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漏芦提取物对四氯化碳致肝纤维化大鼠SOD;MDA及α-平滑肌肌动蛋白表达的影响



全 文 :收稿日期:2007-02-09; 修订日期:2007-04-10
基金项目:吉林省教育厅重点科技发展计划项目(No.2006001)
作者简介:崔立敏(1971-),女(汉族),吉林延吉人 ,现任延边大学附属医
院主管护师 ,学士学位 ,主要从事临床护理教学与科研工作.
*通讯作者简介:陈丽艳(1974-), 女(汉族),吉林汪清人 , 现任延边大学
基础医学院讲师 ,硕士学位 ,主要从事中药生物化学研究工作.
漏芦提取物对四氯化碳致肝纤维化
大鼠 SOD, MDA及 α-平滑肌肌动蛋白表达的影响
崔立敏 1 , 陈丽艳2*
(1.延边大学附属医院 ,吉林 延吉 133000; 2.延边大学基础医学院 ,吉林 延吉 133000)
摘要:目的 观察漏芦提取物对四氯化碳致肝纤维化大鼠超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)及 α-平滑肌肌动蛋白
(α-SMA)表达的影响。方法 50只雄性大鼠随机分为正常组 、模型组 、给药组和秋水仙碱组 , 并以灌胃的方式给药 ,比色
分析法测血清 SOD活性和 MDA含量 , 同步。观察漏芦提取物对四氯化碳致肝纤维化大鼠肝病理组织学的影响。结果
漏芦给药组肝纤维化指标 SOD活性明显高于模型组(P<0.05), 血清 MDA含量较模型组明显降低;α-SMA表达明显低
于模型组。结论 漏芦提取物对四氯化碳致肝纤维化大鼠有一定的保护作用。
关键词:漏芦; 肝纤维化; 大鼠
中图分类号:R285.5  文献标识码:A  文章编号:1008-0805(2007)10-2444-01
EffectofRadixRhaponticalExtractonSOD, MDAandα-SMAinRatswithLiverFibro-
sisInducedbyCCl4
CUILi-min1 , CHENLi-yan2*
(1.AfiliatedHospialofYanbianUniversity, Yanji133000, China;2.BasicMedicalColegeofYanbianUni-versity, Yanji133000 , China)
Abstract:ObjectiveTostudytheefectofefectofRadixRhaponticalextractonSOD, MDAandα-SMAinratswithLiverFi-
brosisInducedbyCCl4.Methods 50 maleratsweredividedintonormal, model, RadixRhaponticalandcolchicingroup.TheactivityofSODandthecontentofMDAwereinvestigatedusingcolorimetricmeasurement.Degreesoffibrosisandα-SMAwere
determinedbyhistopathologyundermicroscope.ResultsTheactivityofSODwashigherthanthatofRadixRhaponticalgroupand
thecontentMDAdecreased;α-SMAexpressionshowedthatthedegreesofliverfibrosisinRadixRhaponticalgroupwasslighter
