全 文 ：２０１６年８月 甘　肃　农　业　大　学　学　报 第５　１卷
第４期５８～６４ ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＧＡＮＳＵ　ＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＡＬ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ 双 月 刊
兰州百合枯萎病病原菌的分离鉴定与
致病性测定
边小荣１，师桂英１，梁巧兰２，孙鸿强１，樊生丰１，陈君良１
（１．甘肃农业大学园艺学院，甘肃 兰州　７３００７０；２．甘肃农业大学草业学院，甘肃 兰州　７３００７０）
摘要：【目的】为了明确引起兰州百合枯萎病的病原菌，对兰州百合枯萎病鳞茎及病田土壤进行研究．【方法】
采用组织分离及土壤稀释法进行病原菌分离，回接试验测定致病性，病原菌的培养性状、分生孢子的大小等形态特
征鉴定菌种．【结果】从病株鳞茎上分离得Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４ 共４种镰刀菌，分离频率依次为２５％、１５％、５％、５％，从土
壤中分离出１株镰刀菌Ｆ５．经过致病性分析，鳞片刺伤后接种，鳞片发病率达１００％，病情指数（ＤＩ）分别为８５．４２、
８０．８３、７５．８３、６４．５８、８２．０８；鳞片无刺伤接种，鳞片发病率分别为８５．７１％、４７．６２％、４２．８６％、１９．０５％、５７．１４％，病
情指数分别为（ＤＩ）分别为５３．５７、２２．６２、２１．４３、９．５２、２５．００．鉴定结果为 Ｆ１：尖孢镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ．ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、
Ｆ２：茄病镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ．ｓｏｌａｎｉ）、Ｆ３：三线镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ．ｔｒｉｃｉｎｃｔｕｍ）、Ｆ４：烟草镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ．ｔａｂａｃｉ－
ｎｕｍ）、Ｆ５：禾谷镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ．ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）．【结论】尖孢镰刀菌、茄类镰刀菌和禾谷镰刀菌的致病能力较强，
为兰州百合枯萎病的主要致病菌．
关键词：兰州百合；枯萎病；镰刀菌；致病性
中图分类号：Ｓ　６４４．１　　　　文献标志码：Ａ　　　　　文章编号：１００３－４３１５（２０１６）０４－００５８－０７
第一作者：边小荣（１９８７－），女，硕士研究生，主要从事蔬菜生理及栽培技术研究．Ｅ－ｍａｉｌ：１２８２６０８４５０＠ｑｑ．ｃｏｍ
通信作者：师桂英，女，博士，教授，硕士生导师，研究方向为蔬菜栽培与生物技术．Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｈｉｇｙ＠ｇｓａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
基金项目：甘肃省农牧厅农业科技创新项目（ＧＮＣＸ－２０１３－３６）；甘肃省高等学校基本科研业务费项目．
收稿日期：２０１５－１２－０９；修回日期：２０１６－０３－２２
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｗｉｌｔ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎ
ｆｒｏｍ　Ｌａｎｚｈｏｕ　ｌｉｌｙ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ
ＢＩＡＮ　Ｘｉａｏ－ｒｏｎｇ１，ＳＨＩ　Ｇｕｉ－ｙｉｎｇ１，ＬＩＡＮＧ　Ｑｉａｏ－ｌａｎ２，ＳＵＮ　Ｈｏｎｇ－ｑｉａｎｇ１，
