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收稿日期:2013-05-20; 修订日期:2013-11-22
基金项目:国家自然科学基金( No． 81173574) ;山西省国际科技合作项目( No． 2011081068) ;山西省中医药研究院院级课题( No． 201012)
作者简介:仝立国( 1981-) ，男( 汉族) ，山西怀仁人，山西省中医药研究院主管药师，硕士学位，主要从事中药药效物质基础研究工作．
* 通讯作者简介:冯玛莉( 1963-) ，女( 汉族) ，山西太原人，山西省中医药研究院主任医师，硕士学位，主要从事中药药理毒理研究工作．
蛇床子中佛手柑内酯和异虎耳草素含量的
高效液相色谱 －二级管阵列检测法同时测定
仝立国，谢 君，冯玛莉*
(山西省中医药研究院，山西 太原 030012)
摘要:目的 建立同时测定蛇床子中佛手柑内酯和异虎耳草素含量的方法。方法 采用高效液相色谱( HPLC) 法对其含
量进行测定，色谱柱为 Sino Chrom C18 ( 250mm ×4． 6mm，5μm ，Elite) ，流动相为甲醇 － 0． 1%醋酸( 55∶ 45) ，流速 1． 0ml /
min，柱温 25℃ ;二极管阵列检测器( DAD) 检测器，检测波长 310nm。结果 佛手柑内酯在 0． 031 5 ～ 0． 945μg范围内呈良
好的线性关系 A = 2 385C － 6． 666 ( r = 0． 999 9) ，异虎耳草素在 0． 029 6 ～ 0． 888μg 范围内呈良好的线性关系 A =
1711C + 1． 203 ( r = 0． 999 9) ; 平均回收率分别为 99． 2%和 99． 1%，相对标准偏差分别为 0． 91%和 0． 67% ( n = 6) ;在常
温下 8h内稳定性较好。结论 HPLC － DAD法简便快速，准确，重现性好，结果可靠，可作为蛇床子的质量控制方法。
关键词:蛇床子; 佛手柑内酯; 异虎耳草素; 高效液相色谱 －二级管阵列检测法
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2014． 03． 008
中图分类号:Ｒ284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2014) 03-0536-04
Determination of Bergamot lactone and Isopimpinellin in Cnidium monnieri by HPLC －
DAD
TONG Li-guo，XIE Jun，FENG Ma-li*
( Shanxi Academy of TCM，Taiyuan Shanxi 030012，China)
Abstract: Objective To establish a determination method of the content of Bergamot lactone and Isopimpinellin in Cnidium
monnieri． Methods The content of them in Cnidium monnieri was determined by HPLC． The chromatographic column was Sino-
Chrom C18 ( 250mm ×4． 6mm，5μm，Elite) ． The mobile phase was a mixture of Methanol － 0． 1% Acetic acid aqueous solution
( 55: 45) ，the flow rate was 1． 0ml /min，and the column temperature was 25℃ ． The detector was DAD，and the detection wave-
length was 310nm． Ｒesults The Bergamot lactone and Isopimpinellin were of good stability in 8h． The ealibration curve of them
were A = 2385C + 6． 666( r = 0． 9999 ) and A = 1711C + 1． 203 ( r = 0． 9999 ) ，and the linear over the range of 0． 0315 μg ～
