全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2014，29(2)∶206 ～ 207
作者简介:卢永昌(1965—) ，男，陕西蓝田，教授，从事中藏药的质量控制工作。Email:qhlych@ 126． com
HPLC测定黄毛翠雀花中的乌头碱、新乌头碱和次乌头碱
卢永昌，薛二伟
(青海民族大学化学与生命科学学院，青海 西宁 810007)
摘要:目的 采用 HPLC法测定黄毛翠雀花中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的含量。方法 采用 Aglient Eclipse XDB － C18色
谱柱(150 mm ×4． 6 mm，5 μm) ，流动相为甲醇 － 0． 03%三乙胺(72∶28) ，流速 1． 0 mL·min － 1，柱温 25 ℃，检测波长 235 nm。
结果 乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的线性范围为 0． 14 ～ 0． 84 μg(r = 0． 9999)、0． 206 ～ 1． 236 μg(r = 0． 9998)、0． 18 ～ 1． 8 μg
(r = 0． 9999);平均回收率分别为 100． 05% (ＲSD = 0． 24%)、101． 42%(ＲSD = 0． 32%)、98． 81%(ＲSD = 0． 27%)。结论 所
用方法操作简单，准确性、重复性好，可用于黄毛翠雀花中乌头类物质的质量控制。
关键词:高效液相色谱;乌头碱;新乌头碱;次乌头碱;黄毛翠雀花
中图分类号:Ｒ917 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2014)02 － 0206 － 02
DOI:10． 13375 / j． cnki． wcjps． 2014． 02． 034
Determination of aconitine，mesaconitine and hypaconitine in Delphinium chrysotrichum by
HPLC
LU Yong － chang，XUE Er － wei
(Qinghai University for Nationalitiesof Chemistry and Life Sciences，Qinghai，Xining，810007 P． Ｒ． China)
Abstract:OBJECTIVE To establish an HPLC method for determination of aconitine，mesaconitine and hypaconitine in Delphinium
chrysotrichum Finet et Gagnep．METHODS The chromatographic column was Aglient Eclipse XDB － C18 column(150 mm ×4． 6 mm，
5 μm)，The methanol － 0． 03% triethylamine(72∶28)solution was used as the mobile phase． The flow rate was 1． 0 mL·min －1 ． The
column temperature was 25 ℃ and detection wavelength was 235 nm． ＲESULTS The linear ranges were 0． 14 － 0． 84 μg (r =
0. 9999)for aconitine，0． 206 － 1． 236 μg (r = 0． 9998) for mesaconitine and 0． 18 － 1． 8 μg (r = 0. 9999) for hypaconitine，
respectively． The average recoveries were 100． 05% (ＲSD = 0． 24%)，101． 42% (ＲSD = 0． 32%) ，98． 81% (ＲSD = 0． 27%) ，
respectively． CONCLUSION This method is simple ，accurate and reproducible． It can be used for the determination of aconitine，
esaconitine and hypaconitine in Delphinium chrysotrichum Finet et Gagnep．
Key words:HPLC;Aconitine;Mesaconitine;Hypaconitine;Delphinium chrysotrichum Finet et Gagnep
CLC number:Ｒ917 Document code:A Article ID:1006 － 0103(2014)02 － 0206 － 02
黄毛翠雀花 Delphinium chrysotrichum Finet et
Gagnep是毛茛科植物黄毛翠雀花的地上部分，生长
在海拔 4． 2 ～5． 0 km的砾石山坡上，产于西藏、青海、
四川和云南等省区［1］;具有解毒、清疫热、止痛、止泻
等功效;用于治疗腹胀、腹痛，外用治虫病等［1 － 2］。
黄毛翠雀花中含有大量乌头碱［3］，在藏药中常替代乌
头入药。乌头生物碱有大毒，在乌头的质量标准上需
严格控制其含量。现建立了 HPLC 法同时测定黄毛
翠雀花中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的含量，可为
有效控制黄毛翠雀花的质量提供依据。
1 实验部分
1． 1 仪器与试药
1200 高效液相色谱系统(美国 Agilent)。乌头
碱、新乌头碱和次乌头碱对照品(中国药品生物制
品检定所，批号分别为:MUST － 11031101、MUST －
10030701、MUSTt － 10030501) ;黄毛翠雀花(于 2011
年 7 月采自青海省互助县北山林场，经毛继祖教授
鉴定为黄毛翠雀花 Delphinium chrysotrichum Finet et
Gagnep，取地上部位，阴干，粉碎过 100 目筛，冷藏保
存) ;甲醇为色谱纯;水为自制三重蒸馏水;其余试
剂为分析纯。
1． 2 方法与结果
1． 2． 1 色谱条件 采用 Aglient Eclipse XDB － C18
色谱柱(150 mm ×4． 6 mm，5 μm) ，流动相为甲醇 －
0． 03%三乙胺(72∶28) ，流速 1． 0 mL·min －1，检测