ＦＡＮ　Ｓｈｅｎｇ－ｆｅｎｇ１，ＣＨＥＮ　Ｊｕｎ－ｌｉａｎｇ１
（１．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｈｏｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｇａｎｓｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ　７３００７０，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｐｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｇａｎｓｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ　７３００７０，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｓ　ｗｈｉｃｈ　ｃａｕｓｉｎｇ　ｗｉｌｔ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｏｆ　Ｌａｎｚｈｏｕ　ｌｉｌｙ　ｆｒｏｍ　ｏｆ
Ｌｉｎｔａｏ　Ｃｏｕｎｔｙ，Ｇａｎｓｕ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，ａｎｄ　ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ｂｕｌｂ　ａｎｄ　ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ　ｓｏｉｌ　ｏｆ　ｔｈｉｓ　ａｒｅａ．【Ｍｅｔｈｏｄ】Ｉｓｏｌａ－
ｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｔｉｓｓｕｅ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｏｉｌ　ｄｉｌｕｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｔｉｅｂａｃｋ　ｔｅｓｔ
ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ．【Ｒｅｓｕｌｔ】Ａ　ｔｏｔａｌ　ｏｆ　５Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｉｓｏｌａｔｅｓ　ｔｈａｔ　４ｓｐｅｃｉｅｓ（Ｆ１，Ｆ２，Ｆ３，Ｆ４）ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａ－
ｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｌａｎｚｈｏｕ　Ｌｉｌｙ　ｂｕｌｂｓ，ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ　ｗｅｒｅ　２５％，１５％，５％ａｎｄ　５％．Ｏｎｅ（Ｆ５）ｆｒｏｍ　ｓｏｉｌ　ｗｅｒｅ　ｉ－
ｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ　ａｎｄ　ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ．Ｔｈｅ　ｄｉｓ－
ｅａｓｅ　ｉｎｃｉｄｅｎｃｅｓ　ｒｅａｃｈｅｄ　１００％ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｉｎｄｅｘｅｓ　ｏｆ　ｆｉｖｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｓ　ｗｅｒｅ　８５．４２，８０．８３，７５．８３，６４．５８，
８２．０８ｂｙ　ｂｕｌｂｓ　ｗｏｕｎｄ　ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｉｎｃｉｄｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｕｌｂｓ　ｗｅｒｅ　８５．７１％，
