全 文 ：湖 北 农 业 科 学 2014 年
收稿日期：2014－03－24
基金项目：国家自然科学基金项目（51362012）；云南省教育厅科学研究基金项目（2012Y567）
作者简介：李 泉（1963－），女，云南大理人，副教授，主要从事分析化学方面的教学与研究，（电话）13466251508（电子信箱）
liquan3209＠163．com；通讯作者，王宝森（1961－），男，云南建水人，教授，主要从事分析化学与无机非金属材料方面的研究，（电话）
13988049067（电子信箱）wangbs9561＠126．com。
大草乌 （Aconitum vilmorinianum）为毛茛科植
物黄草乌和膝瓣乌头的块根， 主要分布于四川会
理、贵州西部和云南中部，具有祛风散寒、活血止
痛、解毒消肿的功效，主治风寒湿痹、手足厥冷、跌
打损伤和疮毒［1］。大草乌有毒且苦，在云南种植及应
用广泛，属于菜药兼用植物。
黄酮类化合物是自然界中一类重要的天然有
机化合物，广泛存在于药用植物、水果和蔬菜中，特
别是在高等植物的花、叶、根中较多 ［2］。 黄酮类化合
物具有多种生物活性，有抗溃疡、抗过敏、抗菌、抗
炎、抗氧化、降血脂、治疗心脑血管疾病等功能。 随
着研究方法的不断更新和改进，新的黄酮类化合物
不断被发现，其应用更加广泛［3］。 目前，对大草乌的
分析研究报道较少，为进一步开发大草乌的药用价
值，本研究对野生大草乌中总黄酮的提取与抗氧化
性进行分析， 旨在为大草乌的研究与推广应用，以
及推进药用植物的发展提供科学的依据。
1 材料与方法
1．1 试验材料
野生大草乌购于云南省红河州个旧市集市，产
地为个旧市老厂镇。 大草乌样品先用去离子水冲洗
野生大草乌中总黄酮的提取与抗氧化性分析
李 泉 1，王宝森2，刘贵阳 2，闫 勇 2，唐明宇 1，李 德 1
（1．云南锡业职业技术学院，云南 个旧 661000；2．红河学院理学院，云南 蒙自 661100）
摘要：以石油醚脱脂、乙醇回流提取云南个旧野生大草乌（Aconitum vilmorinianum）中总黄酮，以芦丁为
对照用紫外分光光度法测定了大草乌中总黄酮含量，研究了不同乙醇体积分数、回流时间对总黄酮提取
的影响，采用邻苯三酚自氧化测定其抗氧化性。 结果表明，用 70％乙醇回流提取 3 h，大草乌总黄酮含量
最高，为 1．457％。 大草乌总黄酮对超氧阴离子自由基有明显的清除作用，清除率为 34．49％。
关键词：野生大草乌（Aconitum vilmorinianum）；总黄酮；乙醇回流提取；紫外分光光度法；抗氧化性
中图分类号：R282；S188 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2014）17－4142-03
Extraction of Total Flavonoids in Aconitum vilmorinianum
and Its Anti-Oxidation
LI Quan1，WANG Bao－sen2， LIU Gui－yang2， YAN Yong2， TANG Ming－yu1， LI De1
（1．Yunnan Tin Vocational ＆ Technical College， Gejiu 661000， Yunnan， China；
2．School of Science， Honghe University， Mengzi 661100， Yunnan， China）
Abstract： Total flavonoids of wild Aconitum vilmorinianum in Gejiu city， Yunnan province were extracted with petroleum
ether derosination and ethanol circumfluence． The content of total flavonoids in Aconitum vilmorinianum were detected with
ultraviolet spectrophotometry using rutin as reference． The effects of ethanol concentrations and circumfluence times on the ex-
traction of total flavonoids were studied． The anti-oxidation of total flavonoids was investigated by spontaneous oxidation of
pyrogallol． Results showed that， the content of total flavonoids in Aconitum vilmorinianum was about 1．457％ when it was ex-
