全 文 ：第３０卷　第１期 《新疆师范大学学报》（自然科学版） Ｖｏｌ．３０，Ｎｏ．１
２０１１年３月 Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍａｒ．２０１１
（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）
不同季节粉绿铁线莲总黄酮含量变化研究
艾木拉古丽·阿布拉，　古丽巴哈尔·阿巴拜克力
（新疆师范大学 生命科学学院，新疆 乌鲁木齐８３００５４）
　　［收稿日期］２０１０－１１－０９
　　［基金项目］新疆师范大学优秀青年教师科研启动基金资助项目ＸＪＮＵ０７２６。
　　［作者简介］古丽巴哈尔·阿巴拜克力（１９６９－），女（维吾尔族），新疆乌鲁木齐人，硕士，副教授，主要从事植物有效成分分析方面的研究。
摘 要：铁线莲属含有黄酮成分，用溶剂法萃取不同季节粉绿铁线莲叶、与枝干的总黄酮，以卢丁作标准品，用比色法进
行含量测定。结果显示，叶中黄酮含量高，其中８月份的含量最高；枝干中含量少，变化不明显。初步揭示了粉绿铁线莲总黄酮含
量随季节变化的趋势。实验采用分光光度法，以芦丁为标准样品测定不同季节不同部位中的总黄酮的含量变化，采用正交实验设
计对不同季节粉绿铁线莲不同部位中总黄酮含量进行比较。
关键词：粉绿铁线莲；总黄酮；含量变化
中图分类号：　Ｑ９４９．９　　　文献标识码：　Ａ　　　文章编号：　１００８－９６５９（２０１１）０１－００４２－０３
粉绿铁线莲为藤本植物，常为单歧聚伞花序，３花；苞片叶状，全缘或２～３裂；萼片４，黄色，或外面基部
带紫红色瘦果卵形至倒卵形，花期６至７月，果期８至１０月，生于山地灌丛，分布于我国新疆、青海、甘肃、陕
西、山西。国外在蒙古、西伯利亚及中亚地区也有分布。全草可以入药，可祛风湿，主治慢性风湿性关节炎，
关节疼痛；熬膏外敷可以治疗疮；枝叶水煎外洗，可止瘙痒症［１］。
粉绿铁线莲在新疆的分布极广，黄酮及类黄酮类在毛茛科植物中普遍存在［２－３］，为了充分开发利用这一
资源，研究一种操作方法稳定、简便的提取工艺，提高有效成分的提取率，文章以粉绿铁线莲总黄酮含量为指
标，对其不同季节不同部位总黄酮含量进行比较测定，这将为开发和利用其有效成分提供理论依据。
１　试验材料与仪器
１．１　试验材料
粉绿铁线莲枝干、叶分别于２００９年４月、６月、８月、１０月中旬采自新疆乌鲁木齐县永丰乡，在自然条件
下干燥粉碎，贮藏与广口瓶备用。
１．２　试验试剂
芦丁（中国药品生物制品检定所）；亚硝酸钠；硝酸铝；乙醇；氢氧化钠均为分析纯。
１．３　试验仪器
ＳＨＺ－Ｄ循环水式真空泵；ＨＨ－Ｓ型水浴锅；Ｓ２４分光光度计；ＲＥ－５２旋转蒸发器；回流提取装置；
ＬＡＣ１６４分析天平（精确至０．０００１ｇ）。
２　试验方法
２．１　黄酮含量鉴定及测定方法
黄酮类物质的鉴定方法［４－６］
２４
DOI:10.14100/j.cnki.1008-9659.2011.01.008
第１期 艾木拉古丽·阿布拉等　　不同季节粉绿铁线莲总黄酮含量变化研究
①盐酸—镁粉反应：在样品液中加入少量镁粉，再滴加１～２滴浓盐酸，在沸水溶液中加热３ｍｉｎ，观察
反应结果。
②三氯化铝显色反应：将样品液滴于滤纸上，并滴加５％ＦｅＣｌ３ 指示剂，观察反应结果。
③铝盐反应：在样品液中滴加１％ＡｌＣｌ３ 溶液，观察反应结果。
④在样品液中加入浓硫酸观察反应结果。
⑤醋酸镁反应：在样品液中逐滴加入１％醋酸镁溶液，观察反应结果见表１。
２．２　最大吸收波长的选择
以乙醇为溶剂，亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠为显色剂，对粉绿铁线莲及标准品芦丁于波长３４０－８００ｎｍ
范围内测定吸收曲线，扫描间隔１０ｎｍ，５１０ｎｍ处有最大吸收，故选择５１０ｎｍ为测定波长。
２．３　标准溶液的制备
精密称取１２０℃干燥恒重的芦丁对照品０．０３１５ｇ，用３０％乙醇溶解，并完全移入１００ｍＬ容量瓶中定容至
