全 文 ：doi 10.3969/j.issn.1673-4254.2014.02.19 J South Med Univ, 2014, 34(2): 236-240
慢性盆腔炎（chronic pelvic inflammatory disease,
CPID）是指女性内生殖器官及其周围的结缔组织、盆腔
腹膜发生的慢性炎症性疾病，包括子宫内膜炎、输卵管
炎、输卵管卵巢脓肿及盆腔腹膜炎等［1］，该病易反复发
作，迁延不愈，可能导致慢性骨盆疼痛、卵管卵巢脓肿、
输卵管不孕和宫外孕等［2］，严重影响女性生活质量，同时
也造成家庭与社会负担［3］。菝葜又名金刚藤，为百合科
植物菝葜（Smilax china L.）的干燥根茎［4］，具有抗炎镇
痛、活血化瘀等药理作用［5］。临床广泛用于治疗妇科炎
症、包块等，尤其是对CPID的治疗有特别疗效［6-7］。本
实验室已对菝葜治疗CPID活性成份的药效学筛选进
行了实验研究，获得了菝葜的乙酸乙酯提取物（黄酮
类成份）为菝葜抗炎及抗CPID的活性成份，菝葜活性
成份（黄酮类成份）能够降低小鼠耳肿胀度和大鼠棉
球肉芽肿增生［8］；且在治疗 CPID 模型中能够减少
CPID大鼠子宫内慢性炎症细胞浸润和修复大鼠子宫
宫腔水肿、炎性包快、组织粘连等病变［9］。因此，本研
究在前研究的基础之上，拟进一步研究菝葜活性成份
Effect of Smilax china bioactive fraction on tumor necrosis factor-α and interleukin- 4
contents in uterine tissue of rats with chronic pelvic inflammatory disease
LUO Yanqin1, MA Yun1, SONG Luyao1, LUO Hongcheng2, HOU Lianbing1
1Department of Pharmacy, Nanfang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China; 2Department of Pharmacy,
Second Hospital of Nanchang, Nanchang 330003, China
摘要：目的 探讨菝葜活性成份治疗慢性盆腔炎的作用机制。方法 采用化学烧伤的方法建立慢性盆腔炎大鼠模型。对70 只大
鼠随机分为模型对照组，假手术组，空白对照组，菝葜活性成份高、中、低剂量组，金刚藤胶囊组。治疗14 d后，观察子宫肿胀率
和抑制率，酶联免疫法检测各组大鼠子宫组织中TNF-α和 IL-4的表达情况。结果 光学显微镜下观察显示：菝葜活性成份高、
中、低剂量组能降低大鼠子宫内膜的炎症细胞，促进其病变上皮细胞增生修复，减轻浆膜充血水肿。与模型对照组比较，菝葜活
性成份高、中剂量组能降低慢性盆腔模型大鼠子宫的肿胀率（P<0.01）；菝葜活性成份高、中、低剂量组子宫组织中TNF-α的含量
明显降低（P<0.01）；菝葜活性成份高、中剂量组子宫组织中 IL-4的含量明显升高（P<0.01），菝葜活性成份低剂量组子宫组织中
IL-4的含量升高（P<0.05）。结论 菝葜活性成份能影响慢性盆腔炎大鼠子宫的肿胀率及子宫组织中TNF-α、IL-4的水平，这可
能是菝葜活性成份治疗慢性盆腔炎症和缓解盆腔粘连的药理作用机制之一。
关键词：菝葜；慢性盆腔炎；肿瘤坏死因子-α；白细胞介素-4
Abstract: Objective To study the mechanism that mediates the therapeutic effect of the bioactive fraction of Baqia (Smilax
china) on chronic pelvic inflammatory disease (CPID). Methods Seventy rats were randomized into CPID model group, sham-
operated group, normal control group, Jingangteng capsule group, and high- , medium- , and low- dose Baqia groups. Rat
models of CPID were established by inducing chemical burns of the uterus and corresponding treatments were administered.
After 14 days of treatment, the rat uterus was observed for swelling and inhibition rate, and the expressions of tumor necrosis
factor-α (TNF-α) and interleukin-4 (IL-4) in the uterine tissues were determined using enzyme-linked immumsorbent assay.