0． 945μg and 0． 0296 μg ～ 0． 888μg，the average recovery rate were 0． 91% and 0． 67% ( n = 6) ． Conclusion The method is
convenient，sensitive and accurate． It can be a method for quality control in production of Cnidium monnieri．
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时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 3 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2014 VOL． 25 NO． 3
Key words: Cnidium monnieri; Bergamot lactone; Isopimpinellin; HPLC － DAD
蛇床子为伞形科植物蛇床 Cnidium monnieri L． Cuss． 的干燥
成熟果实，具有温肾壮阳、祛风、燥湿杀虫的功效，主要成分为香
豆素和挥发油类。蛇床子中的香豆素成分主要有蛇床子素(os-
thol)、欧前胡素(imperatorin)、异虎耳草素 (isopimpinellin)、佛手
柑内酯(bergapten)、花椒毒酚(xanthotoxol)和蛇床明素(eduotin
IV)等化合物［1］。在课题组前期研究中发现［2，3］，蛇床子具有较
强的镇静 催眠作用，通过谱效关系分析发现在已知的五种成分
中，只有佛手柑内酯和异虎耳草素两成分与其镇静催眠活性相关
性显著，是其发挥镇静催眠作用的活性物质。其结构见图 1。
图 1 佛手柑内酯、异虎耳草素结构式
本文拟对同时测定蛇床子中两者含量的方法进行研究，以期
建立蛇床子中佛手柑内酯和异虎耳草素的含量测定方法，为其镇
静催眠活性质量控制提供必要的实验研究。
1 仪器与试药
Aglient1200 高效液相色谱仪，真空脱气机(G1322A)，四元泵
(G1311A)，自动进样器(G1329A)，柱温箱(G1316A)，DAD 二极
管阵列检测器(G1315D)，HP Chemstation 色谱工作站;Sartorious
十万分之一分析天平(德国赛多利斯公司);异虎耳草素对照品
(纯度≥98%，批号 120420)，佛手柑内酯对照品(纯度≥98%，批
号 110921)，均购于上海融禾医药科技有限公司;蛇床子药材(购
于山西省中医药研究院门诊草药房，经山西省药品检验所标本室
高天爱主任药师鉴定并确定);甲醇(色谱纯，批号:61202 美国迪
马公司);水为双蒸水;其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 色谱柱为 Sino Chrom C18(250mm × 4． 6mm，5μm
，Elite)，以甲醇 － 0． 1%乙酸溶液(55 ∶ 45)为流动相，流速 1．
0ml /min，柱温 25℃，检测波长 310nm。
2． 2 供试品溶液的制备 取蛇床子药材约 1g，精密称定，置具塞
锥形瓶中，精密加入乙醇 25ml，密塞，称定重量，超声处理 30
min，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤
液，即得。
2． 3 对照溶液的制备 取干燥的佛手柑内酯和异虎耳草素对照
品适量，精密称定，加甲醇分别制成每毫升含 30μg的溶液，即得。
2． 4 测定方法 分别吸取各供试品溶液 10 μl，注入高效液相色
谱仪，在以上色谱条件下，佛手柑内酯保留时间为 15． 262 min，异
虎耳草素保留时间为 13． 423min。结果见图 2。
2． 5 方法学考察
2． 5． 1 标准曲线及线性范围 精密吸取佛手柑内酯和异虎耳草
素对照品(浓度分别为 31． 5μg /ml 和 29． 6μg /ml)1，2，5，10，15，
20μl 按“2． 1”项中方法，分别注入液相色谱仪，以峰面积为纵坐
标，分别以佛手柑内酯和异虎耳草素为横坐标线性回归。结果
见表 1。
A －佛手柑内酯;B －异虎耳草素;C －蛇床子药材
图 2 各成分 HPLC色谱图
2． 5． 2 精密度实验 取佛手柑内酯和异虎耳草素对照品溶液(浓
度分别为 31． 5μg /ml和 29． 6μg /ml)，按“2． 1”中方法连续进样 6
次，测得对照品峰面积的 ＲSD 均小于 3%，表明进样与仪器的精
密度良好。
表 1 佛手柑内酯和异虎耳草素标准曲线
成分 线性方程 线性范围 相关系数