tracted by 70％ ethanol circumfluence for 3 hours． The total flavonoids in Aconitum vilmorinianum had obviously eliminating
action to superoxide anion free radicals， with a clearance of 34．49％．
Key words： Aconitum vilmorinianum； total flavonoids； ethanol circumfluence extraction； ultraviolet spectrophotometry； oxida-
tion resistance
第 53卷第 17期
2014年 9月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 53 No.17
Sep．，2014
第 17 期
干净，在 105 ℃烘干，然后研细备用。
1．2 仪器与试剂
UV－4802S 型紫外－可见分光光度计（上海尤尼
柯仪器有限公司）；BS224S 型电子天平（北京赛多利
斯仪器系统有限公司）；OSB－2100 型旋转蒸发仪
（上海爱朗仪器有限公司）；TDL80－2B 型台式离心
机（上海安亭科学仪器厂）；SHZ－Ⅲ型循环水真空泵
（郑州长城科工贸有限公司）；恒温烘箱；恒温水浴
锅；索氏提取器；粉粹机。
芦丁对照品、无水乙醇、石油醚（60～90 ℃）、亚
硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、邻苯三酚、Tris 等试剂均
为分析纯；盐酸为优级纯；试验用水为去离子水。
1．3 大草乌总黄酮的提取
1．3．1 不同体积分数乙醇对大草乌总黄酮提取的
影响 分别准确称取 4．000 0 g干燥的大草乌粉末 6
份，用滤纸包好后置于索氏提取器中，用 100 mL 石
油醚在 80 ℃条件下回流 5 h， 取除脂后的大草乌在
60 ℃下烘干，分别用 100 mL 40％、50％、60％、70％、
80％、90％乙醇溶液在 85 ℃条件下回流 2 次，每次3
h， 合并滤液后抽滤，55 ℃减压蒸馏至无醇味，4 800
r ／ min 离心 15 min，将上清液转移至 100 mL 容量瓶
中，分别用相应体积分数的乙醇定容，得到大草乌
总黄酮提取液［4－9］。
1．3．2 不同回流时间对大草乌总黄酮提取的影响
分别准确称取 4．000 0 g 干燥的大草乌粉末 5 份，用
滤纸包好后置于索氏提取器中， 用 100 mL 石油醚
在 80 ℃条件下回流 5 h，取除脂后的大草乌在 60 ℃
下烘干， 用 100 mL 70％乙醇溶液在 85 ℃条件下回
流 2 次，回流时间分别为 1、2、3、4、5 h，合并滤液后
抽滤，55 ℃减压蒸馏至无醇味， 在 4 800 r ／ min 离心
15 min，将上清液转移至 100 mL 容量瓶中，用 70％
乙醇定容，得到大草乌总黄酮提取液。
1．4 分析方法
1．4．1 波长的选择 将标准溶液和样品溶液以乙
醇为空白对照，在波长 200～800 nm 进行扫描，结果
显示标准溶液和样品溶液在波长 510 nm 处有最大
吸收，故选定 510 nm为测定波长。
1．4．2 标准曲线的绘制 精确称取芦丁对照品
5 mg，用 60％乙醇溶解，并转移至 50 mL 容量瓶中，
加 60％乙醇至刻度， 摇匀， 得到浓度为 0．100 0 mg ／
mL 的标准溶液。 精确吸取芦丁标准溶液 0、1．00、
2．00、3．00、4．00、5．00 mL， 分别置于 10 mL 比色管
（此处试验所用仪器为比色管， 用分光光度计测定
时用比色皿）中，各加 60％乙醇至 5 mL，再分别加入
5％（质量分数，下同）的 NaNO2溶液 0．50 mL，摇匀，
室温放置 6 min，加 10％的 Al（NO3）3 溶液 0．50 mL
摇匀，室温放置 6 min，加 4％的 NaOH 溶液 4．00 mL
摇匀，室温放置 15 min，用紫外－可见分光光度计在
510 nm 波长下测定吸光度， 同时以试剂空白作参
比。以吸光度 A为纵坐标，芦丁浓度 C为横坐标，绘
制标准曲线。
1．4．3 总黄酮含量的测定 准确吸取总黄酮提取
液 1．00 mL，置于 10 mL 比色管（此处试验所用仪器
为比色管，用分光光度计测定时用比色皿）中，补
加相应体积分数的乙醇至 5 mL， 其他步骤按
“1．4．2” 的方法操作， 在 510 nm 波长下平行测定 3
次。 根据回归方程，计算总黄酮浓度。 根据公式：总
黄酮含量＝［提取液浓度（mg ／ mL）×稀释倍数×体积
（mL）/样品干重（g）×1 000］×100％，计算大草乌总黄