thanthatofmodelgroup.Conclusion RadixRhaponticalExtractisabletoprotectliverfibrosisinducedbyCCl4 inrats.Keywords:RadixRhapontied; Liverfibrosis; Rats
  漏芦(RadixRhaponticl)属菊科植物 ,分布于陕西 、辽宁 、山西
及吉林等省 , 其主要成分为挥发油 , 有清热解毒 、消痈 、下乳及舒
筋通脉等功效。本研究采用四氯化碳诱导大鼠肝纤维化 ,观察漏
芦提取物对四氯化碳致肝纤维化大鼠的保护作用。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 漏芦生物活性成分的制备 漏芦采集于吉林省延吉市市
郊 , 经延边大学药学院刘永镇教授鉴定为正品。水提取物:漏芦
根加水煎煮 3次 , 做成水煎液 ,浓缩成 1 ml含有 4 g生药。
1.1.2 试剂 秋水仙碱 , Serva公司产品;SOD, MDA试剂盒为南
京建成生物工程研究所产品;α-平滑肌肌动蛋白试剂盒为天津
TBD生物技术有限公司产品。
1.1.3 动物 Wistar雄性大鼠 ,体重为 180 ~ 200 g, 由延边大学
医学部动物科提供。
1.2 方法 取 Wistar雄性大鼠 50只 , 分为正常组 、模型组 、漏芦
大小剂量组 、秋水仙碱组。除正常组外 ,每组大鼠首次皮下注射
CCl4 5.0 ml/kg, 以后每周 2次皮下注射 40%CCl4色拉油 3 ml/kg,共 6周;造模的同时 , 给药组分别给予 0.5, 0.25 g/kg漏芦提
取物 , 秋水仙碱组按 0.1mg/kg剂量灌胃。第 6周 , 摘眼球取血 ,
分离血清 , 用比色分析法测定 SOD, MDA的含量 , 天狼猩红染色
观察 α-平滑肌肌动蛋白的表达。 取肝左叶 , 10%福尔马林固定 ,
石蜡包埋 , 5 μm连续切片 , HE染色 ,观察组织学变化 ,将肝纤维
化分为 0 ~ 4级 [ 1] , 0级:无纤维化;Ⅰ级:纤维结缔组织仅局限于
汇管区或汇管区扩大有向小叶发展的趋势;Ⅱ级:纤维结缔组织
增生进入肝小叶 2/3并有Ⅰ级同样的改变;Ⅲ级:纤维结缔组织
进入肝小叶达中央静脉周围;Ⅳ级纤维结缔组织在全小叶多处弥
漫性增生 ,假小叶形成并有Ⅲ级同样改变。
1.3 统计学处理 肝纤维化分级结果比较采用等级资料的秩和
检验 , 两组比较采用 t检验。
2 结果
2.1 一般情况 模型组大鼠毛质粗糙 , 消瘦 ,厌食 , 精神萎靡 , 动
作迟钝 ,死亡 4只;漏芦给药组 、秋水仙碱组大鼠体重与正常组无
明显差别 ,毛质光滑 , 进食良好 ,活泼好动 , 其中漏芦给药组死亡
4只 , 秋水仙碱组死亡 3只。
2.2 各组大鼠肝组织病理变化 模型组肝细胞有广泛的点状坏
死 , 伴炎症细胞浸润 , 肝细胞增生较为明显 , 汇管区结缔组织增
生。秋水仙碱组 、漏芦给药组变化类似。其肝细胞呈点状坏死 ,
炎症细胞浸润轻于模型组。结果见表 1。
表 1 各组大鼠组织学变化
分组 剂量C/g· kg-1 n
肝纤维化分级
0  Ⅰ   Ⅱ  Ⅲ  Ⅳ
正常 *    - 10 9 1
模型     - 6 0 0 1 4 1
漏芦小剂量 * 0.25 7 0 3 2 2
漏芦大剂量 * 0.5 7 0 3 3 1
秋水仙碱 * 10-4 9 0 5 2 2
  与模型组比较 , *P<0.05
