 25 ml容量瓶
中 ,加 50%乙醇至 6 ml, 加入 5%NaNO2溶液 1.0 ml,摇匀 , 置室
温放置 5 min,再加入 10%Al(NO3)3溶液 1.0ml,摇匀 , 置室温放
置 5min, 再加入 4%NaOH溶液 10.0 ml,用 50%乙醇定容 ,摇匀 ,
置室温放置 10 min。以相应的溶液为空白对照 , 在 500 nm处测
定吸光度 ,根据标准曲线方程计算总黄酮的含量。
2.4.7　精密度实验 精密吸取供试品溶液 1.0 ml, 各 5份 , 分别
置于 25ml容量瓶中 , 余项同 “ 2.4.6”项下从 “加 50%乙醇至 6ml
……置室温放置 10 min”操作 , 以 50%乙醇为空白对照 , 测定吸
光度。结果得 RSD=0.90%(n=5), 说明仪器系统的精密度良
好。
2.4.8　稳定性实验 照 “ 2.4.1”项下方法制备供试品溶液 , 精密
吸取 1ml至 25 ml容量瓶中 , 余项同 “ 2.4.6”项下从 “加 50%乙
醇至 6ml……置室温放置 10 min”操作 , 以 50%乙醇为空白对
照 , 500nm为测定波长 , 分别于 0, 5, 10, 15…… 60 min测定吸光
度 ,结果 RSD为 1.5%。说明该样品经显色后在 60 min内稳定。
2.4.9　重复性实验 精密称取饭汤子粗粉 0.5 g, 各 5份 , 按
“ 2.4.1”项下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液。各精密
吸取 1ml, 分别置 25 ml容量瓶中 ,余同 “ 2.4.6”项下从 “加 50%
乙醇至 6ml……置室温放置 10min”操作 , 以 50%乙醇为空白对
照 ,于 500nm处测定吸收度 , 结果平均吸光度值为 0.641 92, RSD
为 1.4%, 表明该方法重现性良好。
2.4.10　加样回收实验 取已知浓度的供试品溶液 5ml置于 25
ml容量瓶中 , 用 50%的乙醇溶液定容至刻度。精密吸取上述溶
液 3ml于 25 ml容量瓶中 , 各 5份 , 分别精密加入已知浓度的对
照品溶液 1, 2, 3, 4, 5 ml,余同 “ 2.4.6”项下从 “加入 5%NaNO2溶
液……置室温放置 10 min”操作 , 于 500 nm处测定吸收度 , 计算
回收率 , 结果平均回收率为 101.1%, RSD为 1.08%。结果见
表 5。
表 5　加样回收实验结果
样品
号
样品含
量 m/mg
加入芦丁
量 m/mg
测得量
m/mg
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
1 0.748 0 0.233 0.983 9 100.3
2 0.748 0 0.466 1.232 2 101.5
3 0.748 0 0.699 1.501 4 101.6 101.1 1.08
4 0.748 0 0.932 1.674 8 99.7
5 0.748 0 1.165 1.966 9 102.4
2.4.11　样品的含量测定 取不同产地的饭汤子粗粉 , 照 “ 2.4.1”
项下方法制备供试品溶液 , 精密吸取 2 ml至 25 ml容量瓶中 , 余
同 “ 2.4.6”项下从 “加 50%乙醇至 6 ml……置室温放置 10 min”
操作 ,以 50%乙醇为空白对照 , 于 500 nm处测定吸收度。 结果
见表 6。结果表明高峰产地的饭汤子药材中总黄酮含量最高 , 为
14.16%,老虎岭产地的饭汤子药材中总黄酮含量最低 ,为 9.7%。
表 6　同产地饭汤子药材总黄酮含量测定结果
No. 产地 吸收度 A 含量 C/mg· g-1 总黄酮含量(%)
1 广西巴马 0.871 06 102.73 10.27
2 广西高峰 1.208 50 141.58 14.16
3 广西武鸣 1.124 90 131.92 13.19
4 广西老虎岭 0.820 63 96.71 9.7
3　讨论
黄酮类化合物易溶于甲醇 、乙醇等溶剂中 ,故选择甲醇 、乙醇
作为提取溶剂。但实验中我们发现乙醇的提取效果比甲醇好 , 而
且乙醇溶液的提取效率比无水乙醇高 , 通过实验比较我们发现
50%乙醇提取液所含总黄酮含量最高。通过比较索氏提取法 、回
流提取法 、超声提取法 、冷浸提取法 4种方法 , 发现回流提取法的
效率明显高于其他方法 , 故采用回流提取。
大多数黄酮类化合物的紫外吸收光谱由两个主要的吸收带
组成 ,出现在 300 ～ 400 nm之间的吸收带称为带 Ⅰ , 是由 B环桂
皮酰基系统的电子跃迁引起的吸收 , 出现在 240 ～ 280 nm之间的
吸收带称为带Ⅱ , 是由 A环苯甲酰基系统的电子跃迁引起的吸
收 [ 6] 。加入铝盐可使黄酮类化合物与铝离子形成稳定的配合
物 ,使带Ⅰ明显红移 , 吸光度明显增大。崔敬浩等 [ 5]选用了常用
的 3种铝配合物显色系统来显色测定总黄酮含量。通过比较 , 发
现 NaNO2 -Al(NO3)3 -NaOH显色系统显色灵敏 , 且吸收值稳
定 ,故采用 NaNO
2
-Al(NO
3
)
3
-NaOH显色系统。
本实验采用 50%乙醇回流提取饭汤子的总黄酮 , 以芦丁为
对照品 , NaNO2 -Al(NO3)3 -NaOH为显色剂测定饭汤子中总黄
酮的含量 , 在线性范围为 23.5～ 116.5 μg/ml, r=0.999 8,平均加
样回收率为 101.1%, RSD=1.08%,该方法准确度高 , 操作简单 ,
重现性好。通过对不同产地的饭汤子药材进行含量测定 , 发现不
同产地的饭汤子总黄酮的含量有一定差异 , 由此可见不同地理环
境对植物的化学成分含量有一定影响。
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