全 文 ：白阿魏侧耳子实体抗氧化活性的研究
郑　琳1 , 蒲　训1 , 毕玉蓉1 , 2
(1.兰州大学生命科学学院植物学系 , 兰州　730000;2.兰州大学应用有机化学国家重点实验室 , 兰州　730000)
　　摘要:本实验通过对白阿魏侧耳人工栽培子实体不
同提取组分的抗氧化活性进行初步的研究 , 结果发现其
不同组分均可清除 Fenton反应生成的·OH , 其中以热提乙
酸乙酯提取物的抑制率最高。
关键词:白阿魏侧耳子实体;羟自由基;超氧阴离
子自由基
中图分类号:S646.2　　　文献标识码:A
文章编号:1003-8310 (2003) 01-0023-04
白阿魏侧耳 , 又名白灵菇 、 天山神菇 , 属担子
菌亚门 , 层菌纲 , 伞菌目 , 侧耳科 , 侧耳属。野生
种春末夏初腐生或兼性寄生于伞形科草本植物阿
魏 , 刺芹 , 拉瑟草等的根茎上 , 是干旱草原上品质
优良的特有大型肉质伞菌。在我国仅分布于新疆高
海拔地区[ 1] 。近年来 , 由于环境恶化 , 草场退化 ,
白阿魏侧耳野生种目前已很难采到 , 所能得到的均
为野生驯化品种。
白阿魏侧耳的人工栽培已小具规模 , 它正以其
特有的食 、 药用价值及广阔的商业前景倍受人们青
睐 , 在市场上日渐走俏 , 成为当前最具开发前景的
菌种之一。但对于其液体发酵培养及生理生化研究
仍处于起步阶段 , 白阿魏侧耳子实体的抗氧化作用
研究尚未见到报道。本次实验通过对白阿魏侧耳人
工栽培子实体不同提取组分的抗氧化活性的初步研
究 , 为更好地保护 、 开发 、 推广这种名贵的食用菌
提供实验依据。
1　材料与方法
1.1　材料　实验所用的人工栽培子实体为甘肃定
西明珠生物工程有限责任公司惠赠 , 并根据有关文
献鉴定其孢子为:短腊肠状 , 15.45μm ×9.08μm ,
有内含物 , 确定其品种为新疆白阿魏侧耳[ 4] ;邻苯
三酚 , 硫酸亚铁 , 番红花 T , 甘露醇 , 抗坏血酸 ,
双氧水等均为国产分析纯。
1.2　试样的制备
1.2.1　热提取法:
a.将子实体粉碎 , 用 95%乙醇加热回流 , 提
取液浓缩后分为两部分 , 一部分用乙酸乙酯萃取 ,
将萃取液浓缩 、 烘干。另一部分直接烘干备用。
b.将子实体粉碎后 , 用沸水抽提 , 提取液加
三倍体积无水乙醇沉淀多糖 , 离心 , 沉淀与上清液
分开烘干备用。由此得到热提醇提物 、 水提物 、 乙
酸乙酯提取物 、 水溶性粗多糖及多糖上清液 5个样
品。
1.2.2　冷提取法:将子实体粉碎 , 加蒸馏水于
23℃静置 , 提取液浓缩后分为两半 , 按上述方法分
别得到冷提水提物 、 乙酸乙酯提取物 、 水溶性粗多
糖及多糖上清 4 个样品。
1.3　抗氧化活性的测定方法
1.3.1　·OH 的生成与测定[ 5]根据 Fenton 反应原理 ,
H2O2在 Fe2+存在的情况下生成·OH ,
Fe2++H2O2※Fe3++·OH+OH-
后者可使番红花 T褪色 , 即在 520nm 可测出·OH 的
生成情况 , 进而检测出加入样品的抗氧化活性。设
试剂空白组 , 对照组 , 阳性药物甘露醇对照组 , 不
同浓度的样品组和不同浓度的样品空白对照组。反
应终体积 4.5ml , 其中含 150mm0l/ L磷酸钠盐缓冲
液 (pH7.4), 114μmol/L番红花 T , 1.0mmol/ L硫酸
亚铁含 1.927mmol/L EDTA-Na2 , 3%H2O2 (新鲜配
制)以及不同浓度的甘露醇或样品;对照组以蒸馏
水代替药物和硫酸亚铁的用量 , 试剂空白组亦以蒸
馏水代替药物用量。 以上各管在 37℃恒温水浴
30min 后 , 以 0.3mol/ L EDTA-Na2 终止反应。以试
剂空白组调零 , 在 520nm 处测定其 OD 值 , 按以下
公式计算清除率:
清除率= (A样品-A样品空白)/A对照×100%
1.3.2　O-.2 的生成与测定[ 6] 　邻苯三酚在碱性条
件下能发生自氧化 , 生成有色中间物 (在 420nm 处
有最大吸收峰)和 O-.2 , O-.2 对自氧化又起催化作
用 , 依据有色中间物生成量的多少 , 可判断 O-.2
生成量的多少。实验体系为 3mL TRIS-HCl缓冲液
(pH8.2), 0.1mL不同浓度的样品 , 25℃水浴 20min
后加入 3mL 7mmol/ L/的邻苯三酚 , 精确反应 4min
后滴入 10mol/ L 的 HCl 终止反应 , 420nm 处测 OD
值 , 根据抑制率判断样品对 O-.2 生成的影响。
抑制率= 〔A对照-(A样品-A样品空白)〕 / A对照×100%
2　结果
2.1　不同提取方法对提取率的影响
冷提取法由于对细胞破坏力度不强 , 可能使得
许多胞内物质未完全渗出 , 所得总提取量要小于热
收稿日期:2002—08—31
23第 22 卷　第 1期　　　　　　　中国食用菌　EDIBLE FUNGI OF CHINA
DOI :10.13629/j.cnki.53-1054.2003.01.011
　　表 1 热提取法所得提取量
提取物 干子实体提取量
w/mg·g -1＊
提取率
(%)
醇提物 302.90 30.29
乙酸乙酯提取物 6.25 0.62
水提物 268.80 26.88
水溶性粗多糖 19.69 2.00
