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·临床研究·临床药物治疗杂志 2013 年 1 月第 11 卷第 1 期 Clinical Medication Journal,Jan 2013,Vol.11,No.1
草乌甲素对大鼠佐剂性关节炎的影响
龙丽  赵金霞  贾汝琳  刘燕鹰  韩蕾  栗占国*
北京大学人民医院风湿免疫科 （北京 100044）
【 摘要 】　目的：了解草乌甲素对佐剂性关节炎（AA）大鼠原发性关节炎的抗炎镇痛作用。 方法：用 Freunds完全佐剂免疫Wistar
大鼠建立 AA动物模型，将其随机分为 3组，即草乌甲素治疗 2组（剂量分别为 100μg·kg-1、50μg·kg-1）、注射用水组。于 AA动物
模型建立当天对实验大鼠进行处理，连续 7d，并记录各组大鼠体重、右踝关节周径变化。治疗结束当天记录炎侧踝关节屈关节疼痛试验
评分，用 ELISA法检测大鼠血清的 TNF-α、INF-γ、PGE2、β-内啡肽含量。 结果： 在 100μg·kg-1治疗组中，草乌甲素在治疗第 2
天即可明显减轻关节肿胀 (P<0.05) ,提高 AA大鼠痛阈 (p<0.05) ,显著降低 AA大鼠 PGE2含量、提升血清β-内啡肽含量（P<0.01）；
在 50μg·kg-1治疗组中，草乌甲素从治疗的第 3天起开始减轻关节肿胀（P<0.05），对大鼠 PGE2含量、提升血清β-内啡肽含量作
用较弱（P >0.05）。100μg·kg-1、50μg·kg-1草乌甲素均可降低 AA大鼠血清 TNF-α含量 (P<0.01)，但两者间无统计学差异；草乌
甲素对血清 INF-γ无明显影响（P >0.05）。 结论：草乌甲素明显改善 AA大鼠关节的肿胀，这可能与其降低血清 TNF-α、PGE2含量
有关；草乌甲素提高 AA大鼠痛阈可能与降低血清 PGE2,提升血清β-内啡肽有关。
【 关键词 】　 草乌甲素；佐剂性关节炎；动物模型； TNF-α；PGE2
【 中图分类号 】 R593.22 ; R931.71 【文献标志码】 　　 A
doi:10.3969/j.issn.1672-3384.2013.01.005
Effect of Bulleyaconitine A (BLA) on Adjuvant Arthritis Rats Long Li, Zhao Jin-xia, Jia Ru-lin, Liu Yan-ying, Han Lei, Li
Zhan-guo. Department of Rheumatology & Immunology, Peking University People’s Hospital, Beijing 100044,china
【 Abstract 】　Objective：To evaluate the effect of bulleyaconitine A(BLA) on adjuvant arthritis rats. Method: AA Wistar rats were
induced by Freund’s complete adjuvant,Beginning from the onset of AA，AA Wistar rats were randomly assigned to bulleyaconitine A
(at a dose of 50μg/kg (n=12),or 100μg/kg (n=12) ),or Aqua pro injection(at a dose of 100μL, n=12), once daily, respectively, for seven
days.Increased percentage of body weight, change of circumference of ancle, and scores of arthritic flexion pain test were evaluated.
The levels of TNF-α,INF-γ,PGE2 and β-EP were measured with the use of ELISA. Result: A 100μg/kg of BLA can significantly reduce
the circumference of arthritic ankle starting from the 2nd day (p<0.05), and the same result occurred at 50μg/kg of BLA from the 3rd day
(p<0.05). BLA produced significant analgesia at a dose of 100μg/kg (p<0.05). The levels of TNF-α and PGE2 increased in 100μg/kg
BLA treated rats (p<0.01). The levels of TNF-α in rats treated with 50μg/kg BLA decreased significantly as compared with Aqua pro
injection group (p<0.01), and there was no difference between 50μg/kg group and 100μg/kg group.Conclusion: BLA can improve the
inflammation of AA rats, which was correlated with its ability of reducing the TNF-α and PGE2 levels in serum. BLA can also reduce
inflammatory pain by reducing the level of PGE2 and increasing the level of β-EP in serum.