４７．６２％，４２．８６％，１９．０５％，５７．１４％ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｉｎｄｅｘｅｓ　ｏｆ　ｆｉｖｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｓ　ｗｅｒｅ　５３．５７，２２．６２，２１．４３，
９．５２，２５．００ｂｙ　ｎｏ－ｗｏｕｎｄ　ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｓｔｒａｉｎｓ　Ｆ１，Ｆ２，
DOI:10.13432/j.cnki.jgsau.2016.04.010
第４期 边小荣等：兰州百合枯萎病病原菌的分离鉴定与致病性测定
Ｆ３，Ｆ４，Ｆ５ｗｅｒｅ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ａｓ　Ｆ．ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ，Ｆ．ｓｏｌａｎｉ，Ｆ．ｔｒｉｃｉｎｃｔｕｍ，Ｆ．ｔａｂａｃｉｎｕｍａｎｄ　Ｆ．ｇｒａ－
ｍｉｎｅａｒｕｍ．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】Ｆ．ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ，Ｆ．ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍａｎｄ　Ｆ．ｓｏｌａｎｉ　ｈａｄ　ｈｉｇｈｅｒ　ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ　ｔｈａｎ　ｏｔｈ－
ｅｒｓ，ｔｈｅｓｅ　ａｒｅ　ｍａｊｏｒ　ｐａｔｈｏｇｅｎｓ　ｏｆ　Ｌａｎｚｈｏｕ　ｌｉｌｙ　ｗｉｌｔ　ｄｉｓｅａｓｅ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｌａｎｚｈｏｕ　ｌｉｌｙ；ｗｉｌｔ；Ｆｕｓａｒｉｕｍ；ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ
　　兰州百合（Ｌｉｌｉｕｍ　ｄａｖｉｄｉｉ　ｖａｒ．ｕｎｉｃｏｌｏｒ）是百
合科百合属川百合的一个变种，狭域分布，仅适合在
兰州周边海拨１　８００～２　５００ｍ的二阴山区种植，是
极具地方特色的甘肃名优蔬菜．兰州百合属于无性
繁殖植物，多年生栽培：从母株上收获的一级小种球
长成二级种球需要２～３ａ，二级种球长成商品百合
需要３～４ａ．因此，基于其狭域分布及多年生栽培的
特点，连作障碍十分严重［１］．造成连作障碍的原因很
多，其中土传病害与土壤养分失调、植物自身的自毒
作用一并被列为三大主要成因［２］．兰州百合枯萎病是
一种由土传真菌引起的病害，在百合主产区２～４ａ百
合栽培田普遍发生给生产造成损失．
开展枯萎病病原学研究是进行病原性连作障碍
研究的基础．该方面研究在观赏百合有诸多文献报
道，梁巧兰等［３］和杨秀梅等［４］认为尖孢镰刀菌（Ｆｕ－
ｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ），茄病镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｓｏｌａｎｉ）
是引起观赏百合枯萎病的主要病原菌．Ｌｉ等［５］首次
从观赏百合品种（Ｓｏｒｂｏｎｎｅ）枯死植株分离出三线镰
孢菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ．ｔｒｉｃｉｎｃｔｕｍ）．杨秀梅等［６］对观赏百
合枯萎病病原鉴定与ＩＴＳ序列分析，并采用鳞片接
种法对３６个百合品种及５个野生种进行枯萎病接
种鉴定．
镰刀菌种类很多，其种类分布表现出很强的地
域性［７－１０］．李诚等［１１］从甘肃陇东平凉地区采集研究
兰州百合枯萎病病株进行病原学研究，认为“百合枯
萎病病原菌为尖孢镰刀菌百合专化型（Ｆｕｓａｒｉｕｍ
ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ．ｆ　ｓｐ．ｌｉｌｉ），另外还有茄腐皮镰刀菌（Ｆｕ－
ｓａｒｉｕｍ　ｓｏｌａｎｉ（Ｍａｒｔ）Ｓａｃｃ）和串珠镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉ－
