全 文 ：China Pharmacy 2010 Vol. 21 No. 7 中国药房 2010年第21卷第7期
乙型肝炎为我国常见病、多发病，据卫生部统计，仅 2004
年有记录的乙型肝炎病例就达到 91万人，而乙型肝炎病毒的
感染率更高，在普通人中达到9.09％。对乙型肝炎最根本的治
疗手段是抗病毒治疗，而现有的抗病毒药物大多治疗后长期
应答率不高、副作用多。白背叶为大戟科植物Mallotus ap-
elta（Lour.）MuelL. Arg.的根及叶。白背叶根水煎液有抗肝纤
维化[1]、抗肝损伤[2]作用，并且对体外培养的2215细胞及鸭乙型
肝炎病毒（DHBV）感染的雏鸭有显著的抗肝炎病毒作用[3，4]。
本研究在人工感染乙型肝炎病毒鸭模型中，研究白背叶黄酮
类 化 合 物（WF）在 体 内 对 鸭 乙 型 肝 炎 病 毒 DNA
（DHBV- DNA）的抑制效果，深入评价WF的抗乙型肝炎病毒
作用。
1 材料
1.1 仪器
BP211D型万分之一电子天平（德国赛多利斯公司）；
Sunrise酶标仪（瑞士Tecan公司）；Biofuge Stratos高速低温离
心机（德国Heraeus公司）；座式自动电热压力蒸汽灭菌器（上
海申安医疗器械厂）。
1.2 试药
白背叶采摘于广西，由广西中医学院中药鉴定教研室鉴
定为真品；拉米夫定（3TC，葛兰素史克制药（苏州）有限公司，
批号：05110011）；二甲亚砜（DMSO，广州市新港化工有限公
司）；α- 32P- Dctp（北京福瑞生物技术工程公司）；DHBV- DNA
测定试剂盒（美国Promega公司）；SephadexG- 50、PVP（意大利
Pharmacia公司）；SDS（美国Merck公司）；0.45 μm硝酸纤维素
膜（挪威Amersham公司）；鱼精DNA、牛血清白蛋白（中国科学
院生物物理研究所）。
1.3 动物
1 d龄北京麻鸭 24只，♀♂兼用，体质量 60～100 g，购自
北京前进种鸭动物饲养场。
1.4 病毒
鸭乙型肝炎病毒DNA强阳性血清，采自南京麻鸭，－70℃
冰箱贮藏。
2 方法
2.1 药物的制备
取白背叶的干燥植物叶，剪碎后于沸水中提取，每1 kg干
燥植物叶加水20 L，加热提取4 h，趁热过滤，收集滤液。滤渣
再次采用沸水重复提取2次，趁热过滤后合并滤液。所得滤液
控温通过大孔吸附树脂柱，采用水洗脱，再用乙醇洗脱，收集
与盐酸-镁粉溶液呈阳性反应的乙醇洗脱液，减压干燥，重结
晶得到终产物。WF为棕黄色粉末结晶，使用时用蒸馏水配制
成乳浊液供实验用。
2.2 模型的复制
参照文献[5]方法建立DHBV感染鸭模型。1 d龄北京鸭，
经腿胫静脉注射DHBV- DNA阳性血清（每只 0.2 mL）。感染
Δ广西科学基金（桂科基0832007）
＊讲师，博士。研究方向：中药有效成分的药理活性及作用机
制。电话：0771- 2936591。E- mail：xiaxing66@163.com
#通讯作者：教授，硕士研究生导师。研究方向：药理学教学与抗
病毒药物。电话：0771- 2279423。E- mail：zzw_nn@163.com
白背叶黄酮类化合物抗鸭乙型肝炎病毒活性研究Δ
夏 星＊，郑作文#，谭 为（广西中医学院，南宁市 530001）
中图分类号 R285.5；R978.7 文献标识码 A 文章编号 1001- 0408（2010）07- 0590- 03
摘 要 目的：研究白背叶黄酮类化合物（WF）抗鸭乙型肝炎病毒（DHBV）的活性。方法：对1 d龄雏鸭人工感染DHBV，7 d后成
功复制鸭DHBV感染模型。分别灌胃75、150 mg·kg- 1的WF，或50 mg·kg- 1拉米夫定，每天2次，连续给药10 d。斑点杂交法测定
给药第 5天、第 10天及停药后第 3天鸭血清中DHBV- DNA浓度。结果：75及 150 mg·kg- 1 WF均能显著降低模型鸭血清中
DHBV- DNA浓度（P＜0.01），且停药后反跳程度轻于拉米夫定。结论：WF有显著的抑制DHBV- DNA复制的作用，表明其可能有
较好的抗乙型肝炎病毒的活性。
关键词 白背叶；黄酮；鸭乙型肝炎病毒；活性
Study on the Activity of Flavonoids Extracted from Mallotus apelta against Duck Hepatitis B Virus
XIA Xing，ZHENG Zuo-wen，TAN Wei（Guangxi Traditional Chinese Medical University，Nanning 530001，