【 Key words 】　Bulleyaconitine A, adjuvant arthritis,animal model,TNF-α,PGE2
乌 头 属 植 物 用 于 治 疗 多 种 原 因 导 致 的 关 节 肿
胀 疼 痛 历 史 悠 久， 草 乌 甲 素（bulleyaconitine A，
BLA）是从乌头属植物滇西嘟拉中提取出的生物碱，
是一种新型植物药，具有较好的抗炎镇痛作用。已
有研究表明草乌甲素对小鼠 / 大鼠化学、热板、甲
醛致痛模型均有镇痛作用，对小鼠腹腔毛细血管渗
透性、大鼠鸡蛋清致足跖肿胀及棉球肉芽肿增殖有
抑制作用 [1-2]。临床观察表明草乌甲素对慢性疼痛
有良好的抗炎镇痛作用 [3- 4]。类风湿关节炎（RA）
是临床常见的一种慢性炎性疾病，以多关节肿痛为
主要表现。已有报道表明草乌甲素治疗 RA 具有良
好的抗炎镇痛作用 [5]，但目前缺少相应的机制研究。
本文旨在通过观察草乌甲素对佐剂性关节炎（AA）
大鼠模型的治疗效果，探讨其治疗机制，为临床应
用提供相关实验依据。
1 材料与方法
龙丽目前在四川省人民医院风湿免疫科（成都，610072）；赵金霞目前在北京大学第三医院风湿免疫科（北京，100191）
* 通信作者 ：栗占国 Email:zgli@yahoo.cn
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1.1 实验动物
本实验 Wistar 大鼠 36 只，雄性，体重 120~130g ，
购自维通利华实验动物有限公司，饲养于无特殊病
原体 (SP) 环境的北京大学人民医院实验动物中心。
1．2 实验药物及试剂
草乌甲素标准品（云南昊邦公司馈赠），用灭菌
注射用 水（ 加稀 盐酸助溶），配成 1mg·mL-1 的储
存 液，pH2~3，4 ℃ 备 用， 实 验 溶 液 均 在 当 天 稀 释
成 200μg·mL-1，pH=5[1]；Freunds 完全佐剂（Sigma
公司生产，购自北京鼎国昌盛生物技术有限责任公
司）；PGE2、β- 内啡肽 ELISA 试剂盒购自尚柏生
物 医 学 技 术（ 北 京 ） 有 限 公 司 ；IFN-γ ELISA 试
剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司北京分公司。
1．3 动物模型的建立、分组及治疗
在 Wistar 大鼠右后足跖皮内注射 Freunds 完全
佐剂 0.1mL[4]，次日后全部大鼠注射侧足跖发生持续
肿胀 , 3~4d 后达到高峰 , 随后开始逐日消肿，此阶段
为 AA 大鼠的原发性炎症。在发病当日将全部大鼠随
机分为 3 组，每组 12 只。关节肿胀程度用炎侧踝关
节周径衡量，各组大鼠右踝周径较基础值改变量分别
为 (0.21±0.09) cm、(0.22±0.11) cm、(0.22±0.08)cm，
各组间比较无统计学差异（P>0.05）。3 组分别给予
50μg·kg-1 草乌甲素（A 组）、100μg·kg -1 草 乌
甲素（B 组），注射用水 100μL（C 组）皮下注射，
于发病当日开始每日 1 次，连续给药 1 周（d1~d7）。
1．4 观察指标及方法
1．4．1 炎侧踝关节周径评价 草乌甲素对AA大鼠的原
发性炎症的治疗作用以炎侧踝关节周径的减小来评估。
每日记录体重，测量右踝周径。
1．4．2 踝关节屈关节疼痛试验评分 发病第7天，记
录炎侧踝关节屈关节疼痛试验评分。将动物装进特制
的塑料筒内,放于特制的铁架上, 两后腿和尾部伸出筒外,