酮含量。
1．5 清除超氧阴离子自由基能力的测定
取 4．5 mL 50 mmol ／ L 的 Tris－HCl 缓冲溶液，加
4．2 mL去离子水混匀后在 25 ℃水浴中保温 20 min，
取出后立即加入在 25 ℃预热过的 3 mmol ／ L 邻苯三
酚 0．3 mL， 迅速摇匀后倒入比色皿，420 nm 波长下
每隔 30 s 测定吸光度，以 10 mmol ／ L 的 HCl 代替邻
苯三酚作为空白对照。
按照上述操作步骤在加入邻苯三酚前先加入
0．1 mL 的总黄酮提取液， 同样用 10 mmol ／ L 的 HCl
作空白对照，测定吸光度，并按以下公式计算清除
率：
超氧阴离子自由基清除率＝（A1－A2）/A1×100％
式中，A1为邻苯三酚自氧化平均吸光度；A2 为
加入样品后邻苯三酚自氧化平均吸光度。
2 结果与分析
2．1 标准曲线的绘制
以吸光度 A 为纵坐标， 芦丁浓度 C 为横坐标，
绘制标准曲线，所得标准曲线如图 1 所示。 所得回
归方程为 A＝7．714 3C＋0．004 3，R2＝0．997 4。
图 1 标准曲线
0.45
0.40
0.35
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0.00
吸
光
度
0.01 0.02 0.03 0.04 0.05
芦丁含量//mg/mL
A=7.714 3C+0.004 3
R2=0.997 4
李 泉等：野生大草乌中总黄酮的提取与抗氧化性分析 4143
湖 北 农 业 科 学 2014 年
表 1 不同体积分数乙醇对大草乌总黄酮提取的影响
乙醇体积分数//%
40
50
60
70
80
90
吸光度
0.146 4
0.159 7
0.378 5
0.453 6
0.441 2
0.438 1
总黄酮含量//%
0.461
0.504
1.213
1.456
1.416
1.406
表 2 不同回流时间对大草乌总黄酮提取的影响
回流时间//h
1
2
3
4
5
吸光度
0．341 2
0．396 9
0．453 9
0．438 9
0．438 8
总黄酮含量//％
1．091
1．272
1．457
1．408
1．408
2．2 不同体积分数乙醇对大草乌总黄酮提取的影
响
由表 1 可知，不同体积分数的乙醇提取得到的
大草乌总黄酮的含量不同，乙醇体积分数从 40％升
高到 70％时，随着乙醇体积分数的增大，大草乌总
黄酮的含量也逐渐增大；乙醇体积分数从 70％升高
到 90％时，随着乙醇体积分数的增大，大草乌总黄
酮的含量稍有减小，70％乙醇提取的大草乌总黄酮
含量最高，达 1．456％。说明，大草乌中的总黄酮一部
分为脂溶性，部分为水溶性（大草乌水提取液能与
氯化铁反应显示出较深的颜色）。
2．3 不同回流时间对大草乌总黄酮提取的影响
由表 2 可知，不同回流时间对大草乌总黄酮提
取的影响不同。 回流 1～3 h 时， 随着回流时间的增
长，大草乌总黄酮的含量逐渐增大；回流时间 3～5 h，
随着回流时间延长， 大草乌总黄酮的含量有所减
小，3 h时大草乌总黄酮含量最高，达 1．457％。 可能
是回流时间过长会提取出其他成分与黄酮相互作
用，使提取的总黄酮含量降低。
以上分析结果可知，用 70％乙醇回流提取 3 h，
大草乌总黄酮含量最高。 在此条件下，通过 3 次平
行试验测定得到大草乌总黄酮含量为 1．457％。
2．4 大草乌黄酮对超氧阴离子自由基的清除作用
通过测定，大草乌总黄酮对超氧阴离子自由基
有明显的清除作用，清除率达到 34．49％。 说明大草
乌总黄酮具有一定的抗氧化作用。 由此可见，大草
乌具有较高的药用价值。
3 小结与讨论
采用不同体积分数乙醇对大草乌总黄酮进行
提取，大草乌中的总黄酮一部分为脂溶性，部分为
水溶性，这与罗晶 ［10］对红景天分析的结果一致。 本
试验结果中测定的大草乌总黄酮含量为 1．457％，与
毕和平等［11］分析的穿心莲结果比较，大草乌中总黄
酮含量比穿心莲的高，与刘伟玲 ［12］分析的刺五加叶
中总黄酮的结果比较，大草乌中总黄酮含量则比刺
五加叶中的低。 说明不同药用植物中总黄酮含量不
同。
本试验结果表明，以石油醚脱脂、乙醇回流可
提取野生大草乌中总黄酮，提取的最佳条件为乙醇
体积分数 70％，回流提取时间 3 h，此条件下提取的
野生大草乌中总黄酮含量最高，达到 1．457％。 大草
乌总黄酮对超氧阴离子自由基有明显的清除作用，
清除率为 34．49％，说明大草乌总黄酮具有一定的抗
氧化作用，且具有较高的药用价值。
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（责任编辑 赵 娟）
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