2.3 各组大鼠血清 SOD, MDA的变化 结果见表 2。模型组 SOD
活性下降 , MDA含量升高 , 而漏芦给药组 SOD活性升高 、MDA含
量下降 ,但秋水仙碱组无明显变化。
2.4 各组大鼠肝组织 α-平滑肌肌动蛋白染色检测结果 正常组
肝实质未见阳性反应;模型组肝组织纤维增粗 , 汇管区胶原纤维
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时珍国医国药 2007年第 18卷第 10期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2007VOL.18NO.10 
增生较多;而秋水仙碱组 、用药组大鼠肝组织仅在汇管区及纤细
的纤维隔处呈少量的阳性反应 ,明显少于模型组。
表 2 各组大鼠血清 SOD活性 、MDA含量的变化( x±s)
分组 n 剂量 C/g· kg-1 SOD MDA
正常    10 - 135.4±35.6* 4.8±1.8*
模型    6 - 78.6±17.5 9.0±2.4
漏芦小剂量 7 0.25 118.4±23.9* 5.8±2.4*
漏芦大剂量 7 0.5 125.6±27.8* 4.9±1.7*
秋水仙碱  9 10-4 81.4±18.6 9.5±2.7
  与模型组比较 , *P<0.05
3 讨论
肝纤维化是慢性肝病的基本病理特征 ,也是进一步向肝硬化
发展的主要中间环节 , 其特征为肝脏细胞外基质大量沉积。近年
来研究认为 [ 2] , 当肝脏受到物理 、化学及生物因素的刺激时 , 肝
星状细胞(HSC)增殖并激活 , 转变为肌成纤维细胞(MFB), 通过
旁分泌和自分泌作用 ,合成大量的细胞外基质 , 并表达 α-平滑肌
肌动蛋白(α-SMA)。因此 , α-SMA被认为是激活的 MFB的特征
性标记物。现已知 , 秋水仙碱是有效的抗纤维化药物 , 可抑制微
管蛋白的合成 , 体外能刺激胶原酶的合成 , 促进胶原分解。实验
表明 , 漏芦给药组 α-SMA表达较模型组明显减轻 ,与秋水仙碱组
相似 , 提示漏芦有良好的抗肝纤维化的作用 , 其机制可能与抑制
HSC的活化有关。
CCl4是目前诱导发生肝纤维化的常见化学毒物 , 自由基及
其引发的脂质过氧化是其引起肝损伤肝纤维化的主要机制。 活
性氧 、超氧阴离子在体内产生的自由基通过脂质过氧化损伤破坏
肝细胞 , 产生脂质过氧化物直接刺激或通过肝细胞 、枯否氏细胞 、
内皮细胞等旁分泌刺激 HSC使其活化。 脂质过氧化肝脏炎症损
伤是发展至肝纤维化的桥梁。 SOD为高效清道夫 , 可抑制自由
基启动的脂质过氧化 ,其变化可间接反应疾病情况下自由基的变
化。 MDA是脂质过氧化的最终产物 ,可严重破坏细胞膜的结构 ,
导致细胞肿胀 , 坏死 , 其含量反映了组织过氧化的损伤程度。 本
次研究结果显示 ,漏芦给药组 SOD活性与模型组比较明显升高 ,
MDA含量则明显降低 , 这一作用为秋水仙碱所不具备 , 提示在肝
纤维化大鼠模型中 ,漏芦提取物有清除活性氧及抗脂质过氧化作
用 , 能够拮抗 CCl4的毒性。
参考文献:
[ 1 ]  HauasakyA, Saiaho.Serummarkersastoolstomonitorliverfibrosis
[ J] .Digestion, 1998, 59(4):381.
[ 2 ]  乐小华 ,李美忠 ,杨桂林 ,等.肝星状细胞活化与肝纤维化分期和血
清学指标的关系 [ J].实用医学杂志 , 2002, 18(10):1051.
