全 文 ：［2］国家药典委员会． 中华人民共和国药典［S］． 一部． 北
京: 中国医药科技出版社，2010． 2014 年 2 月 21 日收稿
To determinate the contents of gallic
acid in uygur medicine yibensina migao by HPLC
ＲEZIWANGULI·abdurem NIJIATI·ablaiti
(Kashgar region drug inspection in Xinjiang uygur autonomous region 844000)
［Abstract］Purpose:To determinate the contents of gallic acid in yibensina migao． Method:An HPLC method
was used and Pheomenex Luna C18 was selected (250mmx4． 60mm，5μm)，a column temperature was 35℃，
methyl alcohol － 0． 2% Phosphoric acid (5:95)were mobile phase，the detecting wavelength and velocity were
273 nm and 1． 0mL /min respectively． Ｒesults:There were established a good linear relation between 21． 88 ～
218． 80 μg /mL of gallic acid，r = 0． 9997，the average recovery was 101． 00%，ＲSD was 0． 86 % ． Conclu-
sion:The methods had the advantages of simple and easy operation，sensitive and accurate and exhibited a good
separation effect． The methods were can be used to determination of contents and quality control of the fructus
phyllanthi．
［Key words］yibensina migao;HPLC method;Content determination
可见分光光度法测定蒙药细叶铁线莲中总黄酮的含量
丁 红1 周雪梅2 王 栋2
( 1．呼和浩特市药品不良反应和药物滥用监测中心，内蒙古 呼和浩特 010010;
2．内蒙古自治区食品药品检验所，内蒙古 呼和浩特 010010)
摘 要:目的:建立细叶铁线莲中总黄酮含量的测定方法。方法:采用 60%乙醇加热回流提取细叶铁线莲中的总黄酮。采
用可见分光光度法测定细叶铁线莲中总黄酮的含量。检测波长为 500nm。结果:浓度在 7． 5μg /mL － 45． 1μg /mL 范围内呈
良好的线性关系，回归方程 Y = 0． 535259X + 0． 00068( r = 0． 9999) 。结论:本实验方法准确，简便，重复性好，可快速测定细
叶铁线莲中总黄酮的含量。
关键词:细叶铁线莲;芦丁;总黄酮;可见分光光度法
中图分类号:Ｒ291． 2 文献标识码:A 文章编号:1006 － 6810(2014)08 － 0024 － 03
细叶铁线莲为毛莨科植物芹叶铁线莲 Clematis aethu-
saefolia Turcz． 的干燥带花叶枝条。具破痞，调温，止腐，消
肿，止泻等功效。用于寒痞，消化不良，黄水疮，创疡，水肿，
寒泻等病症。为控制其药材质量，对其所含的黄酮类功效
成分进行了测定研究。
1 仪器与试剂试药
1． 1 仪器:日本岛津 UV － 2450 型紫外 － 可见分光光度
计，Sartorius MSE6． 6 型电子天平，MettLer AE － 100 电子天
平，JD200 － 2 型电子天平;KQ500DE型超声清洗仪。
1． 2 试剂与试药:芦丁对照品:中国药品生物制品鉴定所，
批号 100080 － 200707 甲醇为色谱纯，其他均为分析纯试
剂，水为高纯水。
1． 3 样品来源:细叶铁线莲样品 6 批次，来源分别为:1、蛮
汗山沙平南 2、鄂尔多斯呼和淖尔 3、锡盟蓝旗 4、克什克腾
旗 5、锡盟蒙医研究所 6、蓝旗乌求日庆苏
2 测定方法的选择
芦丁等黄酮类化合物具有 3，4 －邻位羟基，在碱性条
件下可与亚硝酸钠、硝酸铝反应而显红色，据此特点选择芦
丁作为对照品，采用分光光度法进行含量测定。
3 测定波长的选择
42 中国民族医药杂志 2014 年 8 月第 8 期
分别取芦丁对照品溶液、细叶铁线莲药材溶液、空白溶