ｕｍ　ｍｏ－ｎｉｌｉｆｏｒｍＳｈｅｌｄｏｎ），但对病原菌的生物学特
性、致病性等诸多基础性问题没提及”．甘肃省临洮
县东北部山二阴山区是兰州百合的宜栽地区［１２］．
２０１３年６、７月恰遇连续阴雨天气，该区域上营乡２
～４ａ生百合枯萎发病率达到３０％以上，给生产造
成很大损失．目前对甘肃省临洮县上营乡兰州百合
枯萎病未见报道．鉴于此，本试验对从临洮县上营乡
采集兰州百合枯萎病植株及土壤进行了病原物的分
离鉴定及致病性测定，以期明确其病原学特点，为开
展兰州百合病原性连作障碍研究提供技术支撑．
１　材料与方法
１．１　病株采集及病原菌的分离
试验分别于２０１５年５月２日和２０１５年６月２１
日，在甘肃省定西市临洮县上营乡包家山村和赵家
台村的兰州百合田块（Ｅ　１０３°２８′３６″，Ｎ　３５°１７′５４″，海
拔２　２５０ｍ，年平均降雨量为４６１．８ｍｍ，平均气温
３．２℃，平均无霜期８９ｄ）采集１２株病株及土样，用
于病原菌的分离．
将带病植株的根、茎、鳞茎的病健交界处病组织
剪成约０．３ｃｍ×０．５ｃｍ的小块，７５％的乙醇表面消
毒３０ｓ，无菌水冲洗４～５次，０．１％的升汞溶液消毒
３０ｓ～１ｍｉｎ，无菌水冲洗４～５次，用灭菌滤纸吸干
病组织表面水分，五点法置于ＰＤＡ（马铃薯２００ｇ、
葡萄糖２０ｇ、琼脂粉２０ｇ、蒸馏水１Ｌ）平板上．土样
处理方法是［１４］：称取土样５．０ｇ放入盛４５ｍＬ无菌
水并带有玻璃珠的三角瓶中，置摇床振荡１５ｍｉｎ使
土样均匀分散形成土壤悬液，然后按照１０倍梯度稀
释法进行稀释，吸取１００μＬ最终稀释液于ＰＤＡ培
养基中涂布均匀，２５℃恒温箱培养．长出的真菌及
时转出，根据菌落颜色和形态进行分类编号，并挑取
菌丝于新ＰＤＡ平板上纯化２～３次．纯化后于ＰＤＡ
斜面带菌落长满斜面４℃保存．
１．２　病原菌致病性测定
病原菌致病性测定采用鳞片接种法进行，试验
设计为５因子（纯化分离得到的５种镰刀菌Ｆ１、Ｆ２、
Ｆ３、Ｆ４、Ｆ５）２水平（刺伤、无刺伤）完全随机试验，共
１０个处理．每个处理２１个鳞片，分７培养皿，每个
鳞片接菌饼３块．
鳞片接种方法参考梁巧兰等［３－４］的方法进行．具
体是：将供试菌种在ＰＤＡ平板上培养后，制成直径
５ｍｍ的菌片备用．采用健康鳞片，以７５％酒精表面
消毒，无菌水冲洗，采用伤口接种和无伤接种两种方
９５
甘 肃 农 业 大 学 学 报 ２０１６年
法进行致病性测定．伤口接种法：用灭菌解剖针在鳞
片上刺孔，将带培养基的菌片贴在孔上．以刺孔但不
贴菌片的鳞片为对照．无伤接种法：直接将菌片贴在
鳞片上．以不接菌片鳞片为对照．
接种１０ｄ后记录发病症状，测量病斑直径（ｄ），
计算病斑占鳞片面积比例．据此将鳞片发病级数划
分为５级，分别是：０级，鳞片健康无病斑现象；１级，
病斑的大小为０＜ｄ≤２．１８ｍｍ，约占百合鳞片面积
＜７．５％，病斑黄色；２级，病斑的大小为２．１８＜ｄ≤
４．５２ｍｍ，约占百合鳞片面积７．５％～１５％，病斑褐
色；３级，病斑的大小为４．５２＜ｄ≤７．６７ｍｍ，占百合
鳞片面积１５％～２５％，病斑颜色深褐色；４级，病斑
的大小为ｄ＞７．６７ｍｍ：占百合鳞片面积＞２５％，病
斑且腐烂．计算病情指数，每处理随机取７个鳞片，３
次重复．
病情指数（ＤＩ）＝１００×［Σ（鳞片发病级数×对应株数）／
（鳞片发病的最高级数×总株数）］
１．３　病原菌的鉴定
将分离得到的菌株接种在ＰＤＡ平板上，２５℃
培养３ｄ后用游标卡尺（十字交叉法，取平均值）测
量菌落于ＰＤＡ平板的直径（生长速率），生长６ｄ后
观察菌落形态，在ＸＳＰ－２Ｃ显微镜下观察菌丝及分
生孢子的形态和生长情况．根据菌落直径、大型分生
孢子的形态及产生方式、小型分生孢子的有无及产
生方式、厚垣孢子的有无及产生方式等为主要形态
特征，主要依据《镰刀菌属》［１５］、《真菌鉴定手册》［１６］、
《尖孢镰刀菌生物学及其生物防治》［１７］等工具书，利
用其检索表进行鉴定．
　　Ａ：田间发病症状；Ｂ、Ｃ：地上部茎叶受害症状；Ｄ：地下鳞茎发病症状；Ｅ、Ｆ、Ｇ：植株不同发病程度．
图１　兰州百合枯萎病症状
Ｆｉｇ．１　Ｓｙｍｐｔｏｍｓ　ｏｆ　Ｌａｎｚｈｏｕ　Ｌｉｌｙ　ｗｉｌｔ
０６
第４期 边小荣等：兰州百合枯萎病病原菌的分离鉴定与致病性测定
２　结果与分析
２．１　兰州百合枯萎病的症状
枯萎病也称为根腐病、茎腐病，是一种镰刀菌引