刻度线，配成０．３１５ｍｇ／ｍＬ芦丁溶液。
２．４　标准曲线的制备
图１　芦丁标准曲线
精密吸取芦丁标准溶液０．０、１．０、２．０、３．０、４．０、５．０、
６．０于７只２５ｍＬ容量瓶中，用３０％乙醇补至１２．５ｍＬ，加
入５％的亚硝酸钠０．７ｍＬ，摇匀，放置５ｍｉｎ后加入１０％的
硝酸铝０．７ｍＬ，６ｍｉｎ后加入４％氢氧化钠５ｍＬ，混匀，用
３０％乙醇稀释至刻度，１０ｍｉｎ后于波长５１０ｎｍ 处比色测
定，试剂为空白参比。以吸光度（Ａ）为纵坐标，溶液浓度
（Ｃ）为横坐标作图，得回归方程 Ａ＝９．７６３４ｘ－０．００２９，ｒ２
＝０．９９８８。如图１。
２．５　待测样品溶液的制备［７］
准确称取粉绿铁线莲枝干、叶各１ｇ，分别置于索氏提取器中，首先用乙醚脱脂，直到样品无颜色为止。
然后按参考文献７的要求按照最佳提取工艺加入一定浓度的料液比，将一定浓度乙醇作为提取剂、在一定的
温度、一定时间内进行提取，测定ＯＤ值。
２．６　稳定性实验
精密称取粉绿铁线莲枝干、叶粉末５ｇ，按样品制备的方法，放置不同时间测定其ＯＤ值，每隔２０ｍｉｎ测
定一次，见表３所示。
３　结果与分析
３．１　芦丁标准曲线的绘制
表１　显色反应结果
　　试剂
材料　　
浓硫酸 氢氧化钠 三氯化铝 盐酸＋镁粉 乙酸镁
粉绿铁线莲枝干 橙色 橙红色 黄色 浅红色 黄色
粉绿铁线莲叶 橙黄色 深黄色 黄色 浅红色 黄色
　　对所得的提取液进行了显色反应和紫外光检测，结果表明在两个不同的药用部位均含有黄酮类化合物。
表２枝干、叶不同时期总黄酮含量测定结果（ｎ＝５）
种类
不同时期（ＯＤ值）
４月 ６月 ８月１０月
粉绿铁线莲枝干 ０．２７０　 ０．２８０　 ０．３８９　 ０．３０８
粉绿铁线莲叶 ０．２７７　 ０．３３８　 ０．７７２　 ０．６４４
３４
新疆师范大学学报（自然科学版） ２０１１年
　　粉绿铁线莲枝干、叶部总黄酮含量在不同季节均不同，８月份的含量最高，６、１０月份其次，４月份时含量
最低。
表３　粉绿铁线莲枝干、叶稳定性实验结果（ｎ＝５）
时间 ０ｍｉｎ　 ２０ｍｉｎ　 ４０ｍｉｎ　 ６０ｍｉｎ　 ８０ｍｉｎ
粉绿铁线莲枝干 ０．３７７　 ０．３７５　 ０．３７２　 ０．３７３　 ０．３７６
粉绿铁线莲叶 ０．７７０　 ０．７６５　 ０．７７４　 ０．７７２　 ０．７７１
　　结果表明枝干与叶提取溶液在８０ｍｉｎ内的吸光度稳定。
４　讨论
４．１　新疆粉绿铁线莲中含有黄酮类化合物，文章采用乙醚进行脱脂，乙醇作为提取溶剂进行不同季节总黄
酮含量比较测定，从而确定了最佳采摘季节。为后期黄酮类化合物的分离纯化奠定了基础。
４．２　新疆粉绿铁线莲中以叶的黄酮含量最高。叶中总黄酮含量在４月份最低，ＯＤ值为０．２７７，说明新叶已
经能够合成黄酮化合物，６月份逐渐增高，８月份再增高，可能是由于该时期天山雪水融化，气温回升［８］，树液
开始流动，叶开始合成积累黄酮，同时昼夜温差大，有利于次生代谢物质积累，到１０月份下降，叶片中的黄酮
输出供应果实，叶中黄酮含量呈下降趋势。枝干中的总黄酮含量很低，且变化不明显。
４．３　文章采用分光光度法测定总黄酮含量，结果表明８０ｍｉｎ内样品的吸光度稳定，本法可作为测定粉绿铁
线莲总黄酮含量的方法。
参考文献：
［１］新疆植物志编辑委员会．新疆植物志［Ｍ］．乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，１９９４：１－３７．
［２］黄文武．铁线莲属植物的研究进展［Ｊ］．中草药２００２，３３（３）：２８５－２８８．
［３］张锐，张振俊，侯治军，等．甘青铁线莲花中黄酮类化合物提取工艺探讨［Ｊ］．中国野生植物资源，２００６，２５（４）：５８－６０．
［４］吴剑峰，等．天然药物化学 ［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，２００３：２４０－２４９．
［５］李荣，李俊．黄酮类化合物药理活性及其构效关系研究进展［Ｊ］．安徽医药，２００５，９（７）：４８１－４８３．