剂经显色后在 200 ～ 700nm 波长范围内进行光谱扫描，结
果见图(1、2、3)。从光谱图中可见，上述两种溶液在波长
500nm附近有明显吸收，故选择 500nm波长为测定波长。
图 1 芦丁的光谱图
图 2 供试品光谱
图 3 空白溶剂光谱图
4 供试品溶液的制备
4． 1 提取溶剂的选择:参照文献方法〔1〕选用 60%乙醇作
为提取溶剂。
4． 2 提取方法的选择:分别采用 60%乙醇加热回流和超
声提取两种方法进行比较，结果加热回流提取效果较好，结
果见表 1。故选择 60%乙醇加热回流提取。
表 1 提取方法的考察
方法 加热回流 超声提取
黄酮含量(%) 1． 97 1． 40
4． 3 供试品溶液的制备:取本品粗粉约 2g，精密称定，加
60%乙醇 25mL，加热回流 2h，放冷，滤过，残渣再分别加
60%乙醇 25mL，回流 2 次，每次 1h，滤过合并滤液置 100mL
量瓶中，残渣用 60%乙醇洗涤，洗液并入同一量瓶中，用
60%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
5 线性关系考察
取 120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品 10mg，精密称
定，置 50mL量瓶中，加 60%乙醇适量，温热使溶解，放冷，
加 60%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得(每 1mL中含无水芦丁
0． 1879mg)。精密吸取 0． 0mL、1． 0mL、2． 0mL、3． 0mL、4．
0mL、5． 0mL、6． 0mL对照品溶液分别置 25mL 量瓶中，各加
60%乙醇补至 6mL，加 5%亚硝酸钠溶液 1mL，使混匀，放
置 6min，加 10%硝酸铝溶液 1mL，摇匀，放置 6min，加氢氧
化钠试液 10mL，加 60%乙醇至刻度，摇匀，放置 15min。于
500nm波长处测定吸收度。以吸收度对溶液浓度进行回归
分析，结果浓度在 7． 5μg /mL ～ 45． 1μg /mL 范围内呈良好
的线性关系。回归方程 Y = 0． 535259X + 0． 00068 (r = 0．
9999)
6 稳定性试验
取同一份供试品溶液，按上述方法操作，分别于 0min、
15min、30min、45min、60min 测定，结果表明在 1h 内样品的
吸收分值基本不变。故其在 1h内测定基本稳定。
7 精密度
重复性试验:取同一批供试品(6 号样品)6 份，各约
2g，精密称定，分别按上述方法操作，测定每份含量，结果平
均含量为 21． 596mg /g，ＲSD为 1． 78%。
8 准确度
取同一供试品(6 号样品，含量 21． 596mg /g)6 份，各约
1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入芦丁对照品
约 20mg，加 60%乙醇 25mL，按上述方法测定，结果见表 2。
表 2 芦丁加样回收试验
样品号 取样量 g
供试品
含量 mg
对照品加
入量 mg
测得总
含量 mg
回收率
(%)
平均回
收率%
ＲSD
%
95． 39 0． 88
1 1． 0134 21． 669 16． 944 38． 050 96． 67
2 1． 0026 21． 652 15． 614 36． 449 94． 76
3 1． 0128 21． 872 17． 540 38． 503 94． 81
4 1． 0098 21． 807 17． 580 38． 450 94． 67
5 1． 0120 21． 855 15． 220 36． 400 95． 56
6 1． 0056 21． 717 17． 762 38． 755 95． 92
9 供试品含量测定及含量限度确定
取本品粉末按上述方法测定，不同来源的六批样品的
测定结果见表 3。从表中 6 批样品测定的数据可见，细叶
铁线莲中含总黄酮的量多数在 14． 0 mg /g 以上，考虑到药
材产地不同及采收时间的不同造成含量之间的差异，为保
证药材的质量，同时保证药材的货源暂定本品按干燥品计
算，含总黄酮以芦丁(C16H22O10)计，不得少于 1． 40 %。
522014 年 8 月第 8 期 中国民族医药杂志
表 3 供试品中总黄酮含量测定结果
样品来源
取样量
g
吸收值 浓度
含量
mg /g
平均含量
mg /g
以干燥品计
含量 mg /g
1 26． 790 28． 470
1． 9154 0． 587 1． 064 27． 774
1． 8754 0． 532 0． 968 25． 807
2 31． 256 33． 232
1． 8670 0． 660 1． 204 32． 244