China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the activity of flavonoids WF extracted from Mallotus apelta against duck hepatitis B virus
（DHBV）. METHODS：One- day- old ducklings were infected with DHBV. 7 days later the DHBV- infectious model was establis-
hed successfully. The model ducklings were administrated with WF of 75 and 150 mg·kg- 1 or lamivudine of 50 mg·kg- 1 b.i.d.via i.
g. gtt for 10 days consecutively. Serums were collected at 5th and 10th day after drug administration and 3th days after drug
withdrawal. The level of DHBV- DNA in serum was detected by dot- blotting hybridization test. RESULTS：75 and 150 mg·kg- 1
WF reduced the level of DHBV- DNA significantly（P＜0.01），moreover，the rebound effect after discontinuation of WF was lower
than that after discontinuation of lamivudine.CONCLUSION：WF significantly inhibits DHBV- DNA replication in DHBV models，
which indicates that WF offers sound effect against HBV.
KEY WORDS Mallotus apelta；Flavonoids；Duck hepatitis B virus；Activity
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病毒后第7天，随机分组并采用相应药物治疗。
2.3 分组及给药
雏鸭经DHBV感染第 7天随机分为 4组，即模型（生理盐
水）、3TC（50 mg·kg- 1）及WF高、低剂量（150、75 mg·kg- 1）组。
感染DHBV后第7天（即T0）开始 ig给药，每天2次，连续10 d。
2.4 血清样本采集
分别在DHBV感染后（T0用药前）、用药第 5天（T5）、用药
第10天（T10）及停药后第3天（P3），自鸭腿胫静脉取血，离心分
离血清，－70℃冰箱贮藏，待检。
2.5 鸭血清DHBV- DNA水平检测
取上述待检鸭血清，相同时间点的样品同时点膜，按缺口
翻译试剂盒说明书测定血清DHBV- DNA水平。用 32P标记
DHBV- DNA探针，并做鸭血清斑点杂交，放射自显影膜片斑
点，酶标检测仪测定 490 nm波长处吸收光度（OD）值，计算血
清 DHBV- DNA密度，以杂交斑点 OD值作为标本 DHBV-
DNA水平值。按以下公式计算药物在各时间点对动物血清
DHBV- DNA的抑制率：抑制率（％）＝（T0OD值－给药后OD
值）×100％/T0OD值。
2.6 统计学方法
实验结果均以x±s表示。采用配对样本 t检验分析药物
治疗前、后各时间点同组动物血清DHBV- DNA水平变化，与
T0比较，P＜0.05即认为存在显著性差异；采用成组数据 t检验
分析各时间点的药物对血清DHBV- DNA的抑制率，与同时间
点的病毒对照组比较，P＜0.05即认为存在显著性差异。
3 结果
3.1 DHBV感染后鸭血清DHBV- DNA的动态变化
DHBV感染后T0、T5、T10及 P3时间点经斑点杂交法测定，
鸭血清DHBV- DNA均呈阳性。模型组 6只鸭感染DHBV后
第7～21天，血清DHBV- DNA均呈阳性，除T5外，T0至P3的血
清DHBV- DNA未见显著波动（P＞0.05）。DHBV感染后鸭血
清DHBV- DNA水平变化见图1。
3.2 WF对感染DHBV的鸭血清DHBV- DNA的影响
与同组T0比较，ig低剂量WF，T5鸭血清DHBV- DNA浓度
显著下降（P＜0.05），T10下降效果显著（P＜0.01），P3鸭血清
DHBV- DNA浓度仍呈极显著下降（P＜0.01）；ig 高剂量WF
