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白 背叶根对肝纤维化大鼠模型的实验研究*
赵进军　吕志平　张绪富 (第一军医大学中医系 广州 510515)
摘要: 目的　通过大鼠肝纤维化动物模型 ,研究白背叶根防治肝纤维化的作用。方法　采用 40% CCl4花生油溶液制备大鼠肝纤维化模型 ,观察
白背叶根对大鼠肝纤维化血清中各项指标的影响。 观察的指标包括:白蛋白 ( ALB)、球蛋白 ( GLB)、丙氨酸转氨酶 ( AL T)、天门氨酸转氨酶
( AST)、透明质酸 ( HA)、层粘蛋白 ( LN)、前三型胶原 ( PⅢ C)和四型胶原 ( Col lagenⅣ )。 结果　白背叶根能显著降低大鼠血清中 GLB、 ALT、
HA、 LN和四型胶原的水平 ,并能减轻肝脏内纤维增生程度。 结论　白背叶根具有抗肝纤维化作用。
关键词: 白背叶根 ;肝纤维化 ;中药治疗
中图分类号: R965. 1　文献标识码: A　文章编号: 1006-3765( 2002) 02-0018-03
The Study of Baibeiyegen on Treatment of Liver Fibrosis
ZHAO Jin-jun ,LU ZHI -ping ,ZHANG Xu -fu (The Department of Tradit ional Chinese Medicine ,the First Military
Medical University ,Guangzhou , 510515)
ABSTRACT: OBJECTIVE　 To investig ate the ef fect of baibeiyegen in t rea tment of Liv er fibro sis in the rat
model.METHODS　 A rat model of Liv er fibrosis w as prepared wi th o f 40% CCl4 in peanut oil. A series of
i tems in th e blo od w ere detected, including ALB、 GLB、 ALT、 AST、 HA、 LN、 PⅢ P and Co llag en Ⅳ .
RESULTS　 The serum level o f GLB、 ALT、 HA、 LNand Collag enⅣ were signi ficant ly decreased, and the
fo rmation o f Liver fibrosis w as successfully ameliorated by the baibeiy egen. CONCLUSION　 The
baibeiyegen could retain the prog ression of Liv er fibro sis.
KEY WORDS: Baibeiyegen; Liv e r fibr osis; traditional, Chinese medical tr eatment
　　各种病因引起的慢性肝病 ,各种损伤因素所致
的肝脏损伤 ,都可能发生肝细胞坏死 ,炎症并继发纤
维化的病理特征。 在过去的几十年里 ,肝纤维化、肝
硬化能否发生逆转 ,一直是医学界有争议的问题。自
从 Rogking提出人典型发展的肝硬化完全可以发生
逆转后 ,肝纤维化的研究成了消化病学中的一个热
点课题 ,但目前还缺乏有效的药物完全阻断或逆转
这一过程。 白背叶 Mallotus apelta( Lour. ) M uell. -