多糖上清 159.87 15.99
表 2 冷提取法所得提取量
提取物 干子实体提取量
w/mg·g -1＊
提取率
(%)
水提物 277.38 27.74
乙酸乙酯提取物 13.99 1.40
水溶性粗多糖 25.17 2.52
多糖上清 251.80 25.18
＊每克干子实体中提取到的毫克样品量
提取法的提取量。但采用冷提所得的乙酸乙酯提取
物要比热提所得的量多一倍 , 可能是热提取中细胞
膜被破坏了。
2.2　不同组分对OH 的清除作用
将烘干备用的各种样品配制成浓度分别为
2.0 , 4.0 , 6.0 , 8.0 , 10.0 (mg/ mL)样品液 , 加到
反应体系中 , 终浓度分别为 2.22 ×10-1 , 4.44 ×
10-1 , 6.67 ×10-1 , 8.89 ×10-1 , 1.33 (mg/mL)。
实验以甘露醇为阳性对照 , 结果证明不同条件下提
取的不同组分对·OH 均有一定清除能力 , 且呈一定
的剂量依赖关系;其中以热提取法得到的乙酸乙酯
提取物清除率最高 , 其次为热提醇提物 、 冷提乙酸
乙酯提取物 、 热提多糖上清液 、 冷提多糖上清液 、
热提水提物 、 甘露醇。热提醇提物和冷提乙酸乙酯
提取物 、 多糖上清液均出现高浓度清除率下降现
象;热提水溶性粗多糖及冷提水提物随浓度的升
高 , 对·OH 清除率依次降低。
2.3　不同组分对O-.2 的清除作用
加入样品液浓度为 2.0 , 4.0 , 6.0 , 8.0 , 10.0
(mg/mL), 反应终浓度分别为 3.28×10-2 , 6.56×
10-2 , 9.84×10-2 , 1.31×10-1 , 1.64×10-1 (mg/
mL)。实验以抗坏血酸为阳性对照 , 从结果来看 ,
抗坏血酸对 O-.2 生成的抑制率最高 , 远远超过其
他提取物;其次到热提水溶性粗多糖 、 热提醇提
物。热提水提物 、 多糖上清液以及冷提水提物 、 乙
酸乙酯提取物 、 可溶性粗多糖 、 多糖上清液对 O-.2
的抑制均不明显。
表 3 热提取不同组分对·OH的清除率 (x±s%)
提取部分
提　取　物　质　量　浓　度　ρ/mg·mL-1
2.0 4.0 6.0 8.0 10.0
甘露醇 12.90±1.42 26.93±1.89 37.08±1.88 44.80±2.21 50.21±2.33
醇提物 43.15±2.48 59.14±5.92 61.28±1.99 68.79±9.86 68.38±7.08
乙酸乙酯提取物 67.32±2.61 72.98±3.58 75.63±0.89 77.11±0.73 81.69±1.66
水提物 27.47±2.36 39.88±4.13 47.09±3.24 49.65±1.91 53.94±3.49
水溶性粗多糖 31.11±1.91 13.57±1.20 9.59±2.96 4.34±4.05 —＊
多糖上清液 14.12±3.16 29.41±0.35 40.02±0.08 52.80±1.97 60.46±2.42
　　＊(—:表示该浓度下无抗氧化活性)
表 4 冷提取不同组分对·OH的清除率 (x±s%)
提取部分
提　取　物　质　量　浓　度　ρ/mg·mL-1
2.0 4.0 6.0 8.0 10.0
水提物 42.14±0.90 37.43±1.50 27.06±0.76 16.04±2.12 6.95±0.76
乙酸乙酯提取物 32.56±1.22 48.94±0.71 56.68±3.07 59.70±2.09 57.69±5.06
水溶性粗多糖 41.08±3.40 43.20±5.75 44.59±5.04 43.80±8.59 36.54±11.97
多糖上清液 45.24±1.50 51.69±3.74 48.79±5.95 43.92±1.18 25.24±2.27
24 中国食用菌　EDIBLE FUNGI OF CHINA　　　　　　　Vol.22 , No.1
表 5 热提取不同组分对 O-.2 的清除率 (x±s%)
提取部分 提　取　物　质　量　浓　度　ρ/mg·mL
-1
2.0 4.0 6.0 8.0 10.0
抗坏血酸 34.02±1.01 69.42±1.89 76.64±0.74 77.09±2.06 77.56±0.08
醇提物 5.37±1.93 10.91±2.95 16.10±0.82 18.55±4.52 25.52±2.00
水提物 3.96±0.44 6.95±1.15 7.66±0.44 8.58±1.47 10.72±0.33
水溶性粗多糖 8.94±1.17 17.87±2.33 30.76±7.56 41.17±3.17 54.24±3.32
多糖上清液 2.44±0.98 3.90±1.72 4.73±2.11 6.67±1.15 7.35±3.48
表 6 冷提取不同组分对 O-.2 的清除率 (x±s%)
提取部分
提　取　物　质　量　浓　度　ρ/mg·mL-1
2.0 4.0 6.0 8.0 10.0
水提物 1.50±0.99 2.03±0.75 3.78±1.73 5.57±0.62 14.3±4.40
乙酸乙酯提取物 1.24±0.97 3.38±0.49 1.23±0.02 0.93±0.51 —＊