波长 235 nm，柱温 25 ℃，进样量 10 μL。色谱图见
图 1。
1． 2． 2 溶液的制备 分别取适量乌头碱、新乌头碱
和次乌头碱 3 种对照品，精密称定，加甲醇溶解，制
成浓度分别为 1． 4、2． 06、1． 8 mg·mL －1的对照品贮
备液，置冰箱中保存。精密称取2． 0g黄毛翠雀样品
0 10 20 30 40 0 10 20 30 40
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t/min
A B
图 1 对照品(A)和样品(B)溶液的 HPLC色谱图
Figure 1 HPLC chromatograms of control solution(A)and sample
solution(B)
的粉末，加入具塞瓶中，加 4 mL 10%氨水浸润，精密
加入 50 mL 乙醚，超声提取 30 min，过滤，用 15 mL
乙醚分 3 次冲洗药渣，合并滤液，挥干，用甲醇溶解，
定容成 50 mL，即得供试品溶液。
1． 2． 3 标准曲线的绘制 精密吸取 0． 1、0． 2、0． 4、
0． 5、0． 6 mL 乌头碱对照品贮备液，0． 1、0． 2、0． 4、
0. 5、0． 6 mL新乌头碱对照品贮备液，0． 1、0． 3、0． 6、
0． 8、1． 0 mL次乌头碱对照品贮备液，置 10 mL量瓶
中，加甲醇定容，配成系列浓度的混合对照品溶液，
取 10 μL进样，记录峰面积。以峰面积对浓度绘制
标准曲线。得回归方程分别为:Y乌头碱 = 1． 0571 ×
103X － 3． 7838(r = 0． 9999)、Y新乌头碱 = 721． 06 X +
2. 9109(r = 0． 9998)、Y次乌头碱 = 858． 44 X － 16． 303
(r = 0. 9999) ，乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的线性
范围分别为 0． 14 ～ 0． 84、0． 206 ～ 1． 236、0． 18 ～ 1. 80
μg。信噪比 S /N = 3 时，乌头碱、新乌头碱和次乌头
碱的最低检测限分别为 12、30、54 ng。
1． 2． 4 精密度试验 精密吸取 10 μL乌头碱、新乌
头碱和次乌头碱的混合对照品溶液，按”1． 2． 1”项
下色谱条件，重复进样 6 次，测定乌头碱、新乌头碱
和次乌头碱的峰面积。计算得 3 者的 ＲSD 分别为
0. 65%、0． 71%、1． 38%，表明仪器精密度良好。
1． 2． 5 稳定性试验 精密吸取供试品溶液，每隔 2
h 进样 1 次，记录峰面积。根据峰面积的变化来考
察样品溶液在 24 h 内的稳定性。结果表明:乌头
碱、新乌头碱和次乌头碱在 24 h 内基本稳定，ＲSD
分别为 1. 71%、1． 24%、1． 65%。
1． 2． 6 重复性试验 精密称取黄毛翠雀样品粉末
6 份，按含量测定方法进行。计算得乌头碱、新乌头
碱和次乌头碱的含量分别为 0． 044%、0． 19%、
0. 092%，ＲSD分别为 1． 91%、1． 21%、2． 78%，表明
实验方法的重复性良好。
1． 2． 7 加样回收率试验 精密称取 9 份已知含量
的供试品各 1． 0 g，每份添加适量各对照品，按
“1. 2. 2”项方法制备并处理，且按“1． 2． 1”项下色谱
条件测定。计算得乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的
平均加样回收率分别为 100． 05%(ＲSD = 0． 24%)、
101． 42% (ＲSD = 0． 32%)、98． 81% (ＲSD =
0. 27%)。
1． 2． 8 样品的测定 精密称取 2． 0 g 黄毛翠雀样
品粉末 5 份，按“1． 2． 2”项下方法制备处理，并按
“1． 2． 1”项方法测定含量。计算得乌头碱的含量为
0. 046%(ＲSD = 0． 19%，n = 5)、新乌头碱的为
0. 20%(ＲSD = 0． 26%，n = 5)、次乌头碱的为
0. 092%(ＲSD = 0． 43%，n = 5)。
2 讨论
曾比较了经氨试液润湿后，用乙醚提取和用异
丙醇 －三氯甲烷(1∶1)混合溶液提取的效果，结果
以乙醚提取 3 种生物碱的效率高于异丙醇 －三氯甲
烷(1∶1)混合溶液的提取。考察超声提取时间时，
比较了超声处理 20、30 、40 min 的提取效果。当超
声提取 30 min后，3 种生物碱的含量已基本稳定，增
加超声时间，含量无明显增加。根据文献资料［4 － 5］，
3 种乌头碱的测定波长选择在 230 ～ 240 nm，实验中
同时设定了检测波长 230、235、240 nm。取乌头碱、
新乌头碱、次乌头碱标准品溶液，用 DAD 检测器扫
描，根据三者的紫外吸收和峰面积确定 235 nm为最
佳检测波长。试验中考察了甲醇 －水、乙腈 －醋酸
铵缓冲液、乙腈 －三乙胺水溶液、甲醇 －三乙胺水溶
液，最终确定以甲醇 － 0． 03% 三乙胺水溶液(72∶
28)为最佳流动相。2010 年版《中国药典》中关于草
乌中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的测定采用流动
相是:乙腈四氢呋喃(25∶15)为流动相 A，以 0． 1
mol·L －1醋酸铵溶液为流动相 B，进行梯度洗脱［6］。
文中采用甲醇 － 0． 03%三乙胺水溶液(72∶28)为
流动相，流动相组成简单、分析时间较短。
参考文献:
［1］ 罗达尚．中华藏本草［M］． 北京:民族出版社，1997:74．
［2］ 毛继祖．蓝琉璃［M］．上海:上海科学技术出版社，2012:138．
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［D］．甘肃:西北师范大学，2005．
［4］ 邓雅琼，刘荣华，邵峰，等． 反相高效液相色谱法测定附子中
乌头碱等 3 种成分的含量［J］． 时珍国医国药，2009，(05) :
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［5］ 粟贵，廖林川，颜有仪，等． HPLC同时测定生物样品中新乌头
碱、乌头碱、次乌头碱的含量［J］．中国药学杂志，2009，(12) :
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［6］ 中华人民共和国国家药典委员会． 中国药典［S］． 北京:中国
医药科技出版社，2010:444．
收稿日期:2013 － 02 － 26
702第 2 期 卢永昌，等。HPLC测定黄毛翠雀花中的乌头碱、新乌头碱和次乌头碱