佛手柑内酯 A = 2 385C － 6． 666 0． 031 5 ～ 0． 945μg 0． 999 9
异虎耳草素 A = 1 711C + 1． 203 0． 029 6 ～ 0． 888μg 0． 999 9
2． 5． 3 稳定性试验 取供试品溶液，分别于 0，2，4，6，8 h 进样，
峰面积 ＲSD分别为 0． 22%和 0． 78%。表明样品中佛手柑内酯和
异虎耳草素在常温下 8 h内稳定的。
2． 5． 4 重复性试验 取蛇床子药材 6 份，每份约 1g，精密称定，按
“2． 2”方法制备供试品溶液，进样 10μl 测定，结果佛手柑内酯为
平均含量为 0． 611mg /g，ＲSD为 1． 34(n = 6);异虎耳草素的平均
含量为 0． 725 mg /g，ＲSD为 1． 34(n = 6)，说明本法的重复性较
好。
2． 5． 5 加样回收率试验 精密称取蛇床子药材 6 份，每份约
0． 5 g，精密称定，精密加入佛手柑内酯和异虎耳草素对照品溶液
(浓度为 0． 413mg /ml 和 0． 372mg /ml)1ml，按“2． 2”方法制备供
试品溶液，分别进样 10μl测定。结果见表 2。
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2014 VOL． 25 NO． 3 时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 3 期
表 2 佛手柑内酯和异虎耳草素加样回收率试验
样品
取样量
/g
样品含量
/mg
加入量
/mg
测定量
/mg
回收率
(%)
平均回收率
(%)
ＲSD
(%)
佛 1 0． 50974 0． 311 0． 413 0． 718 98． 8 99． 2 0． 91
手 2 0． 50322 0． 307 0． 413 0． 715 99． 5
柑 3 0． 51843 0． 317 0． 413 0． 728 101． 0
内 4 0． 50023 0． 306 0． 413 0． 723 98． 8
酯 5 0． 50472 0． 308 0． 413 0． 716 98． 8
6 051417 0． 314 0． 413 0． 722 98． 5
异 1 0． 50974 0． 370 0． 372 0． 743 100． 3 99． 1 0． 67
虎 2 0． 50322 0． 365 0． 372 0． 735 99． 5
耳 3 0． 51843 0． 376 0． 372 0． 742 98． 4
草 4 0． 50023 0． 363 0． 372 0． 730 98． 7
素 5 0． 50472 0． 366 0，372 0． 735 99． 2
6 051417 0． 373 0． 372 0． 741 98． 9
2． 5． 6 样品含量测定 取 3 批蛇床子药材(批号为 20111218、
20120720、20121119)按“2． 2”和“2． 1”中样品制备方法及色谱条
件进行测定，进样量 10μl，测定峰面积，计算含量。结果见表 3。
表 3 蛇床子药材含量测定结果
批号
佛手柑内酯
含量 /mg·g － 1 ＲSD(%)
异虎耳草素
含量 /mg·g － 1 ＲSD(%)
20111218 0． 553 1． 14 0． 681 0． 62
0． 562 0． 687
20120720 0． 632 2． 64 0． 731 0． 77
0． 656 0． 739
20121119 0． 506 1． 13 0． 594 1． 08
0． 498 0． 585
3 讨论
本实验曾考察了文献［4］中的方法(见图 3)，在该条件下佛手
柑内酯和异虎耳草素在该条件下不能满足分析要求。从紫外吸
收光谱(见图 4)可以看出，2#峰非单一成分吸收，因此采用文中
方法。
A －佛手柑内酯;B －异虎耳草素;C －蛇床子药材
(1#峰为花椒毒酚，2#峰为佛手柑内酯和异虎耳草素的混合峰，
3#峰为欧前胡素，4#峰为蛇床子素
图 3 各成分 HPLC色谱图
A －佛手柑内酯;B －异虎耳草素;C － 2#峰紫外吸收光谱
图 4 各成分紫外吸收光谱
本实验考察了乙腈 － 0． 1%乙酸溶液和甲醇 －水不同的流动
相系统，最后确定用甲醇 － 0． 1%乙酸溶液(55 ∶ 45)作为流动
相，该法简单，经济，分离度高与其他成分能达到基线分离，所建
立佛手柑内酯和异虎耳草素的高效液相色谱含量测定方法专属
性强，精密度好，回收率高，可用于蛇床子镇静催眠活性质量评
价。
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