水溶性粗多糖 6.27±5.26 7.03±0.61 8.02±3.00 11.05±4.50 12.8±9.51
多糖上清 —＊ —＊ —＊ 2.37±1.12 3.57±2.19
　　＊(—:表示该浓度下无抗氧化活性)
3　讨论
体外实验结果表明 , 白阿魏侧耳人工栽培子实
体在不同条件下提取的各不同组分对于 Fenton 反应
生成的·OH 均具有一定的清除作用。羟基自由基是
已知的最强的氧化剂 , 它比高锰酸钾和重铬酸钾的
氧化性还强 , 反应性极强 , 寿命极短 , 对机体的破
坏作用也最大[ 7] , 对·OH 的有效清除说明白阿魏侧
耳体内可能存在着天然抗氧化剂的新资源。但对于
邻苯三酚自氧化产生的 O-.2 清除作用不强 , 推测
在子实体体内清除 O-.2 的功能可能是由抗氧化酶
或其它的小分子抗氧化剂承担。
在不同条件下提取到的不同组分之间 , 抗氧化
活性存在一定差异的。清除·OH 作用以热提取得到
的乙酸乙酯提取相清除率最高 , 其次为热提醇提
物 、 冷提乙酸乙酯提取物 、 热提多糖上清液 、 冷提
多糖上清液 、 甘露醇 、 热提水提物。 对 O-.2 生成
的抑制率来看 , 热提水溶性多糖的抑制率最高 , 其
次是热提醇提物;但仍远低于阳性对照抗坏血酸;
其余各相抑制率均不明显。
本实验还提示我们 , 在白阿魏侧耳人工栽培子
实体中 , 具有抗氧化活性的次生代谢物质为热稳定
质 , 抗氧化作用是各种活性次生代谢物质相互作用
的结果 , 且这些物质的抗氧化作用具有加合性 , 如
醇提能溶解多种次生代谢物质 , 其抗氧化活性就要
比多数单纯提取成分强一些。从白阿魏侧耳水溶性
粗多糖的抗氧化活性来看 , 热提多糖对·OH 和 O-.2
均能有效清除 , 是一种急待开发的天然营养保健
品。
[参 考 文献]
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农业出版社.1998 , 95-96.
[ 2] 张噗安.珍稀菌菇实用栽培技术 [M] .香港:香港
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[ 3] 卯晓岚.中国经济真菌 [ M] .北京:科学出版社 ,
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[ 4] 蒲训 , 齐进军.白灵菇分类学特征诠释 [ J] .甘肃科
学学报 , 2001 , 13 (4):48-50.
[ 5] 吴慧平.当归不同炮制品清除自由基和抗脂质过氧化
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[ 6] 徐叔云 , 卞如濂 , 陈修.药理实验方法学 [ J] .北
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25第 22 卷　第 1期　　　　　　　中国食用菌　EDIBLE FUNGI OF CHINA
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特此启示
2002年 11 月 6 日
Study on the Antioxidative Activities of Pleurotus
eryngii var.nerbrodensis Fruit Bodies
ZHENG Lin1 , Pu Xun1 , BI Yu-rong1 ,2
(1.Department of Botany , Scholl of Life Science , Lanzhou University , Lanzhou 730000;2.National Laboratory of Applied Or-
ganic Chemistry , Lanzhou University , Lanzhou 730000)
Abstract:To provide the experimental basis for protecting and developing the cherish mushroom , Pleurotus eryngii
var.nerbrodensis , the antioxidative activities of the different fractions of its cultured fruit bodies which were extracted by
different conditions were studied in this paper.The results showed that all the different fractions could scanvenge ·OH pro-
duced by Fenton reaction.The highest inhibition was in the fraction extracted by ethyl acetate.
Key words:Pleurotus eryngii var.nerbrodensis fruit bodies , Hydroxyl free radical , Superoxide free radical
26 中国食用菌　EDIBLE FUNGI OF CHINA　　　　　　　Vol.22 , No.1