全 文 ：第 8卷 第 11期
2006年 11月 中国现代中药 Vol.8, NO.11Nov. 2006È
10　 / S INO -TCM
* [基金项目 ] 　新疆维吾尔自治区维吾尔药重点实验室开放课题 (XJYS0207 -2005 - 03)
[通讯作者 ] 　*吴立军 , Tel:(024) 23986481, E -m a il:wulijun_ 111@ho tm ail. com。
驱虫斑鸠菊抗肿瘤活性部位的初步研究*
孙力 1 , 尚靖 2 , 李红健3 , 吴立军 1*
(1.沈阳药科大学中药学院 , 辽宁 沈阳 　110016;2.中国药科大学 , 江苏 南京　210009;
3.新疆维吾尔自治区人民医院 , 新疆 乌鲁木齐　830001)
[摘要 ] 目的:对维吾尔族民间药材驱虫斑鸠菊 Vernonia an thelm intica w illd.果实抗肿瘤活性部位进行初步研究。方
法:运用体外抗肿瘤生物活性跟踪的方法 , 采用人胃癌细胞 (BGC - 823)、 人肝癌细胞 (H epG - 2) 和黑色素瘤细胞
株 (B16、 A375) 对驱虫斑鸠菊氯仿 、 丙酮 、 乙醇 、 水提取部位进行体外抗肿瘤活性筛选 , 并利用高速逆流色谱和
Sephadex LH - 20柱层析对活性部位进行初步分离 , 通过 HPLC对不同提取部位进行分析。结果:经体外活性筛选显示
氯仿 、 丙酮 、 乙醇提取部位对肿瘤细胞增殖均具有一定的抑制作用;得到一个单体化合物 , 经结构分析为紫铆查尔酮;
同时 , 通过对 HPLC的色谱图分析显示各提取部位的色谱图具有一定的相似性。结论:本研究可能对天然植物有效部
位或有效成分的研究提供了一种新的思路。
[关键词 ] 驱虫斑鸠菊;溶剂法;高速逆流色谱;柱色谱;体外抗肿瘤
　　驱虫斑鸠菊 Vernon ia anthelm intica w illd.系菊科
斑鸠菊属植物 , 原产于印度 、巴基斯坦等地 , 目前
主要生长于中国新疆的阿克苏 、 和田等地 , 其成熟
果实具有清除异常粘液质 、 驱虫 、 消肿 、 散寒止痛
等作用 , 用于治疗湿寒性胃痛 、 肝病 、 白癜风等病
症 , 是民间维吾尔医生的常用药材 , 现在临床多应
用于治疗白癜风 [ 1] 。文献报道驱虫斑鸠菊种子中所
含成分斑鸠菊大苦素 、斑鸠菊醇对 P388白血病细胞
的增殖有抑制作用 [ 2, 3] ;驱虫斑鸠菊的提取物对乳
腺癌细胞的增殖有抑制作用 [ 4] , 但均未对驱虫斑鸠
菊药材进行系统的抗肿瘤活性跟踪筛选。为了进一
步开发利用这一维吾尔族民间药材 , 本文运用体外
抗肿瘤生物活性跟踪的方法对驱虫斑鸠菊成熟果实
的不同提取部位进行体外抗肿瘤活性初步研究 。
1　材料与仪器
GS10A3型高速逆流色谱仪 、 8823B型紫外检
测器 、 NS1007型连续输液泵 (北京新技术应用研
究所), R -201型旋转蒸发器 (上海申生科技有限
公司), CO 2培养箱 (德国 H eraeus), 人胃癌细胞
(BGC - 823)、 人肝癌细胞 (HepG - 2)、 黑色素瘤
细胞株 (B16、 A375)均冻存于新疆自治区人民医
院临床医学中心 。
柱色谱和薄层色谱用硅胶均为青岛海洋化工厂
产品 , 试剂规格为分析纯和色谱纯 。 Sephadex LH -
20为 Pharmacia产品。
驱虫斑鸠菊成熟果实采于新疆阿克苏地区扎木
台乡 , 经北京大学艾铁民教授鉴定为驱虫斑鸠菊
Vernonia anthelm intica w illd.的果实。
2　方法与结果
2.1提取与分离方法
2.1.1溶剂法　药材首先用石油醚脱脂 , 取脱脂后
挥尽石油醚的药材依次以适量氯仿 、 丙酮 、 乙醇 、
水进行提取 , 分别提取 3次 , 脱脂棉过滤 , 合并滤
液 , 用旋转蒸发器在真空状态下挥去溶剂 , 得各部
位浸膏 , 用于活性筛选。
2.1.2高速逆流色谱法分离化学组分的研究　针对
活性部位有效成分的分离纯化进行方法学研究 , 将
常规柱色谱法 、 高速逆流色谱法 、 制备液相色谱法
进行比较 , 发现常规柱色谱法 、 制备液相色谱法存
在成分吸附损失和溶剂耗费量大的不足之处 , 并且
未知成分的损失对于活性追踪研究是最不利的 , 而
高速逆流色谱法具有快速 、 直观 、 无成分丢失的特
点 , 鉴于此采用高速逆流色谱法对活性部位进行
分离。
2.1.2.1溶剂系统的选择　本实验在文献调研的基
础上选用了氯仿 -甲醇 -水 (4∶3∶2)、 1, 2 -二氯
DOI牶牨牥牣牨牫牫牨牫牤j牣issn牣牨牰牱牫牠牬牳牴牥牣牪牥牥牰牣牨牨牣牥牥牬
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乙烷 -甲醇 -水 -乙腈 (4∶0.8∶2∶0.25)、 (4∶1.1∶2∶
0.25)、 (4∶1.3∶2∶0.25)、 (4∶1.4∶2∶0.25)等溶剂系
统 [ 5] , 根据实验结果发现 1, 2 -二氯乙烷 -甲醇 -