Arg是南方地区常见的一种草药 ,具有清热解毒、祛
湿的作用 ,我们经临床验证发现它可以较好地治疗
急性病毒性肝炎。 本实验是为了研究它是否具有抗
* 全军医药卫生科研基金课题资助项目
肝纤维化作用 ,并进一步探讨其作用机理。
1　材料与方法
1. 1　动物模型的制备　雄性普通级 Wistar大鼠 30
只 ,体重 190± 10g ,第一军医大学实验动物中心提
供。 CCl4组和白背叶根组:第一次皮下注射 40%四
氯化碳花生油溶液 0. 5m l /100g,以后改为 0. 3ml /
100g ,每周两次 ;对照组注射同量的生理盐水。 前 2
周给动物饲以高脂饮食 ( 79. 5%玉米粉+ 20%猪油
+ 0. 5%胆固醇 ) ,后 4周饲以单纯玉米面 (混以
0. 5%胆固醇 ) ,共 6周。
1. 2　主要试剂　分析纯 CCl4 ,汕头光华试剂厂产
品 ; 透明质酸 ( Hyaluronate acid, HA)、层粘蛋白
( Laminin, LN )、前三型胶原 ( procollag en typeⅢ , P
·18·
海峡药学　 2002年　第 14卷 第 2期
Ⅲ C)、四型胶原 ( ty peⅣ Collag en)放免检查测试剂盒
购至上海海军医学研究所 ; ALT、 AST试剂盒为南
京建成生物工程公司产品。 白背叶根由第一军医大
学中医系制药中心加工提取有效成份 ,制成水剂 ,含
生药 0. 25g· ml- 1。
1. 3　动物分组及药物处理　雄性普通级 Wistar大
鼠 30只 ,随机均分为 3组: 正常对照组、 CCl4组和白
背叶根组。实验第 6周开始给予药物灌胃 ,每日 1
次 ,每次 2ml;对照组和 CCl4组给等量的生理盐水 ,
共给药 30d,末次给药 24h后 ,乙醚麻醉 ,打开腹腔 ,
从腹主动脉采血 ;取肝左叶距边缘 3mm处肝脏 ,中
性 10%福尔马林固定制作光镜标本 ,用 2. 5%戊二
醛固定制作电镜标本。
1. 4　指标测定　 ( 1)光镜标本: 石蜡包埋 ,常规切
片 , HE和 Masson染色 ; ( 2)光镜标本: 2. 5%戊二醛
前固定 ,锇酸后固定 ,切片后 50nm, JEM-120EXDJD
电镜观察 ; ( 3) ALB、 GLB检测应用日立 750型自动
生化分析仪 ; ALT、 AST检测采用赖氏法。 HA、 LN、
PⅢ C、Ⅳ型胶原检测采用放免法 ,按试剂盒说明进行
操作。
1. 5　统计方法　上述各项指标均计算均数 (x )与标
准差 ( SD) ,用统计软件 SPSS8. 0进行方差分析。
2　结果
2. 1　动物观察　在造模结束后 ,模型组和白背叶根
组各有 2只和 1只大鼠死亡。模型组大鼠皮毛干涩 ,
胡须下垂 ,喜睡少动 ;白背叶根组大鼠皮毛光洁 ,与
正常鼠相似 ,但体重增加不明显 ,这可能与白背叶根
有清热利湿作用有关。
2. 2　血清中 ALB、 GLB、 ALT、 AST的变化　白背
叶根可以显著升高血清中白蛋白水平 ( P < 0. 01) ,而
降低球蛋白水平 ( P < 0. 01) ;白背叶根并可显著降低
丙氨酸转氨酶 ( P< 0. 01) ,但对天冬氨酸转氨酶仅有
降低的趋势 (见表 1)。
表 1　白背叶根对血清蛋白和转氨酶的影响
正常对照组 模型对照组 白背叶根组
白蛋白 (g· L- 1) 32. 12± 3. 1 1# 26. 23± 6. 28* 34. 06± 2. 58#
球蛋白 (g· L- 1) 34. 00± 3. 0 8# 40. 00± 3. 71* 31. 43± 3. 31#
