全 文 ：北方园艺２０１４（１３）：１５３～１５４ ·中草药·
第一作者简介：张虹（１９６２－），女，教授，现主要从事生物技术等研
究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈ＿ｂｉｏｌｏｇｙ２＠１２６．ｃｏｍ．
责任作者：郭俊明（１９６２－），男，硕士，教授，现主要从事无机非金属
及生物化学等研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｕｏｊｕｎｍｉｎｇ＠ｔｓｉｎｇｈｕａ．ｏｒｇ．ｃｎ．
基金项目：国家民族事务委员会教育部共建民族药资源化学重点
实验室开放基金资助项目（ＭＺＹ１４０５）。
收稿日期：２０１４－０３－１３
云南翠雀花根中总黄酮提取方法的研究
张 　 虹１，王 景 李１，白 红 丽２，李 春 燕１，袁 　 寒１，郭 俊 明２
（１．红河学院 生命科学与技术学院，云南省高校农作物优质高效栽培与安全控制重点实验室，云南 蒙自６６１１００；
２．云南民族大学，民族药资源化学国家民委－教育部重点实验室，云南 昆明６５０５００）
　　摘　要：以云南翠雀花根为试材，采用索氏提取法、冷浸法和水提法，分别以乙醇、甲醇和蒸
馏水作为提取剂，对云南翠雀花根中的总黄酮进行提取工艺研究。结果表明：云南翠雀花根中总
黄酮提取量最高的方法为：索氏提取法，其次为冷浸法，最低为水提法；提取剂效果依次为：乙
醇＞甲醇＞蒸馏水，以乙醇浓度为７０％时的提取量最高为２．７１ｍｇ／ｇ。
关键词：云南翠雀花根；总黄酮；提取；研究
中图分类号：Ｑ　９４６　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１４）１３－０１５３－０２
　　云南翠雀花（Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ　ｙｕｎｎａｎｅｎｓｅ　Ｆｒａｎｃｈ）属毛
茛科多年生草本植物，又名飞燕草、小草乌、月下参等，
以根入药。分布于贵州、云南的昆明、嵩明、楚雄、元江
和文山等地［１］。生于海拔１　０００～２　４００ｍ的草坡或灌木
丛［２］。是云南的一种常用民间草药，其味苦、平，性温热，
有毒，能祛风除湿，解寒止痛，用于治疗胃痛、风湿关节
痛、咳嗽等病症［１，３］。而黄酮类化合物具有多种生物活
性和药理作用，不仅对心血管系统有治疗作用，且具有
抗炎、抗菌及抗病毒等作用［４－５］。现以云南翠雀花为试
材，以不同浓度乙醇、甲醇和蒸馏水为提取剂，采用索氏
提取法、冷浸法和水提法，提取云南翠雀花根中的总黄
酮，以期为云南翠雀花的药用研究提供理论依据。
１　材料与方法
１．１　试验材料
供试新鲜云南翠雀花购买于蒙自草药市场。将新
鲜云南翠雀花根洗净，晒干，粉碎，备用。供试试剂：芦
丁标准品，乙醇、甲醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等，均
为分析纯。紫外分光光度仪（ＵＶ－４８０２Ｓ型紫外－可见分
光光度计，上海尤尼柯仪器有限公司生产）。
１．２　试验方法
１．２．１　标准曲线制备　称取１２０℃干燥至恒重的无水
芦丁１０．０ｍｇ，用７０％的乙醇或甲醇定容于５０ｍＬ容
量瓶中，摇匀，得到浓度为０．２０ｍｇ／ｍＬ的标准品溶液
备用。准确量取此液０．０、１．０、２．０、３．０、４．０、５．０ｍＬ于
２５ｍＬ容量瓶中，分别加５％亚硝酸钠和１０％硝酸铝溶
液各０．３ｍＬ，放置６ｍｉｎ。加４％氢氧化钠溶液４．０ｍＬ，
分别用７０％的乙醇或甲醇稀释至刻度，混匀，放置
１５ｍｉｎ，同时以试剂空白作参比。在５１０ｎｍ波长处测定
溶液的吸光度，以吸光度Ａ为纵坐标，浓度Ｃ（ｍｇ／ｍＬ）
为横坐标，绘制标准曲线。分别得乙醇线性回归方程：
Ａ＝９．８９２９Ｃ－０．０００９，Ｒ２＝０．９９９４。甲醇线性回归方程：
Ａ＝１０．３５４Ｃ－０．００５９，Ｒ２＝０．９９９１。
１．２．２　样品提取液的制备　索氏提取法：分别称取云南
翠雀花根粉４ｇ，用滤纸包好，置于索氏提取器中，分别
用浓度为６０％、７０％、８０％、９５％的乙醇或甲醇２００ｍＬ、
８５℃条件加热回流至提取液无色，收集提取液后浓缩
用相应浓度的乙醇或甲醇溶液定容至１００ｍＬ作为样
品提取液。冷浸法：称取４份云南翠雀花根粉４ｇ分别
置于１００ｍＬ三角瓶中，分别加入６０％、７０％、８０％、９５％
乙醇１００ｍＬ，浸泡３ｈ，过滤，滤液用相应浓度的乙醇定
容至１００ｍＬ作为样品液。水提法：称取云南翠雀花根
粉４ｇ，置于２５０ｍＬ三角瓶中，加入１００ｍＬ蒸馏水，置
于８５℃恒温水浴锅中加热３ｈ，过滤，滤液用蒸馏水定
容至１００ｍＬ，作为样品液。
１．２．３　总黄酮含量的测定　准确吸取样品提取液
２．０ｍＬ，置于２５．０ｍＬ容量瓶中，按１．２．１方法操
