免费文献传递   相关文献

扁桃斑鸠菊组织培养技术初探



全 文 :桃斑鸠菊并不是传统的中草药,在应用时最好经过进
一步辩证[11]。在繁殖方面,张梅坤通过正交试验研究了
不同插穗木质化程度、不同生根促进剂种类和不同生
根促进剂浓度等因素对扁桃斑鸠菊扦插生根的影响,
取得了一定成果[3]。
目前,国内关于扁桃斑鸠菊繁殖方面的研究报道
比较少,组织培养技术相关的研究还未见报道,本试验
以带芽茎段为外植体材料对其组织培养技术不同阶段
的培养基进行了初步的优化筛选, 以得到较好的培养
基组合及培养程序。组织培养技术不仅可以对植株进
行脱毒,减少病害的发生,也为其的深入研究奠定了一
定的基础, 同时为扁桃斑鸠菊苗木规模化生产和周年
生产提供一定的参考依据。
1 外植体的选择
在生长健壮,无病虫害的优良植株上剪取带芽茎
段作为外植体,处理前应先去掉部分叶片。
2 外植体的消毒
茎段先用洗洁精的稀释溶液浸泡,再用毛笔刷轻
扁桃斑鸠菊(Vernonia.amygdalinaDel.)为菊科斑鸠
菊属植物,又称桃叶斑鸠菊、杏叶斑鸠菊、神奇叶和尖
尾凤等,树皮光滑呈灰色或褐色;茎上有短柔毛,具叶
柄;树叶呈椭圆形、披针形或椭圆形,基部楔形或圆形;
头状花序,花冠大多数为白色[1]。扁桃斑鸠菊原产于热
带非洲,它的叶子被称为南非叶,在尼日利亚等地常常
被当做蔬菜食用,为多年生乔木或灌木,适宜多种土壤
类型,一般用扦插繁殖,可用作灌木、绿篱和盆栽[2]。另
外,扁桃斑鸠菊作为药材在医药领域有巨大的潜力,具
有很大的开发价值。
扁桃斑鸠菊的叶子即南非叶,常作为药材使用,在
东南亚及中国台湾等民间应用较多,而中国内陆应用
很少[3]。目前,对扁桃斑鸠菊的研究主要集中在药理方
面,国外在抗癌、抗突变、抗菌及抗肿瘤等方面都有相
关报道[4-7],国内相关研究较少。在临床方面,有研究表
明南非叶水煎剂可用于治疗发热、疟疾、腹泻、痢疾、肝
炎、疥疮、咳嗽、头痛和胃痛等病症,具有抗氧化、保肝、
促胃酸分泌、降血脂、抗疟原虫和抗癌作用[8-10]。但是扁
扁桃斑鸠菊组织培养技术初探
沈彦会,许建新,周桂英,刘文竹
(深圳市铁汉生态环境股份有限公司,广东深圳 518040)
摘 要:以扁桃斑鸠菊的带芽茎段为外植体,初步研究了其组织培养及再生体系建立相关技术。带芽茎段经过1g/L的升汞消毒
后,分别接种到含有不同激素的启动培养基上进行诱导,并对其继代培养基和生根培养基进行筛选优化。结果表明:带芽茎段的最
佳诱导培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.05mg/L,诱导率达到 86%且诱导芽生长健壮;较好的继代培养基为 MS+6-BA
0.1mg/L+NAA0.01mg/L,继代芽叶色浓绿,继代系数平均达到5.6;较好的生根培养基为1/2MS+IBA0.1mg/L,生根率大于90%,
生根系数达到8。
关键词:扁桃斑鸠菊,带芽茎段,组织培养
2016年第4期 现代园艺 技术应用
形的断面,然后在接穗上选择饱满的芽子,用同样的方
法把接芽切掉,然后把接芽嵌在砧木上的断面里,用塑
料带缠好。塑料带松紧要适中,且必须把接芽露在外
面。注意接芽大小和砧木上的断面大小尽量一致,使形
成层都尽量对齐,若大小不太一致要保证一边形成层
对齐。此方法操作简便快捷,成活率高,在大量育苗时
一般都用此法,但此法技术性较强,需要工人反复练
习,做到刀快手准。
3.2 T字形芽接法
T字形芽接同样是目前月季嫁接生产的常用方
法。先把砧木截干,用短刃竖刀从截面切口处向下竖直
切一刀,约1.5~2cm长,使皮层形成T字形开口。将穗
条从母株上剪下,去叶片留叶柄,选择充实饱满的接
芽,用利刀在其上方约0.5cm处横切一刀深入木质部