丙氨酸转氨酶 (μ· L- 1 ) 59. 94± 9. 5 0# 661. 45± 294. 48* 355. 35± 210. 52* #
天冬氨酸转氨酶 (μ· L- 1 ) 188. 35± 25. 86 449. 26± 278. 41 343. 62± 172. 64
注: * 代表与正常对照组相比 ,# 代表与模型对照组相比 ( P< 0. 05)。
2. 3　血清中 HA、 LN、 PⅢ C、Ⅳ型胶原的变化:白背
叶根可以显著降低血清中 LN ( P < 0. 01)、 HA( P <
0. 05)和Ⅳ型胶原的水平 ( P < 0. 05) ,但三型前胶原
仅有降低的趋势 (见表 2)。
表 2　白背叶根对血清肝纤 4项的影响
正常对照组 模型对照组 白背叶根组
四型胶原 (μg· L- 1) 15. 92± 8. 52 22. 83± 11. 95 8. 29± 5. 19#
层粘蛋白 ( ng· ml- 1) 38. 51±21. 58# 48. 28±24. 10* 22. 12±9. 02* #
透明质酸 ( ng· ml- 1) 63. 42±17. 36# 284. 88±266. 56* 45. 90± 26. 34#
三型前胶原 (μg· L- 1) 3. 95± 2. 92 8. 15± 3. 25 7. 96± 2. 58
注: * 代表与正常对照组相比 ,# 代表与模型对照组相比 ( P < 0. 05)。
2. 4　肝组织病理变化　光镜下形态学变化: HE染
色标本观察 ,正常组没有肝细胞变性、坏死 ;模型组
见肝小叶内有较广泛的肝细胞点状坏死 ,伴明显的
淋巴细胞浸润 ,肝细胞再生明显 ,有严重的脂质空泡
存在 ,部分肝小叶内可见到桥接样坏死 ,肝小叶破
坏 ;白背叶根组肝小叶中有较少的点状坏死和淋巴
细胞浸润。 Masson染色标本观察 ,正常组肝小叶间
无纤维间隔 ;模型组肝小叶结构被严重破坏 ,汇管区
可见大量纤维组织增生 ,界板破坏较严重 ,分割包绕
肝小叶 ,并伴有部分假小叶形成 ;白背叶根组内纤维
组织增生则不明显 ,界板破坏少。
透射电镜下形态学变化: 正常组线粒体分布均
匀 ,粗面内质网较多 ,平行排列 ,滑面内质网较少 ,核
大内圆 ,部分存在双核现象 ,核仁清晰 ;模型组肝细
胞变性坏死 ,线粒体形态不规则 ,部分嵴退化 ,粗面
内质网较少 ,扩张、脱颗粒 ,滑面内质网较多 ,核固
缩 ,部分核仁消失 ,肝窦壁呈“毛细血管样变化” ,窦
内有大量的纤维束 ,肝星状细胞变大成肌成纤维细
胞 ,胞浆内指滴减少或消失 ;白背叶根组变性肝细胞
较少 ,肝窦周围纤维较少 ,细胞器结构无明显异常。
3　讨论
3. 1　肝纤维化是继发于肝脏炎症或损伤后修复过
程的炎症反应 ,以细胞外基质 ( ex tracellular matrix ,
ECM )在肝内过量沉积为病理特征 ,最终可以导致肝
硬化和肝衰的病变过程。肝纤维化的产生是多种类
型细胞、氧化压力、细胞因子和化学因子等一系列复
杂作用的结果〔 1〕。其中 ,枯否氏细胞 ( KC)和肝星状
细胞 ( HSC)的激活是肝纤维化发生过程中两个重要
的步骤〔2〕。肝星状细胞被激活后 ,转变为肌成纤维细
胞 ,后者是细胞外基质蛋白增生的主要来源。 KC和
HSC还可经旁分泌和自分泌途径产生多种细胞因
子 ,如 TGF-β1、 PDGF、 EGF和 IGF等 ,进一步加剧
肝纤维化的形成〔3〕。 因此 ,抑制肝内炎症 ,保护肝脏
功能 ,减少肝细胞坏死、增生和预防肝星状细胞的激
活是防治肝纤维化的主要手段。
·19·
Strai t Pharmaceutical Journal Vo l 14 No. 2 2002
3. 2　中医没有肝纤维化的称谓 ,但现代中医学者普