起的病害．镰刀菌从百合肉质根或鳞茎盘基部伤口
侵入，造成肉质根和基盘变褐腐烂，并逐渐向上发
展，鳞片出现褐色凹陷病斑，变成黄褐色逐渐腐烂，
导致鳞片从基盘散开而剥落．由病鳞茎长出的植株
明显矮化，植株生长缓慢，植株不能向上运输养分，
受害叶片呈牛皮纸样，叶片发黄、萎焉自下而上逐渐
枯萎，后枯萎而死（图１）．
该病害在临洮县东北部山二阴山区４月中旬左
右开始发病，低温高湿的条件下病斑扩展迅速，５月
上旬发病数量急剧上升，５月中旬达到高峰期，５月
下旬植株大量死亡和枯萎；６～７月持续发生，６月雨
水多时发病数量急剧上升，造成根部腐烂，地上部黄
化、枯萎死亡．
２．２　病原菌的分离
从１２株枯萎病病株中分离得到４种病原菌．土
壤中只分离到了一株病原菌Ｆ５，其他病原菌未分离
成功．病株中真菌分离情况见表１．
表１　兰州百合枯萎病病原菌的分离
Ｔａｂ．１　Ｔｈｅ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｌａｎｚｈｏｕ　ｌｉｌｙ　ｗｉｌｔ
ｄｉｓｅａｓｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎ
菌种
分离
部位
组织分离
块数
长菌
块数
分离
频率／％
Ｆ１ 鳞片 ２０　 ５　 ２５．００
Ｆ２ 鳞片 ２０　 ３　 １５．００
Ｆ３ 鳞片 ２０　 １　 ５．００
Ｆ４ 鳞片 ２０　 １　 ５．００
Ｆ５ 土壤 － － －
２．３　病原菌的致病性测定
５种病原菌接种到鳞片上发病症状相似．在刺
伤接种情况下，百合鳞片发病率均为１００％，病情指
数（ＤＩ）依次为８５．４２、８０．８３、７５．８３、６４．５８、８２．０８；
无刺伤时，５种菌的发病程度不同，发病率依次为
８５．７１％、４７．６２％、４２．８６％、１９．０５％、５７．１４％．通过
病情指数计算，５种病原菌的致病性强弱依次为Ｆ１
＞Ｆ５＞Ｆ２＞Ｆ３＞Ｆ４（图２－３）．
２．４　病原菌的鉴定
根据形态学特征进行检索，５种镰刀菌分别为
Ｆ１：尖孢镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ．ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、Ｆ２：茄病镰
刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ．ｓｏｌａｎｉ）、Ｆ３：三线镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ．
　　Ａ：未刺伤；未接菌；Ｂ：未刺伤，接菌发病初期；Ｃ：未刺伤，接菌发病后期；Ｄ：刺伤，未接菌；Ｅ：刺伤，接菌发病初期；Ｆ：刺伤，接菌发
病后．
图２　兰州百合枯萎病病原菌接种后的鳞片症状
Ｆｉｇ．２　Ｓｙｍｐｔｏｍ　ｏｆ　ｂｕｌｂｓ　ａｆｔｅｒ　ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ　Ｌａｎｚｈｏｕ　Ｌｉｌｙ　ｗｉｌｔ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎ
１６
甘 肃 农 业 大 学 学 报 ２０１６年
　　Ａ：未刺伤；未接菌；Ｂ：未刺伤，接菌发病初期；Ｃ：未刺伤，接菌发病后期；Ｄ：刺伤，未接菌；Ｅ：刺伤，接菌发病初期；Ｆ：刺伤，接菌发
病后．
图３　兰州百合枯萎病５种病原菌刺伤接种和无刺伤接种后的鳞片病情指数
Ｆｉｇ．３　Ｄｉｓｅａｓｅ　ｉｎｄｅｘ　ｏｆ　ｂｕｌｂｓ　ａｆｔｅｒ　ｓｔａｂｂｉｎｇ　ａｎｄ　ｎｏ　ｓｔａｂｂｉｎｇ　ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ　５ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｏｆ　Ｌａｎｚｈｏｕ　Ｌｉｌｙ　ｗｉｌｔ
ｔｒｉｃｉｎｃｔｕｍ）、Ｆ４：烟草镰刀菌 （Ｆｕｓａｒｉｕｍ．ｔａｂａｃｉ－
ｎｕｍ）、Ｆ５：禾谷镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ．ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）．
