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[收稿日期] 2007-03-22
[ 基金项目] 湖北省重点攻关课题(编号:2002P1105)　[ 作者简介] 陈东生 ,男 ,主任药师 , E-mail:yjk chen@yah oo.com.cn
菝葜对大肠杆菌诱导大鼠慢性盆腔炎的研究
陈东生1 ,华小黎1 ,于丽秀2 ,石榴3 　(1.华中科技大学附属协和医院药剂科 , 湖北 武汉 430022;2.华中科技大学同济医
学院 2005 级研究生;3.华中科技大学同济医学院药学院 2002 级毕业生)
[ 摘要] 　目的:研究菝葜对慢性盆腔炎大鼠模型的治疗作用。方法:采用大肠杆菌菌液注入大鼠子宫内 , 制备大鼠慢性盆腔
炎动物模型。测定血清中 IL-2 和 MDA 水平的变化并对大鼠子宫组织形态学进行观察。结果:给药组与模型组比较 , 大鼠血
清中 IL-2的水平明显降低 ,血清中 MDA 的水平也明显降低 , 组织形态学观察发现给药组大鼠慢性盆腔炎病理改变明显减
轻。结论:菝葜对大肠杆菌所致大鼠慢性盆腔炎有明显治疗作用 ,且效果较对照组好。
[ 关键词] 　菝葜;慢性盆腔炎;大肠杆菌;IL-2;MDA
[中图分类号] R711.33　　[ 文献标识码] A　　[文章编号] 1001-5213(2007)08-1023-03
The effect of Smilax china on chronic pelvic inflammation induced by coliform bacteria
CHEN Dong-sheng 1 , HUA Xiao-li1 ,YU Li-xiu2 ,SHI Liu3(1.Union H ospital T ongji Medical o f Huazhong Unive r-
sity o f Science and Techno log y , Hubei Wuhan 430022 , China;2.Graduate student o f Tongji Medical Colleg e;3.Graduate student
of Tong ji Medical College , Huazhong Unive rsity of Science and Technology)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To study the pha rmacological effect of Smi la x china on chronic plevic inflammator y disease(CPID)
in rats.METHODS　Colifo rm bacte ria str ains injected ra t uterus , chronic pelvic inflamma tion induced animal model.The his-
to pa tho lo gic changes of uterus were obser ved and se rum IL-2 and MDA levels dec tected.RESULTS　T reated g roup compared
with the model g r oup , the serum IL-2 levels decreased significantly and MDA levels also decrea sed , and mo rpho lo gy obse rved
in rats trea ted g roup significantly reduced chronic pelvic inf lammato ry disease patholog y condition.CONCLUSION　The treat-
ment of CPID with Smilax china.L might be better than the contral g roup.
KEY WORDS:Smila x China.L;chronic plev ic inflamma to ry disease;co lifo rm bacteria;IL-2;MDA
　　菝葜为百合科菝葜属植物(Slmla x China L .)