后，在 T5、T10及 P3鸭血清DHBV- DNA浓度均显著降低（P＜
0.01）。WF对感染DHBV的鸭血清DHBV- DNA的影响见表
1；药物对鸭血清DHBV- DNA的抑制率变化见图2。
表 1 WF对感染DHBV的鸭血清DHBV- DNA的影响（x±s，n＝6）
Tab 1 Effect of WF on DHBV- DNA in model ducklings ofter infected with DHBV（x±s，n＝6）
组别
模型组
WF低剂量组
WF高剂量组
3TC组
剂量/mg·kg- 1
-
75
150
50
OD490
T0
1.83±0.21
2.09±0.13
2.67±0.13
1.88±0.11
T5
1.75±0.15＊
1.90±0.11＊
2.34±0.23＊＊
1.56±0.31＊
T10
1.66±0.22
1.78±0.15＊＊
2.20±0.22＊＊
1.25±0.43＊＊
P3
1.73±0.23
1.68±0.11＊＊
2.22±0.16＊＊
1.60±0.35
与同组T0比较：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01
vs. at T0 of the same group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01
T0 T5 T10 P3 T0 T5 T10 P3
T0 T5 T10 P3T0 T5 T10 P3
图1 DHBV感染后鸭血清DHBV- DNA水平变化
A.模型组；B.拉米夫定组；C. WF低剂量组；D. WF高剂量组
Fig 1 Plasma concentration of DHBV- DNA in model
ducklings after infected with DHBV
A. model group；B. lamivudine group；C. WF low- dose group；D. WF
high- dose group
A B
C D
4 讨论
DHBV的生物学特性及感染特点与人乙型肝炎病毒类
似，已被作为研究人乙型肝炎病毒的重要动物模型[6]。本研究
小组前期运用乙型肝炎病毒基因转染的 2215细胞，在白背叶
中筛选出了具有显著抗病毒活性的WF。进一步在DHBV感
染的鸭模型中，检测药物在鸭体内对DHBV的抑制作用，以期
更全面、更合理地评价WF的抗乙肝病毒作用。本研究发现，
所有鸭在DHBV感染后第 7天，均检测到DHBV- DNA阳性，
表明DHBV感染鸭模型成功复制。经 2个实验剂量的WF处
理，鸭血清DHBV- DNA浓度均有所下降，且对DHBV- DNA
的抑制程度与用药时间呈正相关，其中高剂量WF在T10后对
鸭血清DHBV- DNA的抑制率达 17.37％。3TC在治疗期间对
鸭血清 DHBV- DNA 抑制效果显著，但停药后鸭血清
DHBV- DNA反跳明显，而高、低剂量WF在 P3未见鸭血清
DHBV- DNA明显反跳，且低剂量WF组的DHBV- DNA抑制
率还略有上升，提示WF可能比3TC对乙型肝炎病毒有更长效
的抑制作用。
综上所述，本研究在DHBV感染的鸭模型中评价了WF对
血清DHBV- DNA的抑制作用，发现WF能显著抑制鸭血清
DHBV- DNA，用药后的最大抑制率分别达到 19.49％和
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17.37％，且停药后反跳弱于 3TC。本研究结果表明，WF在体
内对DHBV- DNA的复制有显著抑制作用，且其作用维持时间
可能较长。
参考文献
[ 1 ] 赵进军，吕志平，王晓东，等.白背叶根在肝纤维化动物模
型中抗氧化作用的实验研究 [J].中药材，2002，25（3）：
187.
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肝细胞损伤的保护作用 [J]. 华西药学杂志，2003，18
（4）：257.
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的体外实验研究 [J].时珍国医国药，2006，17（8）：1 437.
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的实验研究[J].中西医结合学报，2006，4（3）：285.
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研究[J].解放军药学学报，2005，21（5）：360.