作，在５１０ｎｍ波长下平行测定３次，同时以样品空白
作参比。根据回归方程，计算总黄酮的浓度和总黄酮
提取量。
１．２．４　稳定性试验　准确量取２．０ｍＬ　７０％乙醇的
提取液，按１．２．１方法操作，放置１ｈ，每隔１０ｍｉｎ测
定１次吸光度，确定样品的稳定性。
１．２．５　 加标回收率试验 　 取 ７０％ 乙醇提取液
２．０ｍＬ置于２５ ｍＬ 容量瓶中，加入芦丁标准品
１．０ｍｇ，余下部分按１．２．１方法操作，平行测定５次，
计算加标回收率。
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·中草药· 北方园艺２０１４（１３）：１５３～１５４
２　结果与分析
２．１　索氏提取法提取结果分析
由表１可知，以甲醇为提取剂，随甲醇浓度不同，总
黄酮提取量不同，其中甲醇浓度为８０％时总黄酮提取量
最高为２．４４ｍｇ／ｇ，其次是甲醇浓度６０％，甲醇浓度
７０％的提取量稍低于甲醇浓度６０％的提取量，二者相差
０．２１ｍｇ／ｇ，甲醇浓度为９５％时的总黄酮提取量最低，为
１．２１ｍｇ／ｇ。以乙醇为提取剂时，乙醇浓度为７０％时总
黄酮提取量最高为２．７１ｍｇ／ｇ，乙醇浓度８０％的次之，乙
醇６０％的提取量次于乙醇７０％浓度的，乙醇浓度９５％
时的总黄酮提取量最低，为１．３２ｍｇ／ｇ，乙醇浓度的总
黄酮最高提取量与甲醇浓度总黄酮最高提取量相差
０．２７ｍｇ／ｇ，与最低提取量相差０．１１ｍｇ／ｇ。
相同浓度下，除乙醇浓度６０％时总黄酮提取量低于
甲醇外，其余浓度均表现出乙醇的提取量高于甲醇，总
体结果比较，乙醇的提取效果好于甲醇。
２．２　乙醇冷浸法的提取结果分析
由表１可知，冷浸法提取云南翠雀花根中总黄酮
时，以乙醇作为提取剂，乙醇浓度７０％时，总黄酮提取量
最高１．４８ｍｇ／ｇ，乙醇６０％次之，为１．２６ｍｇ／ｇ，乙醇
８０％和９５％的总黄酮提取量与乙醇６０％和乙醇７０％时
的总黄酮提取量相比，相差较大，乙醇８０％的总黄酮提
取量为０．３１ｍｇ／ｇ，最低为９５％的乙醇浓度，提取量仅为
０．１５ｍｇ／ｇ。
２．３　恒温水提法的提取结果分析
由表１可知，水提法的总黄酮提取量为１．１０ｍｇ／ｇ，
低于乙醇和甲醇的最高总黄酮提取量。
表１ 云南翠雀花根总黄酮的提取结果
提取剂浓度／％ ６０　 ７０　 ８０　 ９５
总黄酮提取量
／ｍｇ·ｇ－１
索氏提 乙醇 １．８９　 ２．７１　 ２．５５　 １．３２ －
取法 甲醇 ２．２６　 ２．０５　 ２．４４　 １．２１ －
冷浸法 乙醇 １．２６　 １．４８　 ０．３１　 ０．１５ －
水提法 蒸馏水 － － － － １．１０
２．４　稳定性试验
稳定性试验结果表明，１ｈ内测得吸光度的ＲＳＤ＝
１．０５％，表明在１ｈ内样品稳定性好。
２．５　加标回收率试验
其平均回收率为１００．８％，相对标准偏差ＲＳＤ为
１．１４％，测定结果准确可靠，测定精密度符合要求。
３　结论与讨论
该试验采用索氏提取法、冷浸法和水提法３种提取
方法进行比较，索氏提取法的提取效果最好，冷浸法次
之，水提法最差，这与彭程程等［６］的研究结果一致。
甲醇在８０％时的云南翠雀花根中总黄酮提取量最
高，乙醇在７０％的提取量最高，甲醇和乙醇９５％时提取
量均为最低，蒸馏水的总黄酮提取量，低于乙醇和甲醇。
总体结果比较提取剂效果依次为：乙醇＞甲醇＞蒸馏
水。乙醇和甲醇为提取剂时，在高浓度９５％时提取量最
低，这可能是在提取时醇浓度过高，容易导致挥发性过
大，同时一些醇溶性杂质、色素、亲脂性强的成分溶出增
加，与多酚、黄酮类物质竞争和醇结合，从而导致提取量
下降［７－８］。
参考文献
［１］　云南省药物研究所．云南天然药物图鉴［Ｍ］．３卷．昆明：云南科技出
社，２００８．
［２］　关文灵，李世锋．云南野生翠雀属花卉资源［Ｊ］．亚热带植物科学，
２００２，３１（增刊）：６１－６４．
［３］　梁妍，郝小燕，杨小生．云南翠雀花中生物碱成分研究［Ｊ］．中成药，
２００９，３１（５）：７９５－７９６．
［４］　裴凌鹏，惠伯棣，金宗濂．黄酮类化合物的生理活性及其制备技术研
究进展［Ｊ］．食品科学，２００４，２５（２）：２０３－２０５．
［５］　刘玉芬，夏海涛，杨树平．紫外分光光度法测定剑麻花中总黄酮的含
量［Ｊ］．食品科学，２００５，２６（９）：４１８－４１９．
［６］　彭程程，王青山，赵国祥，等．黄酮类化合物的研究进展［Ｊ］．农产品加
工（学刊），２０１０（５）：３８－４３．
［７］　董捷，张红城，李洁，等．八种蜂花粉醇提物中总多酚和总黄酮含量
测定［Ｊ］．食品工业科技，２００８（１１）：８０－８２．
［８］　阮征，胡筱波，赖富饶．油菜花粉中黄酮类物质提取工艺的优化研究
［Ｊ］．食品科学，２００７，２８（７）：１３３－１３７．