的根茎 ,具有祛风利湿 、活血化淤 、消炎止痛及抗肿
瘤等的功效[ 1] 。菝葜水提取液在临床用于治疗妇科
慢性盆腔炎已取得了明显的疗效 ,为探讨慢性盆腔
炎病理与其血液中 IL-2 细胞因子及氧化程度的关
系 ,本实验选用引起盆腔炎的常见病原体大肠杆菌
制作慢性盆腔炎的动物模型 ,检测慢性盆腔炎病理
及血清中 IL-2细胞因子和 MDA 含量 ,旨在进一步
研究菝葜提取液在治疗妇科慢性盆腔炎的作用机
制 ,现报道如下 。
1　材料与方法
1.1　材料　菝葜药材(批号 061011),菝葜水提取
液(本制剂室相当于生药量7.3 g·mL -1);妇科千金
片(批号 200506057);MDA 试剂盒(南京建成生物
工程研究所), IL-2 试剂盒(晶美生物工程有限公
司);大肠杆菌(菌号 44102 ,华中科技大学附属协和
医院药剂科室);♀性 SD大鼠 50只 , [(190±10)g ,
华中科技大学同济医学院实验动物中心 ,动物合格
证号:SCXK(鄂)2004-0007] ;酶联免疫检测仪
(Sunrise),紫外可见分光光度仪(SHIMADZU ,型
·1023·中国医院药学杂志 2007年第 27卷第 8期 Chin H osp Pharm J , 2007 Aug , Vol 27 , No.08
号:UV-2450)。
1.2　菌液制备　用肉汤培养基解冻干细菌 ,并移入
5 mL 肉汤培养基中 ,置 37 ℃ 24 h 使细菌复活增
殖 ,之后接种在营养琼脂上置 37 ℃ 24 h 。将细菌
溶于无菌生理盐水中 , 用比浊法配制为 6 ×106·
mL -1的菌液 ,配制即用 。
1.3　模型制作[ 2] 　10%水合氯醛按4.0 mL·kg-1
腹腔麻醉 。麻醉后 ,将动物固定于操作台上 ,在无菌
条件下 ,于大鼠下腹部正中切口 ,长约0.8 ～ 1 cm 开
腹后暴露子宫 ,取0.1 mL 大肠杆菌悬液 ,在注入菌
液之前用注射器机械损伤子宫内膜组织 ,然后注入
0.1 mL 菌液 ,缝合切口 ,恢复饮食饮水 ,分笼饲养 。
1.4　分组与给药　将 50 只 SD 大鼠随机分为 5
组:正常组 、模型组 、菝葜高剂量组 、低剂量组和妇科
千金片组。于造模 10 d后除正常组 、模型组正常饮
食饮水外 ,其他组开始用药治疗 ,药物与食料混合成
药 ,分别按照菝葜高剂量组 100 g·kg-1 、低剂量组
50 g·kg -1 、妇科千金片组1.728 g·kg- 1口服给药 ,
连续 20 d ,qd。
1.5　检测因子
1.5.1　大鼠大体形态观察　给药 20 d 后 ,禁药禁
食照常饮水 24 h ,大鼠腹腔注射 10%的水合氯醛(4
mL·kg-1),麻醉后剖腹 ,肉眼观察大鼠子宫的大体
形态变化 。
1.5.2　大鼠免疫功能测定[ 3] 　腹主动脉取血 ,用
EDTA 抗凝 ,离心 ,取上清液放入-20 ℃保存 ,用双
抗体夹心法测定大鼠血清中的免疫因子 I L-2 。
1.5.3　血液中 MDA 含量的测定　腹主动脉取血 ,
用肝素抗凝 ,离心 ,取上清液放入-20 ℃保存 ,测定
血液中 MDA的含量。步骤按试剂盒内说明书操作。
1.5.4　子宫组织形态学观察　大鼠取血后 ,取左右
侧子宫 ,先肉眼观察子宫炎症反应及周围黏连情况 ,
然后将子宫置 10%甲醛溶液中固定 ,切片 , HE 染
色 ,光镜下观察组织形态学变化。
1.6　统计学方法　应用 SPSS 10.0统计软件进行
方差分析 ,数据以 x ±s表示 。
2　结果
2.1　大鼠子宫的形态观察　正常组大鼠子宫大小
形态正常 ,与周围组织无黏连;模型组可见盆腔严重
充血 ,子宫水肿粗大 ,说明造模成功 。
2.2　菝葜水提液对血液中 IL-2及 MDA的影响