国药鉴别
收稿日期:2007-01-23; 修订日期:2007-04-03
海桐皮及其易混品的比较鉴别
李永杰
(大连医科大学附属第一医院 ,辽宁 大连 116011)
关键词:海桐皮; 伪品; 鉴别
中图分类号:R282.5  文献标识码:C  文章编号:1008-0805(2007)10-2445-01
  海桐皮为常用中药 , 始载于《开宝本草》, 具有祛风湿 、通经
络 、散瘀止痛的功效。目前在我国市场上流通的海桐皮为多种不
同科属植物的茎皮 , 临床应用有些混乱 , 为了确保临床用药安全 、
有效 , 现将在临床中常见的 7种海桐皮进行了比较 ,正品为刺桐 、
刺木通 , 又称为海桐皮。习用品中樗叶花椒 、朵椒 、木棉皮又称为
浙桐皮。习用品刺楸又称为川桐皮。以下主要是通过性状鉴别
和显微鉴别两方面进行了鉴定 ,以便在临床用药时 , 达到简便 、快
速 、准确地鉴别不同品种海桐皮的目的 , 为合理用药提供依据。
1 刺桐
为正品系豆科植物刺桐 ErythrinavariegataL.var.orientalis
(L)Merr.的茎皮。其厚度约为 5.4 ~ 10 mm, 钉刺形状则为基部
或纵向长圆形 , 尖刺或扁刺 , 钉刺基部直径约为 0.4 ~ 0.8 cm。
气微香味淡。在显微鉴别刺桐不含有石细胞 , 含晶厚壁细胞众
多 , 含有草酸钙方晶 , 8 ~ 30 μm 。分泌组织偶见 , 含有棕色
物质。
2 刺木通
为正品系豆科植物刺木通 E.arbresecensRoxb.的茎皮。其厚
度约为 3 ~ 6mm, 钉刺多已除去。气微香味稍苦。在显微鉴别刺
木通不含有石细胞 , 含晶厚壁细胞比较少 , 含有草酸钙方晶 , 5 ~
35 μm。分泌组织偶见 , 含有棕色物质。
3 樗叶花椒
为习用品系芸香科植物樗叶花椒 Zanthoxylumailanthoides
sieb.et.Zucc的干燥树皮 。其厚度约为 1.5 ~ 3 mm, 钉刺形状则
为乳头状 , 钉刺基部直径约为 0.8 ~ 2 cm。气微味微苦。在显微
鉴别上樗叶花椒的石细胞为类圆形或纺锤形 , 切向延长分枝状 ,
含晶厚壁细胞较多 ,含有草酸钙方晶 , 7 ~ 17 μm。有分泌细胞。
4 朵椒
为习用品系芸香科植物朵椒 Z.molleReha的干燥树皮。 其
厚度约为 1.5 ~ 2 mm,钉刺形状则为较鼓起的乳头状 , 钉刺基部
直径约为 0.7 ~ 2 cm。气微味微苦。在显微鉴别上樗叶花椒的
石细胞为类圆形或纺锤形 , 切向延长分枝状 , 但较少。 含晶厚壁
细胞较多 ,含有草酸钙方晶 , 10 ~ 35 μm。有分泌细胞 。
5 木棉皮
为习用品系木棉科植物木棉 Gossampinusmalabarica(DC.)
Merr.的干燥树皮。其厚度约为 10 ~ 20 mm, 钉刺形状则为椭圆
形 , 乳头状有环纹 , 钉刺基部直径约为 1 ~ 3.5 cm。 气微味淡嚼
之有粘性。在显微鉴别上木棉的石细胞为方形或长方形 ,没有含
晶厚壁细胞 ,含有草酸钙方晶 , 为簇晶 , 18 ~ 60 μm。分泌组织有
黏液细胞和大量的棕色物质。
6 刺楸
为习用品系五加科植物刺楸 Kalopanaxseptemlobus(Thunb.)
的树皮 。其厚度约为 2 ~ 7 mm, 钉刺形状则为纵向扁长乳头状 ,
钉刺基部直径约为 0.5 ~ 1.5 cm。气特异味苦。在显微鉴别上
刺楸含有石细胞 ,类圆形或长圆形 , 不含有含晶厚壁细胞 ,含有草
酸钙方晶 、簇晶 , 100 μm左右 。有分泌腔。
7 楤木
为伪品。五加科植物楤木 AraliachinensisL.的干燥树皮。
厚 0.3 ~ 0.6 cm。突起的皮刺 ,皮刺粗短 , 圆形或椭圆形 , 稍纵向
扁长 , 皮刺基部直径 0.2 ~ 0.6 cm。气微香 , 味微苦 , 嚼之有粘
性。石细胞极多 ,三角形 、卵形或不规则形 , 散在或群在 , 壁厚 ,
孔沟明显。草酸钙簇晶多见 , 直径 27 ~ 96.6μm,大小不等 , 大而
钝 , 散在。草酸钙方晶散在 , 直径 27.6 ~ 55.2 μm方形或不规则
多角形 。分泌道呈长椭圆形。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2007VOL.18NO.10 时珍国医国药 2007年第 18卷第 10期