水 -乙腈 (4∶1.1∶2∶0.25)系统对活性部位的分离
较适宜 。
2.1.2.2样品溶液的制备　取适量经适当处理的活
性部位的浸膏 , 用流动相溶解备用。
2.1.2.3高速逆流色谱法分离　以 1, 2 -二氯乙
烷 -甲醇 -水 -乙腈 (4∶1.1∶2∶0.25)为溶剂系统 ,
上相为固定相 , 下相为流动相;转速:800 r
m in
-1;流速:2mL m in-1;检测波长:254nm。经
进一步分离 , 获得 A、 B、 C 3部分 , 见图 1。
图 1　驱虫斑鸠菊活性部位的高速逆流法分离色谱图
2.1.3柱色谱法　取适量 Sephadex LH - 20 , 以
湿法装柱 , 分别以 50%、 60%的甲醇溶液为洗
脱剂对通过高速逆流色谱法所得的有一定生物
活性的 B部分进行分离 , 得黄色针状结晶状
物质 。
2.2化合物结构鉴定
紫铆查尔酮:黄色针晶 , 分子式为 C15H12O 5 ,
1
H -NMR (500MHz, CD3OD , δ):7.94 (1H , d,
J =8.9Hz, H - 6′), 7.72 (1H , d, J =15.3Hz,
H -β), 7.53 (1H , d, J =15.3H z, H -α), 7.19
(1H , d, J =2.0Hz, H - 2), 7.11 (1H , dd, J =
8.0、 2.0H z, H - 6), 6.82 (1H , d, J =8.0Hz,
H -5), 6.42 (1H , dd, J =8.9、 2.5H z, H - 5′),
6.30 (1H , d, J =2.5Hz, H - 3′)。以上数据与文
献 [ 5] 中紫铆查尔酮的氢谱数据基本一致。紫铆
查尔酮结构式见图 2。
2.3体外抗肿瘤活性筛选及物质基础的初步探讨
2.3.1体外抗肿瘤活性筛选　活性筛选所选用的肿
瘤细胞株为:人胃癌细胞 (BGC - 823)、 人肝癌细
图 2　紫铆查尔酮结构式
胞 (HepG - 2)和黑色素瘤细胞株 (B16、 A375)。
采用 MTT法[ 6 -8]进行测试 , 对部位的筛选结果见
表 1。
表 1　各提取部位对肿瘤细胞株的 IC50值
/m g L- 1
肿瘤细胞株 氯仿 丙酮 乙醇 水
A375 18. 34 14.51 43.31 -
B16 - 50.61 - -
BGC - 823 20. 18 46.28 61.44 -
H ePG - 2 39. 75 69.50 35.04 -
2.3.2物质基础的初步探讨
针对各提取部位的药效结果 , 采用 HPLC对其
进行了初步的物质基础分析 , 从图谱直观上看 , 有
如下特点:(1)随着提取溶媒极性增加 , 图中峰数
有明显的增加 , 结合药效结果 , 推测增加的组分干
扰了药效的结果;(2)图中有些峰的面积发生明显
的改变 , 峰与峰之间的比例也发生变化 , 如图中标
示的 A、 B、 C峰 , 结合药效结果 , 推测 A、 B、 C
3个峰可能是影响药效的因素之一 。结果见图 3 ～
图 7。
2.3.2.1样品配制 　取适量各部位提取物 , 加入
DMSO溶解 , 精密吸取 0.1mL置 10mL容量瓶中 ,
用 PBS液定容 , 过 0.45μm膜 , 滤液供 HPLC用 。
2.3.2.2色谱条件 　ODS 柱 (4.6mm ×250mm ,
5μm), 甲醇 - 0.5%H 3 PO 4梯度 (0 ～ 120m in ,
25∶75 ～ 75 ∶25 ), 检 测 波 长: 220nm , 流
速:9mL m in- 1
3　讨论
采用药效活性追踪的方法对维吾尔族民间药材
驱虫斑鸠菊进行了抗肿瘤活性部位的初步研究 , 结
果显示该药材氯仿部位 、 丙酮部位 、 乙醇部位对
BGC - 823、 HePG - 2、 B16和 A375肿瘤细胞在体
外均有一定抑制作用 , 且氯仿部位和丙酮部位对
A375肿瘤细胞的抑制浓度小于 20mg L -1 , 氯仿部
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图 3　氯仿部位的 HPLC色谱图
图 4　丙酮部位的 HPLC色谱图
图 5　乙醇部位的 HPLC色谱图
图 6　水部位的 HPLC色谱图
位对 BGC- 823肿瘤细胞的抑制浓度接近 20mg L -1 ,
表明驱虫斑鸠菊在抗肿瘤方面具有进一步研究价
值 。同时由该药材的活性部位分离得到的化合物紫
图 7　空白溶媒的 HPLC色谱图
铆查尔酮 , 根据文献报道具有较好的抗肿瘤活性 ,
目前相关研究正在进行中 。
考虑到提取部位所含成分复杂 , 不同溶媒的溶
解性能差异较大 , 为达到 HPLC所反映的物质基础
尽量与药效筛选的物质基础相一致的目的 , 采用相
同的方法对药效筛选和分析样品进行制备。
在驱虫斑鸠菊的化学分离和活性追踪研究中 ,
通过对不同组分的 HPLC的分析显示出组分的比例
变化与药效结果相关性较大 , 提示通过相关性分析