1． 8320 0． 612 1． 109 30． 267
3 13． 812 14． 535
1． 9906 0． 303 0． 563 14． 141
1． 8873 0． 273 0． 509 13． 484
4 27． 150 28． 905
1． 9224 0． 569 1． 033 26． 867
1． 8689 0． 556 1． 009 27． 434
5 25． 719 27． 477
1． 8090 0． 493 0． 899 24． 846
1． 9930 0． 585 1． 010 26． 592
6 21． 6995 22． 885
1． 9603 0． 470 0． 858 21． 884
1． 8800 0． 443 0． 809 21． 515
10 讨 论
根据文献报道细叶铁线莲中含常春藤皂苷元，故采用
高效液相色谱法对细叶铁线莲中常春藤皂苷元的含量测定
进行了研究，但供试品色谱图中，在与常春藤皂苷元对照品
色谱峰相应的位置上，未出现相应的色谱峰，未能建立细叶
铁线莲中常春藤皂苷元的含量测定项。考虑到细叶铁线莲
主要含有黄酮类化合物，生物碱，挥发油等化学成分，其黄
酮类化合物是有药理活性的主要化学成分之一，故以芦丁
为对照，对样品中的黄酮类化合物进行了测定。
因供试品溶液中有其他不与显色剂反应的化合物，其
自身带有颜色，在测定波长处有吸收，为排除其干扰，测定
时以供试品溶液不加显色剂(氢氧化钠试液)为空白。
参考文献
［1］国家药典委员会．中国药典［S］．一部．中国医药科技出
版社，2010: 171．
2014 年 7 月 18 日收稿
HPLC法测定维吾尔药比合玛尔江散中没食子酸的含量
尼加提·阿不来提1 古丽巴哈尔·尼牙孜2
( 1．新疆维吾尔自治区喀什地区药品检验所，新疆 喀什 844000;
2．新疆维吾尔自治区喀什地区妇幼保健医院，新疆 喀什 844000)
摘 要:目的:测定比合玛尔江散中没食子酸的含量。方法:采用高效液相色谱法，Pheomenex luna C18 色谱柱 ( 250 ×
4． 60mm，5μm) ，柱温 35℃，流动相甲醇 － 0． 2%磷酸( 5: 95 ) 为流动相 ，检测波长 273nm ，流速 1． 0mL /min结果:没食子酸
在 21． 88 ～ 218． 80 μg /mL间呈良好的线性关系，r = 0． 9997，平均回收率为 102． 11 %，ＲSD0． 53 %。结论:该方法具有操作
简单，灵敏，准确的优点，分离效果显著，可用于余甘子的含量测定和本产品质量控制。
关键词:比合玛尔江散; 高效液相色谱法;没食子酸;含量测定
中图分类号:Ｒ291． 5 文献标识码:A 文章编号:1006 － 6810(2014)08 － 0026 － 02
比合玛尔江散在维吾尔医临床常用药，由珊瑚、黑种
草子、海螵蛸、没食子、等药材组成，具有止痛，消炎。用
于十二指肠溃疡，喉炎，鼻炎，淋巴结炎、等治病，临床疗
效好［1］。由于基础研究薄弱，原标准对于没药没有任何
检验项目，缺乏方中主要指标成分的含量测定。为了更
好地控制比合玛尔江散的质量，我们对其质量标准进行
了研究。
1 仪器及试药
仪器:日本岛津 LC20AT 高效液相色谱仪，SPD － M20
型检测器 SIL － 20A自动进样器，CTO － 10ASVP型柱温箱，
Pheomenex Luna C18 色谱柱(250 × 4． 60mm，5μm)，BP －
211D 1 /10 万电子分析天平(德国 Sartorius)，MettLer AE －
240 型电子天平，超声波溶解仪，超纯水机;试剂:没食子酸
对照品(中国药品生物制品检定所，批号:MUST － 11122813
)甲醇(分析纯):100801，天津市富宇精细化工有限公司，
甲醇(色谱纯):美国产;水为超纯水。
样品:比合玛尔江散(喀什地区维吾尔医医院，批号分
别为 2013107188，201308125，201307196)。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件:Pheomenex luna C18色谱柱(250 × 4． 60mm，
5μm)柱温 35℃，流动相甲醇 － 0． 2%磷酸溶液，检测波长
273nm，流速 1． 0mL /min，分别取样品溶液，阴性样品溶液
和对照品溶液各 10μL 按上述色谱条件分别进样测定，绘
制色谱图，结果理论板数按没食子酸峰计算应不低于
2000，见图 1、2。
图 1 图 2
2． 2 对照品溶液的制备:取没食子酸对照品 10． 94mg，置
100mL量瓶中，用 50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
62 中国民族医药杂志 2014 年 8 月第 8 期