全 文 ：复方驱虫斑鸠菊丸微生物限度检查法验证
阿依努尔·阿不来提 吐尔孙阿衣·克力木 库尔班江·艾买提
( 新疆喀什地区维吾尔医医院，新疆 喀什 844000)
摘 要:目的:建立复方驱虫斑鸠菊丸微生物限度检查法的验证方法。方法:采用培养基稀释法。结果:该方法能有效消
除复方驱虫斑鸠丸在检验条件下对细菌，霉菌及酵母菌的抑制作用;控制菌可用常规法检查。结论:该法简单、快捷，可用
于复方驱虫斑鸠菊丸的微生物限度检查，有效控制其质量。
关键词:复方驱虫斑鸠菊丸;微生物限度检查;培养基稀释法
中图分类号:Ｒ291． 5 文献标识码:A 文章编号:1006 － 6810(2013)06 － 0043 － 02
复方驱虫斑鸠菊丸是由驱虫斑鸠菊、阿纳其根、盒果
藤根、干姜、荜茇等 5 种药味经加工制成的小蜜丸。有特
异香气，味苦，辛，熟化和清楚异常黏液质，温肤着色，用于
白癫风［1］。处方中的荜茇具有一定的抑菌作用。若用常
规法对其进行微生物限度检查，结果将不能真实反映样品
的污染情况［2，3，4］。为此，根据“中国药典”2010 年版的有
关规定，对复方驱虫斑鸠菊丸微生物限度检查方法进行验
证，以确定其是否适用于本品的微生物限度检查，从而准
确有效地检出样品中污染的微生物［5］。验证表明，采用培
养基稀释法对本品进行检查，可使污染的微生物能被顺利
检出，常规法则可用于控制菌的检查。该方法简便，快捷，
准确，可行，能有效控制复方驱虫斑鸠菊丸的质量，并可为
同类药品的微生物限度检查法提供科学的实验依据。
1 仪器与试药
1． 1 菌种:枯草芽孢杆菌［CMCC(B)63501］，金黄色葡萄
球菌［CMCC(B)26003］，大肠埃希菌［CMCC(B)44102］，
白色念珠菌［CMCC(F)98001］，黑曲霉［CMCC(F)98003］
均由中国药品生物制品鉴定所提供。
1． 2 培养基及稀释剂: 营养琼脂培养基 ( 批号061124) ，
玫瑰红纳培养基 ( 批号030218) ，营养肉汤培养基 ( 批号
060106) ，胆盐肉汤培养基( 批号0611072) ，Ph7． 0 无菌氯
化钠 －蛋白胨缓冲液( 批号0604062) 均由北京三药科技
开发公司生产，中国药品生物制品鉴定所提供。
1． 3 供试品:驱虫斑鸠菊丸( 批号071101 － 1，071101 － 2，
071101 － 3) ，喀什昆仑维吾尔药业股份有限公司。
1． 4 其他: 培养皿，吸管，试管，橡胶塞等，试验前均为
121℃灭菌 20min备用。
2 方法与结果
2． 1 菌液的制备［4］
2． 1． 1 大肠埃希菌，金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌: 取
新鲜培养物接种至营养肉汤培养基中，37℃培养 18 ～ 24h;
培养物用 0． 9%无菌氯化钠溶液制成含菌数为 50 ～ 100cfu
的菌悬液。用于控制菌验证时制成每 1mL 含菌数为小于
100cfu的菌悬液。
2． 1． 2 白色念珠菌: 取新鲜培养物接种至改良马丁培养
基中，25℃培养 18 ～ 24h;培养物用0． 9%无菌氯化钠溶液
制成含菌数为 50 ～ 100cfu的菌悬液。
2． 1． 3 黑曲霉:取经25℃培养 1 周的黑曲霉菌斜面培养
物，加 3mL盐水洗下霉菌孢子，吸取菌液，10 倍稀释为 50
～ 100cfu /mL，备用。
2． 2 供试液的制备: 称取样品10g，加含 2% 吐温 －
80pH7． 0 氯化钠 －蛋白胨缓冲液至 100mL，制成 1:10 的供
试液，备用。
2． 3 验证试验: 验证实验所用培养基均按“中国药典”
2010 年版附录“微生物限度检查法”要求，进行培养基使
用性检查，且均符合规定。
2． 3． 1 细菌、真菌及酵母菌计数( 平皿法，培养基稀释法) :
在确定适合的检查方法后，验证试验至少应进行 3 次独立
的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。
实验组:各取1:10 供试液 1，0． 5，0． 2mL 和试验菌液
1mL，分别注入平皿中，立即倾注相应琼脂培养基，每珠试
验菌平行制备 2 个平皿，按平皿法测定其菌数。
菌液组:取试验菌1mL 注入平皿中，立即倾注相应琼
脂培养基，每珠试验菌平行制备 2 个平皿，测定所加的试
验菌数。
供试品对照组:各取1:10 供试液 1，0． 5，0． 2mL 按试
验组操作，不加菌液，测定样品本底菌。
2． 3． 2 计算各试验菌珠的回收率: 试验组的加菌回收率
(%)=试验组平均菌落数 －供试品对照组平均菌落数 /菌
液组平均菌落数 × 100%
从表 1 中可以看出该供试品污染 5 珠代表菌对白色
念珠菌，黑曲霉无明显抑制作用，回收率 70%以上，但对金
黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌，大肠埃希菌有明显抑制作
用回收率 70%以下，采用培养基稀释法(0． 2mL /皿) 测定。
342013 年 6 月第 6 期 中国民族医药杂志
DOI:10.16041/j.cnki.cn15-1175.2013.06.019
表 1 复方驱虫斑鸠菊丸微生物限度检查法(平皿法)