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　Ｍｅｔｈｏｄ　Ｔｏｔａｌ　Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｎ　Ｒｏｏｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ　ｙｕｎｎａｎｅｎｓｅ
ＺＨＡＮＧ　Ｈｏｎｇ１，ＷＡＮＧ　Ｊｉｎｇ－ｌｉ　１，ＢＡＩ　Ｈｏｎｇ－ｌｉ　２，ＬＩ　Ｃｈｕｎ－ｙａｎ１，ＹＵＡＮ　Ｈａｎ１，ＧＵＯ　Ｊｕｎ－ｍｉｎｇ２
（１．Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｈｉｇｈｅｒ　Ｑｕａｌｉｔｙ　ａｎｄ　Ｅｆｉｃｉｅｎｔ　Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｒｏｐｓ　ａｎｄ　Ｓａｆｅｔｙ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｉｎ　Ｙｕｎｎａｎ，Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｈｏｎｇｈｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｍｅｎｇｚｉ，Ｙｕｎｎａｎ　６６１１００；２．Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｅｔｈｎｉｃ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｔａｔｅ　Ｅｔｈｎｉｃ　Ａｆａｉｒｓ
Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｙｕｎｎａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ，Ｋｕｎｍｉｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ　６５０５００）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｒｏｏｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ　ｙｕｎｎａｎｅｎｓｅ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ，ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｎ　ｒｏｏｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ
ｙｕｎｎａｎｅｎｓｅ　ｗｅｒｅ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｂｙ　Ｓｏｘｈｌｅｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｃｏｌｄ－ｍａｃｅｒａｔｉｏｎ　ｕｓｉｎｇ　ａｌｃｏｈｏｌ，ｍｅｔｈｙｌ　ａｌｃｏｈｏｌ　ａｎｄ
ｄｉｓｔｉｌｅｄ　ｗａｔｅｒ　ａｓ　ｓｏｌｖｅｎｔ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈｅｓｔ　ｂｙ　Ｓｏｘｈｌｅｔ
ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｆｏｌｏｗｅｄ　ｂｙ　ｃｏｌｄ－ｍａｃｅｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｌｏｗｅｓｔ　ｂｙ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅ
ｅｘｔｒａｏｔｉｏｎ　ｅｆｅｃｔｓ　ｏｒｄｅｒ　ｗａｓ　ａｌｃｏｈｏｌ＞ｍｅｔｈｙｌ　ａｌｃｏｈｏｌ＞ｄｉｓｔｉｌｅｄ　ｗａｔｅｒ．Ｔｈｅ　ａｌｃｏｈｏｌ　７０％ａｓ　ｅｘｔｒａｃｔａｎｔ，ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｅｆｅｃｔ
ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈｅｓｔ　２．７１ｍｇ／ｇ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ　ｙｕｎｎａｎｅｎｓｅ　ｒｏｏｔ；ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｓｔｕｄｙ
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