约3mm左右,再用刀从接芽下方约0.5cm刚及木质部
向上推削至接芽上方的切口为止。用刀挑开砧木T字
形切口的皮层,将接芽插入切口内,将接芽的横切口与
砧木的横切口对齐而不能暴露砧木形成层。然后即用
塑料带绑缚,绑缚时必须露出接芽。
4 嫁接苗的管理
接后要加强肥水管理,25d左右检查嫁接苗的成
活情况,若接穗已萌发或接穗鲜绿表明已成活,否则,
应及早补接。穗芽长至10cm以上时,用快刀在一侧将
绑扎的塑料带割断,注意不要碰伤接芽。
穗芽发育成枝条后,根据需要,适当进行整形修
剪,促使形成理想的树形。花后要及时修剪及施肥,同
时注意及时抹除砧木上发出的砧芽,防止营养流失。
初夏和盛夏应适当遮阴和多喷水,以降温补湿,同
时注意保持空气流通。
(收稿:2015-12-10)
作者简介:魏耀远(1973-),女,本科,毕业于河南农业大学,南阳人,
林业工程师,从事园艺及林业技术推广工作。
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
輫輱訛
DOI:10.14051/j.cnki.xdyy.2016.07.048
轻清洗外植体表面,然后放入广口瓶中,用纱布封口,
流水冲洗1h左右。在超净工作台上先用75%的酒精
浸泡20~30s,无菌水冲洗2遍,再用1g/L的升汞溶液
消毒8~10min,无菌水冲洗4遍后,接种于启动培养基
上。
3 培养基选择和培养条件
启动培养基为①MS+6-BA 1.5mg/L(单位下同)
+NAA 0.1; ② MS+6-BA1+NAA 0.1; ③ MS+6-BA
0.5+NAA0.05。继代培养基为④ MS+6-BA 1.0+ NAA
0.1;⑤MS+6-BA 0.5+NAA 0.05;⑥MS+6-BA 0.1+NAA
0.01。生根培养基为⑦1/2MS+IBA0.2+活性炭0.5g/L;
⑧1/2MS+IBA0.1+活性炭0.5g/L;⑨ 1/2MS+IBA0.05+
活性炭0.5g/L。以上培养基中均附加30g/L蔗糖和7g/L
琼脂,pH调为5.8~6.0。培养温度(25±2)℃,光照强度
1500~2000lx,光照时间13h/d。
4 外植体的诱导
将外植体消毒后接种到①~③培养基中,1周左右
腋芽开始生长,培养基①~③都可诱导出芽,诱导过程
中都会产生一定量的愈伤组织。培养基①中产生的愈
伤组织量最多,诱导率为54%,且诱导芽相对瘦小,叶
片浅绿,诱导芽生长慢,长势差异大;培养基②中诱导
率为69%,诱导过程产生的愈伤组织较少,诱导芽生
长比较健壮,叶片深绿,诱导芽生长较快,长势较①均
匀,但有一定的差异;培养基③中诱导率为86%,诱导
过程产生的愈伤组织最少,诱导芽生长健壮,叶片深
绿,生长速度快,长势相对均匀。综合考虑3个处理的
诱导率和芽生长情况,培养基③为较理想的启动培养
基(图1)。
周左右无根苗开始生根,3周左右生根率达到90%以
上,但培养基⑦和⑨中的生根数量相对较少,较细长;
培养基⑧中的生根数量相对多,粗壮,生根系数达到
8,因此生根培养可选择培养基⑧。
7 炼苗和移栽
当试管苗长至高6cm左右,根长4~6cm时进行炼
苗移栽。首先将生根苗拿到温室中炼苗3~5d,然后将
生根苗的瓶盖打开炼苗2天,用镊子小心将苗从培养
瓶中取出,用清水洗净黏附于组培苗根系上的培养基,
然后栽植到用高锰酸钾灭好菌的泥炭土︰河沙︰珍珠
岩=5︰3︰1(体积比)基质中。将移栽好的苗放到阴凉
处2周,注意保湿,待生长稳定后放到阳光下让其生
长,移栽成活率达90%左右(图4)。
8 总结
本试验初步优化了扁桃斑鸠菊组织培养各阶段的
细胞生长素与细胞分裂素的配比,得到了较为理想的
结果。结果表明:培养基③为较理想的启动培养基,诱