（表１，图１）．５种镰刀菌中，尖孢镰刀菌、茄病镰刀
菌和烟草镰刀菌在１２ｈ的光暗交替下可以产生大
量的孢子．三线镰刀菌在石竹叶片的诱导下能够产
孢，但产孢量极少．禾谷镰刀菌长时间放置（约２５ｄ）
时产生了大量的孢子．
３　讨论与结论
本试验从兰州百合枯萎病病株及病田土壤中分
离得到了５种病原菌，５种镰刀菌均可导致鳞片发
病，致病性强弱依次为Ｆ１＞Ｆ５＞Ｆ２＞Ｆ３＞Ｆ４．李诚
等［１１］从兰州百合病株上分离得到尖孢镰刀菌百合
专化型（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ．ｆｓｐ．ｌｉｌｉｉ），茄腐皮
表２　５种兰州百合枯萎病致病菌的形态学特征描述
Ｔａｂ．２　Ｔｈｅ　ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ　ｆｅａｔｕｒｅｓ　ｏｆ　ｆｉｖｅ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　Ｌａｎｚｈｏｕ　Ｌｉｌｙ　ｗｉｌｔ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎ
代号 名称 形态特征
Ｆ１
尖孢镰刀菌
（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）
病原菌菌落红色（图４中 Ａ１ 为正面和 Ａ２ 为背面），边缘整齐，大型分生孢子镰
刀形（图４中Ａ３Ⅱ），稍弯曲，一般３～５隔，多数为３隔，３隔的大小为１２．６４～
３２．５８μｍ×２．１１～３．９５μｍ．小型分生孢子椭圆形（图４中的Ⅰ），０～１隔，大小
为４．６８～１１．８２μｍ×２．１５～３．７９μｍ．有厚垣孢子（图４中 Ａ４Ⅲ），生长速度为
４．７ｃｍ．
Ｆ２ 茄类镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｓｏｌａｎｉ）
病原菌菌落暗红色（图４中Ｂ１ 为正面和Ｂ２ 为背面），边缘整齐，大型分生孢子茄
子形（图４中Ｂ３Ⅱ），稍弯曲，一般３～５隔，多数为３隔，３隔的大小为１９．３４～
３３．５８μｍ×２．７５～３．８５μｍ．小型分生孢子椭圆形图（４中的Ｂ３Ⅰ），０～１隔，大
小为２．７８～１０．０２μｍ×１．７５～３．７９μｍ．有厚垣孢子（图４中Ｂ４Ⅲ），生长速度为
４．３２ｃｍ．
Ｆ３
三线镰孢菌
（Ｆｕｓａｒｉｕｍ．ｔｒｉｃｉｎｃｔｕｍ）
病原菌菌落红色（图４中Ｃ１ 为正面和Ｃ２ 为背面），边缘整齐，大型分生孢子镰刀
形（图４中Ｃ３Ⅱ），稍弯曲，一般１～２隔，多数为２隔，分生孢子的大小为１１．７５
～２０．４３μｍ×２．４０～４．１３μｍ．小型分生孢子椭圆形（４中的Ｃ３Ⅰ），０隔，大小为
４．１１～８．６０μｍ×１．１４～３．７８μｍ，生长速度为３．７２ｃｍ．
Ｆ４
烟草镰刀菌
（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｔａｂａｃｉｎｕｍ）
病原菌菌落白色（图４中Ｄ１ 为正面和Ｄ２ 为背面），边缘整齐，棉絮状，大型分生
孢子棒状（图４中Ｄ３Ⅱ），一般３～５隔，３隔的大小为１０．３７～１６．３４μｍ×３．１１
～６．２５μｍ．小型分生孢子椭圆形（４中的Ｄ３Ⅰ），０隔，大小为５．８８～８．３８μｍ×
２．０５～４．３７μｍ，有厚垣孢子（图４中Ｄ４Ⅲ），生长速度３．２３ｃｍ．
Ｆ５
禾谷镰刀菌
（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）
病原菌菌落红色（图４中Ｅ１ 为正面和Ｅ２ 为背面），边缘整齐，菌丝白色，棉絮状，
大型分生孢子镰刀形（图４中Ｅ３Ⅱ），稍弯曲，一般３～５隔，多数为３隔，３隔的
大小为２６．６９～３１．６８μｍ×２．７２～３．９５μｍ．小型分生孢子椭圆形（４中的Ｅ３
Ⅰ），０～１隔，大小为２．７８～１０．０２μｍ×１．７５～３．７９μｍ，生长速度为３．７６ｃｍ．
２６
第４期 边小荣等：兰州百合枯萎病病原菌的分离鉴定与致病性测定