2.2.1　对免疫因子 IL-2 的影响　模型组 IL-2 的
含量明显高于正常组 、菝葜组和妇科千金片组 ,差异
具显著性(P <0.01);而正常组 、治疗组 、妇科千金
片组比较差异无显著性(P>0.05),结果见表 1。
2.2.2　对血清中 MDA 的影响　模型组 MDA 的
含量明显高于正常组 、菝葜组和妇科千金片组 ,差异
具极显著性(P <0.01),而正常组 、治疗组 、妇科千
金片组比较差异无显著性(P>0.05),结果见表 1。
表 1　菝葜对大鼠血液中 IL-2与 MDA 的影响( x±s)
Tab 1　The effect o f S milax china on IL-2 , MDA in blo od
serum of rats with chronic pelvic inflamma tory disease( x±s)
组别 n 剂量/ g·kg -1
IL-2质量浓度
/ ng·L-1
M DA 的含量
/ ng·m ol -1
正常组 10 -- 19.1±1.3 7.17±0.11b
模型组 9 -- 24.4±1.2 8.13±0.29
菝葜组(高剂量) 10 100.0 18.56±0.28 7.0±0.5ab
菝葜组(低剂量) 10 50.0 18.7±0.7 7.5±0.5ab
妇科千金片 10 1.73 17.7±1.6 7.3±0.4ab
注:与正常组比较 , aP>0.05;与模型组比较 , bP<0.01
2.3　菝葜水提液对大鼠慢性盆腔炎组织形态学的
影响　正常组(图 1):肉眼观察子宫无明显异常。
光镜下子宫黏膜上皮细胞呈低柱状 ,宫壁各层结构
清晰 ,无增生或萎缩现象 ,偶见上皮细胞脱落;子宫
腺体结构正常 。模型组(图 2):肉眼观子宫肿胀 ,与
周围组织有部分黏连 ,镜下观察子宫黏连闭塞 ,多数
上皮细胞破坏甚至坏死 ,失去原有的正常形态 ,黏膜
层 、肌层有大量的纤维组织增生及炎性细胞浸润 ,宫
壁黏膜层与肌层结构模糊 ,宫壁各层组织水肿严重;
腺体界限模糊 ,内部有大量分泌物 。菝葜高剂量组
(图 1):肉眼观子宫如常 ,镜下黏膜上皮细胞呈低柱
状排列整齐 ,宫壁各层结构清晰 ,局部上皮细胞变性
坏死脱落 ,内膜浅层组织水肿情况显著降低 ,黏膜层
中有成纤维细胞增生;腺体界限清晰 ,子宫病变基本
恢复正常 。菝葜低剂量组(图 1):肉眼观子宫如常 ,
镜下宫壁各层结构较清晰 ,部分上皮细胞变性坏死;
内膜组织轻微水肿 ,成纤维细胞增生较明显;腺体界
限较清楚;病变在很大程度上有所改善 。妇科千金
片组(图 1):肉眼观子宫如常 ,镜下宫壁各层结构较
清晰 ,内膜组织水肿情况明显减轻 ,大部分腺体恢复
正常;病变有所好转 。根据每例子宫与周围组织的
黏连 、子宫壁充血 、宫腔狭窄及镜下病理学改变的情
况 ,由轻到重评分为 0 ,1 , 2 ,3分 ,累计每组动物炎症
评分 ,分值越高表示慢性炎症程度越重[ 4] 。模型组
的炎症分数明显高于正常组 、菝葜治疗组和妇科千
金片组 ,差异有极显著性(P<0.01),说明菝葜及妇
科千金片药物均具有良好的治疗效果 ,菝葜治疗组
和妇科千金片组与正常组比较 ,差异无显著性(P>
0.05)。结果见表 2。
3　讨论
本实验采用致病性大肠杆菌注入子宫腔内 ,制
作细菌性盆腔炎模型来研究菝葜水液对盆腔炎的治
疗作用机制。该模型造模方法 、感染方式 、传播途
·1024· 中国医院药学杂志 2007年第 27卷第 8期 Chin H osp Pharm J , 2007 Aug , Vol 27 , No.08
　　　　表 2　大鼠炎症情况评分( x ±s)
Tab 2　The score o f inflammation( x±s)