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毒的抑制作用研究 [J].中国药房，2008，19（33）：2 563.
（收稿日期：2009- 03- 01 修回日期：2009- 11- 17）
40
30
20
10
0
T5 T10 P3
Control
WF 75 mg·kg-1
WF150 mg·kg-1
3TC
图2 WF对鸭血清DHBV- DNA的抑制率变化（n＝6）
与同时间点的模型组比较：＊P＜0.05
Fig 2 Inhibition ratio of WF against DHBV- DNA（n＝6）
vs. model group at same time point：＊P＜0.05
抑
制
率
/％
痛泻要方的抗炎作用研究Δ
朱爱江 1＊，方步武 1，吴咸中 2#，田在善 2，张永进 1，郭世铎 2，李东华 2（1.天津医科大学药理教研室，天津市
300170；2.天津市中西医结合急腹症研究所，天津市 300100）
中图分类号 R285；R97 文献标识码 A 文章编号 1001- 0408（2010）07- 0592- 03
摘 要 目的：研究痛泻要方的抗炎作用。方法：采用角叉菜胶复制大鼠足肿胀和大鼠背部气囊模型，巴豆油混合致炎剂复制小
鼠耳肿胀模型，鲁米诺化学发光法测定多形核白细胞（PMN）的发光强度。大鼠气囊炎性渗出液中前列腺素E2（PGE2）、白细胞介
素- 6（IL- 6）和大鼠血清皮质醇用放射免疫法测定，一氧化氮（NO）用硝酸还原酶法测定。结果：痛泻要方对大鼠足肿胀有显著抑
制作用，能显著减少气囊炎性渗液中 IL- 6、NO含量，对气囊模型大鼠血清皮质醇含量无显著影响，且能显著抑制激活的PMN化
学发光。结论：痛泻要方有显著的抗炎作用，其机制为抑制NO、IL- 6的产生，抑制PMN产生氧自由基，但可能与影响下丘脑-垂
体-肾上腺皮质轴无关。
关键词 痛泻要方；抗炎；白介素- 6；一氧化氮；皮质醇；多形核白细胞
Anti- inflammation Effect of Tongxie Yaofang
ZHU Ai-jiang，FANG Bu-wu，ZHANG Yong-jin（Dept. of Pharmacology，Tianjin Medical University，Tianjin
300170，China）
WU Xian-zhong，TIAN Zai-shan，GUO Shi-duo，LI Dong-hua（Tianjin Institute of Integration of Traditional and
Western Medicine for Acute Abdomen，Tianjin 300100，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To study anti- immplammation effect of Tongxie yaofang. METHODS：Rat foot- swelling model and
rat back air- cyst model were induced with carrageenin and mice ear- swelling model was induced with croton oil mixed
inflammatory agent. The luminous intensity of polymorphonuclear neutrophil（PMN）was determined using luminol chemilumi-
nescence method. Prostaglandin E2（PGE2），interleukin- 6（IL- 6） and serum cortisol in rat air- cyst inflammatory effusion were
determined with radioimmunoassay. Nitric oxide（NO）was determined by nitrate reductase method. RESULTS：Tongxie yaofang
remarkably inhibited rat foot- swelling and reduced the level of IL- 6，NO in inflammatory effusion without significant effect on the
level of serum cortisol. Tongxie yaofang significantly inhibited luminous intensity of activated PMN. CONCLUSION：Tongxie
yaofang has remarkable anti- inflammation effects. Its anti- inflammation mechanism is related to inhibition of IL- 6 product，NO
product and oxyradical produced by PMN while it isn’t related to influence on hypothalamo- pituitary- adrencortical.
KEY WORDS Tongxie yaofang；Anti- inflammation；Interleukin- 6；Nitric oxide；Cortisol；Polymorphonuclear neutrophil
Δ天津市科技发展计划项目（05YFGDSF02600）
＊副主任药师，硕士。研究方向：临床药学。电话：
022- 84118067。E- mail：ldchensiyuan@163.com
#通讯作者：教授，中国工程院院士。研究方向：药理学。电话：
022- 27022268- 2905。E- mail：wuxianzhong@yahoo.com.cn
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