稳定后进行测定。跖屈关节时动物若出现嘶叫或短促而
明显的缩腿反应则评分为1，无反应评分为0。分别记录
其嘶叫和缩腿评分,每侧踝关节每种指标的评分为0-5，
两种指标的总评分为0-10[7]。
1.4.3 细胞因子检测 发病第7天，留取血清。根
据 E L I S A 试 剂 盒 说 明 ， 分 别 检 测 血 清 T N F - α 、
INF-γ、PGE2、β-内啡肽水平,以成比例稀释的
阳性质控品浓度绘制标准曲线，根据标准曲线及待
测血清吸光度求得待测血清相应细胞因子水平。
1．5 数据分析
采用 SPSS13.0 软件，计量资料用x s± 表示，组
间比较采用方差分析，P<0.05 表示有统计学差异。
2 实验结果
2．1 对AA大鼠原发性炎症的影响
从 治 疗 的 第 2 日 起，100μg·kg-1 草 乌 甲 素 组
炎侧踝关节周径增长最大者仅 0.60cm，增长最小者
为 0.10cm ；关节肿胀较对照组明显减轻 (P<0.01)，
并 且 持 续 存 在 于 整 个 治 疗 期 间。50μg·kg-1 草 乌
甲素组在治疗的第 3 天关节肿胀开始减轻（P<0.01）,
侧踝关节周径增长最大者 0.80cm，增长最小者亦为
0.01cm。注射用水组炎侧踝关节周径增长最大者达
0.90cm, 增长最小者亦达 0.30cm（表 1）。
2．2 对痛阈的影响
草乌甲素治疗 7d 后，进行炎侧踝关节屈关节疼
痛试验评分，50μg·kg-1、100μg·kg-1 草乌甲素
组、生理盐水组分别为 (6.08±1.44)、(4.08±0.79)、
(6.92±0.67)，100μg·kg-1 草 乌 甲 素 组 较 对 照 组
明 显 提 高 了 痛 阈 (P<0.01)，50μg·kg-1 草 乌 甲 素
有提高痛阈的趋势，但无统计学意义。
2．3 对细胞因子的影响
如 表 2 所 示， 与 对 照 组 相 比，50μg·kg-1、
表1 草乌甲素对 AA大鼠关节肿胀程度的影响（ x s± ）
组别 n
炎侧踝关节周径/ cm
d1 d2 d3 d4 d5 d6 d7
A组 12 0.24±0.09 0.37±0.05 0.48±0.08** 0.55±0.07* 0.45±0.05** 0.38±0.06 0.21±0.07
B组 12 0.23±0.09 0.31±0.05** 0.46±0.09** 0.51±0.03** 0.46±0.02* 0.37±0.05** 0.15±0.05**
C组 12 0.23±0.09 0.41±0.07 0.58±0.06 0.63±0.08 0.52±0.06 0.43±0.06 0.43±0.06
注：与注射用水组比较，*P<0.05，**P<0.01
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100μg·kg-1 草乌甲素组血清 TNF-α 水平显著降
低（P<0.01），治疗组间无统计学业差异（P>0.05）；
草 乌 甲 素 治 疗 组 血 清 INF-γ 未 见 明 显 降 低
（P>0.05）；100μg·kg-1 草 乌 甲 素 可 显 著 降 低 AA
大 鼠 血 清 PGE2（P<0.01）， 提 升 β- 内 啡 肽 水 平
（P<0.01），50μg·kg-1 草乌甲素作用较弱（P>0.05）。
2．4 对体重的影响
以体重变化作为观察 AA 大鼠一般情况的指标，
在治疗期间，各组大鼠体重增长无明显差异（P>0.05），
如图 1 所示，提示草乌甲素有良好的耐受性。