导率达到86%;较好的继代培养基为养基⑥,继代系
数平均达到5.6且生长健壮;较好的生根培养适宜的
培养基配方为⑧,生根率大于90%,生根系数达到8。
但是由于受到材料和实验条件等的影响,试验还需要
完善,可以在此基础上进一步研究蔗糖、光照和培养
基等因素的影响,进而建立更加高效的无菌繁殖体
系。
(收稿:2015-12-25)
参考文献:
[1]江燕.抗癌植物扁桃斑鸠菊化学成分的研究[D].南宁:广西大学,
2010。
[2]杨早.南非叶化学成分及药理作用研究进展[J].南京中医药大学报,
2013,29(4):397-400。
[3]张梅坤.南非叶扦插繁殖技术试验[J].防护林科技,2015,8(143):
33-35.
[4]Obaseiki-Ebor E E,Odukoya K, Telikepalli H, etal.Antimutagentic
activity of leaves of four common edible vegetable plants in Nigeria(west
Africa)[J].MutatRes,1993,302(2):109-117
[5]JisakaM,OhigashiH,TakegawaK,etal.Antitumoral and antimicrobial
activitiesofbittersesquiterpenelactonesofVernoniaamygdalina,apossible
medicinal plant used by wild chimpanzees [J].BiosciBiotechol Biochem,
1993.57(5):833-834.
[6]Izevbigie E B,Bryant J L, Walker A. A novel natural inhibitor of ex-
travellularsignalregulatedkinasesandhumanbreastcancercellgrowth[J].
ExbioMed(Maywood),2004,229(2):163-169.
[7]Opata M M,Izevbigie E B.AqueousVernomiaamygdalina extracts alter
MCF-7 cell membrane permeability and efflux [J].Int J Environ Res
PublicHealth,2006,3(2):174-179
[8]章健.辛温与苦寒药配伍规律初探[J].安徽中医学院学报,1988,7
(3):43-45.
[9]李盛青,黄兆胜,刘明平.五味与五脏归经关系探讨[J].中医研究,
2010,10(5):5-7.
基金项目:生态修复抗逆植物育种及产业化发改办高技【2013】2556

作者简介:沈彦会(1986-),女,山东聊城人,硕士,研发员,研究方
向:植物繁殖。
5 继代培养
当初代培养的腋芽长至2~4cm左右时,接种到④
-⑥增殖培养基中诱导丛生芽。接种2周左右陆续分
化出不定芽,26d开始出现黄叶,因此扁桃斑鸠菊的最
佳继代周期应控制在24d左右. 培养基④中的继代芽
丛芽分化数量少,生长慢,形成很多疏松的愈伤组织;
培养基⑤中的继代芽分化数量居中,长势相对较好,形
成的愈伤组织相对④中少,继代系数平均为3.8;培养
基⑥中继代芽分化数量多,叶色浓绿,形成少量愈伤组
织,继代系数平均达到5.6(图2);因此,扁桃斑鸠菊继
代可选择培养基⑥配方。
6 生根培养
选择健壮的组培无根苗接种到⑦~⑨培养基中,2
图1初代培养 图2继代培养 图3生根培养 图4炼苗移栽
技术应用 现代园艺 2016年第4期
輫輲訛