污染菌回收率(%)
试验次数
金黄色
葡萄球菌
枯草芽孢
杆菌
大肠埃
希菌
白色念
珠菌
黑曲霉菌
1 9 10 61 100 100
2 11 10 61 100 100
3 21 8 64 95 100
从表 2 可以看出采用培养基稀释法(0． 2mL /皿) 金黄
色葡萄球菌，大肠埃希菌无明显抑制作用，回收率 70%以
上，但对枯草芽孢杆菌有明显抑制作用回收率 70%以下，
采用培养基稀释法(0． 1mL /皿) 测定。
表 2 复方驱虫斑鸠菊丸微生物限度检查培养
基稀释法(0． 2mL /皿)回收率(%)
试验次数 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 大肠埃希菌
1 95 48 94
2 95 49 96
3 96 51 96
从表 1 ～ 3 结果可以看出该样品污染 5 珠菌试验菌经
验证，细菌数可采用培养基稀释法(0． 1mL /皿) ，霉菌及酵
母菌数测定可采用平皿法。
表 3 复方驱虫斑鸠菊丸微生物限度检查培养
基稀释法(0． 1mL /皿)回收率(%)
试验次数 枯草芽孢杆菌
1 100
2 99
3 97
2． 3． 3 控制菌检查法的验证 : 本品为含有药材粉末投料
的口服制剂，控制菌应检查大肠埃希菌和大肠菌群，验证
大肠菌群检查法时，采用大肠埃希菌作为试验菌。
2． 3． 3． 1 大肠埃希菌检查法的验证:1:10 供试液 10mL
及大肠埃希菌菌液 1mL 加入 100，200mL 的 BL 增菌培养
基中，按大肠埃希菌的检查法进行检验。结果见表 4。
表 4 大肠埃希菌检查法的验证
BL MUG －Ⅰ
供试品 清 阴
实验组 浑浊 阴
阴性对照 清 阴
2． 3． 3． 2 大肠菌群检查法的验证:取1:10 供试液 1mL及
大肠埃希菌菌液 1mL 加入 10mL 的胆盐乳糖发酵培养基
中，按大肠菌群的检查法进行检验。结果见表 5。
表 5 大肠菌群检查法的验证(样品制成1:10，1:100，1:1000)
样品浓度 阴性菌 实验组
10 －1 － +
10 －2 － +
10 －3 － +
从表 4 ～ 5 结果看出该样品控制菌经验证，大肠埃希
菌，大肠菌群可采用常规法进行检查。
3 讨论
本品含有驱虫斑鸠菊、阿纳其根、盒果藤根、干姜、荜茇等
5味药，制备过程比较复杂，其中荜茇有一定的抑菌作用，验证
实验结果证明，本品对革兰阳性菌有较强的抑制作用。药典
收载的除去供试品抑菌作用的方法有培养基稀释法，薄膜过
滤法，离心沉淀法等。或几法联用。由于本品是中成药，推断
其抑菌作用不会太强，因此尝试采用培养基稀释法。
结果，各规定菌株的回收率均达到药典要求; 控制菌
则用常规法即能顺利检出试验菌。本方法简便快捷，准确
有效，能很好的控制复方驱虫斑鸠菊丸的质量。
参考文献
［1］国家药典委员会．中华人民共和国卫生部药品标准维
吾尔药分册［S］． 98: 169 － 170．
［2］古丽巴哈尔．托合提，沙拉麦提． 艾力，等． 六种维吾尔
医医院制剂微生物限度检查的方法验证［J］．中国药品
标准，2011，3: 230 － 233．
［3］苏德模，马绪荣．药品微生物学检验技术［M］．北京:华
龄出版社，2007: 209 － 234．
［4］曹雄伟．最新药品微生物检验方法与操作标准规范及
无菌隔离技术［M］． 北京: 中国中医药出版社，2009，
257 － 285．
［5］国家药典委员会．中国药典［S］． 一部． 北京:中国中
医药出版社，2010:附录 107 － 115
2013 年 5 月 23 日收稿
Compound vernonia anthelmintica pill for microbial limit test
Ayinuer·ablati Tuerxun·klim Kuerbanjia·aimaiti
( Uighur medical hospital in xinjiang ，Kashgar 844000)
［Abstract］:Objective:To establish a method for microbial limit test of Vevnonia anthelmin sica Pills． Methods:Culture medium
diluted method was used． Ｒesults:Culture medium diluted method can eliminate the pills` inhibiting effect on bacteria ，fungi ，yeast
and examine designated microbial species． Conclusion :This method is simple ，accurate and suitable for microbial limit test and
quality control of Vevnonia anthelmin sica Pills．
［Key words］:Compound vernonia anthelmintica pill;microbial limit test;culture medium diluted method．
44 中国民族医药杂志 2013 年 6 月第 6 期