　　Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ分别代表尖孢镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ．ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、茄病镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ．ｓｏｌａｎｉ）、三线镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ．ｔｒｉｃｉｎｃｔｕｍ）、烟草
镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ．ｔａｂａｃｉｎｕｍ）、禾谷镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ．ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）；１、２分别代表５种菌菌落的正面与背面，３和４分别代表４０×１０倍
镜下５种菌的显微形态；Ⅰ：大型分生孢子，Ⅱ：小型分生孢子，Ⅲ：厚垣孢子，Ｂ４、Ｄ４、Ａ４：厚垣孢子的着生方式，Ⅳ：产孢细胞．
图４　５种兰州百合枯萎病致病菌菌落形态和显微形态特征
Ｆｉｇ．４　Ｃｏｌｏｎｙ　ｓｈａｐｅ　ａｎｄ　ｍｉｃｒｏｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ　ｆｅａｔｕｒｅｓ　ｏｆ　５ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　Ｌａｎｚｈｏｕ　Ｌｉｌｙ　ｗｉｌｔ
镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｓｏｌａｎｉ（Ｍａｒｔ）Ｓａｃｃ）和串珠镰刀
菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｍｏ－ｎｉｌｉｆｏｒ　Ｓｈｅｌｄｏｎ）等 ３ 种镰刀
菌［１１］，但对分离物并未做致病性测定．冯昱人等［１８］
报道了百合枯萎病病原菌的分离鉴定及致病性测
定，认为兰州百合枯萎病是由尖孢镰刀菌（Ｆ．ｏｘｙｓ－
ｐｏｒｕｍ）等３种镰刀菌引起，但在文章表述却以观赏
百合作为研究对象，文中还有多处语焉不详，因此研
究结果不与其比较．
本研究分离鉴定获得了５种镰刀菌．其中Ｆ．
ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ在ＰＤＡ培养基上生长的菌落颜色与黎
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甘 肃 农 业 大 学 学 报 ２０１６年
永坚等［１９］、郭立佳等［２０］、陈霞［２１］所描述的菌落颜色
一致，分生孢子的大小形态与李诚等［１１］、冯昱人
等［１８］、杨秀梅等［６］、顾龙云［２２］、白丽艳等［２３］、魏志
刚［２４］、刘小娟［２５］、梁巧兰等［３］的研究一致，则Ｆ１ 可
以确定为Ｆ．ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ，而Ｆ．ｓｏｌａｎｉ的菌落颜色描
述有差异，这可能是由于地域环境的差异所导致的．
Ｆ３ 在ＰＤＡ、ＰＳＡ培养基上的菌落颜色及ＰＳＡ大、
小型分生孢子的形态、大小、隔膜数与冯昱人分离出
来的Ｆｕｓａｒｉｕｍ．ｔｒｉｃｉｎｃｔｕｍ 的描述十分接近，Ｆｕ－
ｓａｒｉｕｍ．ｓｏｌａｎｉ的分生孢子的形态特征与梁巧兰
等［３］的研究基本一致．Ｆｕｓａｒｉｕｍ．ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ 的
菌落颜色及分生孢子的特征与白丽艳等［２３］的研究
结果很接近，烟草镰刀菌仅根据《镰刀菌属》和《真菌
鉴定手册》鉴定，未能找到其他文献支持，只能为初
步确定．
兰州百合枯萎病可引起植物的根腐、茎腐、茎基
腐、叶腐等病害．本研究仅从鳞片及土壤中获得了病
原菌并进行了致病性测定，对病株根、地上茎及叶片
发病组织部位未能获得病原菌，该方面的工作尚需
深入进行．
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（责任编辑　赵晓倩）
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