［６］华辉，郭勇．黄酮类化合物药理研究进展［Ｊ］．广东药学，１９９９，９（４）：９－１２．
［７］古丽巴哈尔·阿巴拜克力．粉绿铁线莲不同部位总黄酮含量比较测定［Ｊ］．食品科学，２００８，２９（４）：２９６－３００
［８］梁云，吕斌，钟庆．乌鲁木齐南山中山带气候特征分析［Ｊ］．新疆气象，２００２，（３）：２０－２１．
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｔｏｔａｌ　Ｆｌａｖｏｎｉｄｓ　Ｃｏｎｔｅｎｔ
ｏｆ　Ｃｌｅｍａｔｉｓ　ｇｌａｕｃａ　Ｗｉｌｄ．Ｉｎ　ｔｈｅ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　Ｓｅａｓｏｎｓ
Ａｉｍｕｌａｇｕｌｉ·ＡＢＵＬＡ，　Ｇｕｌｉｂａｈａｅｒ·ＡＢＡＢＡＩＫＥＬＩ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕｍｑｉ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ，８３００５４，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｃｌｅｍａｔｉｓ　ａｂｏｕｎｄｓ　ｗｉｔｈ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ．Ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｏｆ　Ｃｌｅｍａｔｉｓｇｌａｕｃａ Ｗｉｌｄ．ｉｎ　ｔｈｅ
ｌｅａｖｅｓ　ａｎｄ　ｂｒａｎｃｈｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｅａｓｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｂｙ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｓｏｌｕｂｌｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｃｏｎ－
ｔｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｍｅａｎｓ　ｏｆ　ＵＶ－Ｖｉｓｉｏｎ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ　ｗｉｔｈ　ｒｕｉｎ　ａｓ　ａ　ｓｔａｎｄａｒｄ．Ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ＇
ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｓ　ｈｉｇｈｅｓｔ．ｉｎ　ｔｈｅ　ｌｅａｖｅｓ，ＯＤ，ｗｈｉｃｈ　ｔｈｅ　ｐｅａｋ　ｉｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｎｄ　ｏｆ　ａｕｇｕｓｔ；ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｂｒａｎｃｈｅｓ　ａｒｅ
ｔｈｅ　ｌｅａｓｔ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｉｓ　ｌｉｔｔｌｅ．Ｎａｔｕｒａｌ　ｃｈａｎｇｅ　ｒｕｌｅ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ａｌｏｎｇ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ
ｓｅａｓｏｎｓ　ｗａｓ　ｒｏｕｇｈｌｙ　ｄｉｓｃｌｏｓｅ．
Ｋｅｙ　Ｗｏｒｄｓ：Ｃｌｅｍａｔｉｓ　ｇｌａｕｃａ　Ｗｉｌｄ．；Ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｃｈａｎｇｅ
４４