也将对天然植物有效部位或有效成分的研究提供新
的思路 。
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和茵陈中目前还未发现如此高含量的成分 。另外北
极蒿挥发油中的 4、 6、 8、 10、 15、 20、 41、 49号
化合物可在国产艾蒿挥发油中检出[ 3, 4] ;北极蒿中
的 2、 4、 7、 47、 49号化合物可在国产青蒿挥发油
中检出 [ 2] 。有关北极蒿的其他化学成分研究目前正
在进行 。
致谢:GC-MS分析是由沈阳药科大学宋亚利工程师协助
测定。
参考文献
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peaks we re sepa ra ted from the essentia l oil ofA.Borealis, 48 of them were iden tified byGC-MS analysis, ind ica ting
aromadendrane-4-ol is the h ighest component in the essen tia l o il, accounting for 24.73%.Conclusion:The result
provided solid and scientific proo f fo r the further exp lo itation and utiliza tion of A.Borealis.
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Stud ies on Anti- tum or Activ ity ofExtracts ofVernonia anthelm intica w illd.
Sun li
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(1.School of Traditiona lChineseMad ica , Shenyang Pharmaceutica lUniversity, Shenyang Liaon ing 110016, Ch ina;
2.China PharmaceuticalUniversity , Nanjing J iangsu 210009, China;
3.The PeoplesHospita l of the X injiang Uygur AutonomousR eg in , UrumqiX in jiang 830001, China )
[ Abstrac t] Objective:To study the method of seperation o f parts w ith anti - tumo r ac tiv ities of Vernonia an-
thelm intica w illd..M ethods:By bioactive screenedme thod, the ex tracts of ch lo ro form , ace tone, e thano l and w ater
of Vernonia anthelm intica w illd.were screened in vitro w ith human stom ach tumor cells BGC - 823, hepatoma ce lls
HepG - 2, B16murineme lanoma cell and humanm alignantmelanoma ce llA375 according to their anti- tumor ac-
tiv ity.And ex tractsw ere ana ly sed byHPLC. Results:The ex tracts of chlorofo rm , ace tone and e thano l show different
deg rees o f ac tiv ities against a varie ty of tumo r cell strains. Active parts w ere separated by high speed coun ter - cur-
ren t chroma tography and Sephadex LH - 20, one constituen tw as obta ined, named bute in. Conclusion: Itmay be a
new w ay for researching active parts and oc tive constituen ts o f p lants.
[ Keywords] Vernonia anthelm intica w illd.;Separa tion;A ntitumor ac tiv ity;in Vitro