图1 草乌甲素对AA大鼠体重的影响
3 讨论
RA 是一种主要累及关节的慢性致残性疾病，细
胞因子分泌失衡在 RA 的发生发展中起着重要作用。
大鼠 AA 由于具有与人类 RA 相似的病理学和免疫
学特征 , 是常用的一种研究 RA 的实验动物模型 [8]，
已有多篇文献报道利用该模型进行 RA 的药物治疗
研究［9-11］。TNF-α 作 为 一 种 重 要 的 促 炎 因 子， 介
导了 RA 病程中的许多炎症反应 ；INF-γ 是 RA 病
程中另一种重要的炎症因子，它可以激活单核 - 巨
噬细胞，使其释放 IL-1、TNF-α 等炎症因子。RA
患者血清和关节液中可以检测到 TNF-α、INF-γ
含量增高。本次实验观察到草乌甲素可以改善 AA
大鼠的原发性关节炎关节肿胀程度，该疗效与剂量
有一定关系 , 可降低血清 TNF-α，但对 INF-γ 影
响 较 小。 提 示 草 乌 甲 素 减 轻 关 节 炎 症 主 要 与 降 低
TNF-α 水平相关。
PGE2 是 在 致 炎 因 子 作 用 下， 局 部 组 织 产 生 和
释 放 的、 具 有 致 炎 致 痛 作 用 的 炎 症 介 质。PGE2 可
引起局部血管通透性增加，进一步加重炎症反应，
促使滑膜细胞、成纤维细胞增殖，血管新生，产生
胶原酶和其他中性蛋白酶，导致骨和软骨破坏 [12]。
100μg·kg-1 草乌甲素能明显降低血清 PGE2，这可
能是优于 50μg·kg-1 草乌甲素抗炎效果的原因之一。
PGE2 尚能激活或致敏外周痛觉感受器，传递痛
觉信号，产生疼痛过敏，是重要的疼痛介质。β- 内
啡肽与 PGE2 作用相反，是一种具有较强镇痛作用
的神经肽。炎症、外伤等因素可激活中枢内源性阿
片肽系统，β- 内啡肽释放增加，产生主动对抗疼痛
的应激反应。本次实验表明 100μg·kg-1 草乌甲素
能提高 AA 大鼠痛阈，其镇痛作用主要与降低 AA 大
鼠血清 PGE2、提升内源性 β- 内啡肽水平有关。本
实验表明草乌甲素有降低 AA 大鼠血清 TNF-α 和
PGE2 含量，提升 β- 内啡肽的作用，其效应与剂
量有一定关系。
张琴等 [13] 研究表明草乌甲素对大鼠胃肠黏膜有
较高的安全性。在本次实验过程中，未发现大鼠有
进食、活动等异常，各组间体重增长无差异，提示
草乌甲素治疗较安全，毒副作用较小。
总 之， 草 乌 甲 素 治 疗 RA 的 作 用 与 抑 制 炎 症、
疼 痛 介 质 有 关， 且 毒 副 作 用 较 小， 有 良 好 的 应 用
前景。
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（下转 第 23 页）
表2 草乌甲素对 AA大鼠血清细胞因子的影响（ x s± ）
组
别
n TNF-α/
pg·mL-1
INF-γ/
pg·mL-1
PGE2/
pg·mL-1
β-内啡肽/
pg·mL-1
A组 12 357.15±146.85* 101.9±8.75 68.31±29.32 11.78±3.33
B组 12 294.04±77.31* 99.17±4.49 20.32±5.81* 16.91±10.45*
C组 12 473.91±113.2 97.77±6.11 68.51±17.09 8.81±3.28
注：与注射用水组比较，*P<0.01
45
40
35
30
25
20
15
5
1 2 3 4 5 6 7
10
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