组别 n 炎症评分
正常组 10 0.4±0.7a
模型组 9 2.8±0.4
菝葜(高剂量组) 10 0.6±0.7ab
菝葜(低剂量组) 10 0.7±0.5ab
妇科千金片 10 0.7±0.7ab
注:与正常组比较 , bP>0.05 ;与模型组比较, aP<0.01
图 1　形态学变化(×400)
A.正常组;B.模型组;C.高剂量组;D.低剂量组;E.千金片组
Fig 1　Histoptologic changs(×400)
A.normal;B.model;C .high dose;D.low dose;E.Fuk e Qianjin group
径 、病变特点与人类慢性盆腔炎极为相似 ,所以本实
验采用该造模方式。
慢性盆腔炎发病除与病原体感染有关外 ,还与
机体免疫功能紊乱有关。调节机体的免疫状态对病
原微生物引起的炎症过程有着重大影响 ,在感染过
程中 ,细胞免疫起着重要作用 。为此本实验选择了
细胞免疫的指标进行观察 。结果表明 ,菝葜水提取
液对慢性盆腔炎的免疫功能紊乱具有良好的调节作
用。本实验采用具有免疫调节活性的 IL-2 免疫因
子作为检测指标 ,发现 IL-2在模型大鼠血液中的含
量显著增高 。与文献[ 5-6] 的研究结果一致 ,但与资
料[ 7]显示的在慢性盆腔炎模型中 IL-2的水平显著
降低相反 。可能是由于造模的时间及给药的时间不
一致 ,而导致血液中 I L-2水平变化趋势不一致 。提
示 IL-2可能是盆腔炎慢性反应阶段的一个重要介
质 ,在一定程度上反映了 I L-2与慢性盆腔炎的病变
程度有关 。应注意局部免疫功能及 IL-2 等细胞因
子在慢性盆腔炎发病及治疗中的作用 ,以便更好的
利用药物 ,开展有针对性的免疫调节治疗。
过多的氧自由基可对组织及其功能造成一定的
损害 , MDA 作为氧自由基和生物膜不饱和脂肪酸
发生脂质过氧化反应的代谢产物 ,可严重破坏细胞
膜的结构 ,导致细胞肿胀 、坏死 ,其含量的变化可间
接的反映组织中氧自由基含量的变化 ,从而反映组
织受自由基损伤的程度[ 8] 。本实验大肠杆菌所致的
大鼠慢性盆腔炎模型中 ,可能由于子宫内膜慢性损
伤引起炎细胞浸润 ,吞噬细胞功能增强 ,产生了氧自
由基 ,氧自由基攻击细胞膜脂质 ,产生脂质过氧化反
应 ,生成过氧化终产物 MDA ,从而使模型动物血液
中的 MDA 水平升高。菝葜组可以显著降低血液中
MDA 的含量 ,说明菝葜治疗慢性盆腔炎的作用机
制之一可能与其对抗自由基脂质过氧化有关。
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[收稿日期] 2006-12-28
[ 基金项目] 国家“ 863” 计划创新药物和中药现代化重大专项(编号:2004AA2Z3080)　[ 作者简介] 赵存婕 ,女 , 硕士 ,电话:025-85697233 , E-
m ail:zhaocunjie2004@y ah oo.com .cn　[ 通讯作者] 尹莉芳 ,女 ,博士 ,讲师 ,电话:025-85697233 , E-mail:lif angyin@hotmai l.com
中心复合设计法优化氧化苦参碱生物黏附缓释片处方
赵存婕 ,尹莉芳 ,周建平 ,马伟　(中国药科大学药学院 ,江苏 南京 210009)
[ 摘要] 　目的:选用羟丙甲纤维素和卡波姆为生物黏附材料和骨架材料制备氧化苦参碱生物黏附缓释片。方法:采用中心复
合设计法优化处方。以体外释放综合评分值和黏附力为考察指标对羟丙甲纤维素的用量和卡波姆用量 2 个自变量进行多元
·1025·中国医院药学杂志 2007年第 27卷第 8期 Chin H osp Pharm J , 2007 Aug , Vol 27 , No.08