遍认为肝纤维化的病因病机为“湿热余毒未尽 ,瘀热
互结阻络 ,致肝郁气滞、脾肾两虚” ,呈虚实夹杂局
面 ,其中瘀湿热毒与脾肾两亏是病机关键。治疗肝纤
维化应以清热解毒、凉血活血、补肾益气健脾为原
则。目前发现多种中药都具有防治肝纤维化的作用 ,
但本实验首次对白背叶根进行肝纤维化防治的动物
实验研究 ,并发现它具有良好的抗肝纤维化功能。白
背叶根味微苦、涩 ,性平。具有清热解毒、收涩消瘀的
作用 ,《福建药物志》上记载: “清热平肝。 治肝炎 ,
……” ,白背叶鲜根 30— 60克可以治疗急慢性肝炎。
我们经临床验证也发现它可以较好地治疗急性肝
炎。白背叶根中含熊果酸乙酸酯、古柯二醇 -3-乙醇
酯、β -谷甾醇、 2β , 29-二羟基羽扇烷等多种成份〔4〕 ,可
以有效地抑制多种细菌的生长 ,起到抗炎的作用〔5〕。
由本实验也可看到 ,白背叶根可以显著升高血清中
白蛋白水平 ,而降低球蛋白水平 ;白背叶根并可显著
降低丙氨酸转氨酶 ,虽天冬氨酸转氨酶降低不显著 ,
但也可看出有此趋势。因此 ,抑制肝内炎症可能是白
背叶根预防肝纤维化的机理之一。
3. 3　肝纤四项的检查是目前较常采用的一种无创
检查肝纤维化的指标。 但对该四项指标能否正确反
映出肝纤维化及其程度 ,尚有很大的争议。从本实验
结果看 ,肝纤四项与肝纤维化程度的相关系数从大
到小排列是: HA> LN> Ⅳ胶原> PⅢ C胶原 ,因此
我们认为 HA和 LN可以较好地反映出纤维化的程
度 ,而 PⅢ C和Ⅳ型胶原则较差 ,这与其他学者的看
法相似〔6〕。 在诊断肝纤维化时 ,是以病理检查为标
准 ,在本实验中 HE染色表明白背叶根可以明显减
轻肝内炎症反应 ,并显著减轻肝纤维化程度 ; Masson
染色显示白背叶根组纤维增生程度明显低于 CCl4
组。研究结果说明白背叶根可以减少肝细胞坏死 ,抑
制肝内纤维增生 ,阻断肝纤维化的发展过程 ,这可能
是白背叶根治疗肝纤维化的另一个机理。 但白背叶
根治疗肝纤维化的具体机理 ,以及何种成份起作用
等还需进一步的研究。 就目前研究可以看出白背叶
根具有良好的治疗肝纤维化的前景。
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· 药品检验·
红 花桑寄生叶 、枝中总黄酮成分的含量制定
刘育梅　苏燕评　陈炳华　刘剑秋 (福建师范大学生物工程学院 福州 350007)
摘要: 　在红花桑寄生叶、枝中黄酮、蒽醌、香豆素等化学成分预试的基础上 ,采用聚酰胺吸附 -硝酸铝显色法测定了叶、枝的 3h水浴 ( 60℃～
70℃ )抽提液中总黄酮的含量 ,结果表明: 在料液比 1∶ 25,乙醇浓度 60% ,水浴 3h以上的条件下 ,叶提取液总黄酮的含量为 7. 9% ,而枝提取液
为 6. 01% ,在 100min以内显色稳定性良好 ,平均回收率为 96. 25% ,基本符合实验要求。
关键词: 总黄酮 ;红花桑寄生 ;提取
中图分类号: R927. 2　文献标识码: A　文章编号: 1006-3765( 2002) 02-0020-03
Studies on Total Flavonoids from Stem and Leaf of Scurrula Parasitica
L .
LIU Yu -mei SU Yan-ping CHEN Bing -hua LIU Jian-qiu (Bioengineering College ,Fujian Teachers University ,
Fujian Fuzhou , 350007)
·20·
海峡药学　 2002年　第 14卷 第 2期