Results The bioactive fraction of Baqia at the 3 doses obviously reduced the inflammatory cells in the endometrium, promoted
epithelial cell proliferation, and ameliorated congestion and edema of the serosa. High and medium doses of Baqia bioactive
fraction significantly decreased uterus swelling rate of the rats (P<0.01). All the 3 doses of the Baqia biaoactive fraction
obviously decreased uterine TNF-α content (P<0.01) and significantly increased uterine IL-4 expression level (P<0.05), and IL-4
up- regulation was especially obvious in high and medium dose groups (P<0.01). Conclusion Baqia bioactive fraction can
ameliorate uterine swelling, lower uterine TNF- α and increase IL- 4 expressions in rats with CPID, which may be a
pharmacological mechanism underlying its therapeutic effect on CPID and cervical adhesion.
Key words: Smilax china; chronic pelvic inflammatory disease; tumor necrosis factor-α; interleukin-4
菝葜活性成份对慢性盆腔炎大鼠子宫组织肿瘤坏死因子-ɑ和白
介素-4的影响
罗艳琴 1，马 云 1，宋路瑶 1，罗红成 2，侯连兵 1
1南方医科大学南方医院药学部，广东 广州 510515；2南昌市第二医院药剂科，江西 南昌 330003
基础研究
收稿日期：2013-09-23
基金项目：广东省医院药学研究基金（奥赛康基金）（2014A14）
作者简介：罗艳琴，硕士研究生，E-mail: lyq20080831@163.com
通信作者：侯连兵，主任药师，博士生导师，电话：020-61642175，E-
mail: hlianbing@163.com
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（黄酮类成份）对CPID模型大鼠子宫炎症的抑制作用
及其对子宫组织中促炎症细胞因子肿瘤坏死因子-α
（TNF-α）和抗炎症因子白细胞介素-4（IL-4）的影响，
以探讨其治疗CPID的药理作用机制。为进一步从分
子水平对菝葜治疗CPID的发生机制提供了参考。
1 材料与仪器
1.1 实验动物
SPF级SD大鼠70只，雌性，体质量180~220 g，由
南方医科大学实验动物中心提供（许可证号：SCXK
（粤）2011-0015，合格证号：No.4402101912）。实验前将
动物置室内适应性饲养3 d，室温18~22 ℃，相对湿度
50%~70%。
1.2 实验药物
菝葜活性成份（黄酮类成份）：1 kg菝葜药材经70%
乙醇提取，醇提液过滤后经乙酸乙酯萃取后再过聚酰胺
柱，50%乙醇洗脱后合并洗脱液，冷冻干燥得固形物15 g，
加蒸馏水溶解，配制成生药量32.4 g/kg的溶液。菝葜
由湖北省药材公司提供，经南方医科大学中医药学院刘
传明教授鉴定为百合科植物菝葜的根茎。金刚藤胶囊
（湖北福人药业股份有限公司，批号：20110318）。
1.3 实验试剂
戊巴比妥钠：德国Merck公司，批号：1212013；25%
苯酚胶浆（液化苯酚5 ml，西黄耆胶1 g，甘油4 ml，加蒸
馏水至20 ml 研磨配制）；苯酚：广东光华化学厂有限公
司，批号：20101204；西黄耆胶：上海汉光化学试剂有限
公司，批号：20120109；甘油：广东光华科技股份有限公
司，批号：20110918；肿瘤坏死因子-α（TNF-α）ELISA检
测试剂盒：美国EBioscience公司，批号：76756032；白介
素-4（IL-4）ELISA检测试剂盒：美国EBioscience公司，
批号：76834010。
1.4 实验仪器
BA110S型电子分析天平（万分之一精确度，德国
Sartorius公司）；微量加样器（Eppendorf公司）；多功能
酶标仪M5（美国 MDS公司）。
2 方法
2.1 大鼠CPID 模型制作［8］
取SPF级SD雌性大鼠70只，禁食不禁水12 h，3%
戊巴比妥钠30 mg/kg静脉麻醉后，剪去下腹正中毛，酒
精棉球消毒，于下腹部正中切口2 cm，暴露子宫，用0.1 ml
注射器配0.2 ml注射器的针头，于子宫分岔处进针入子
宫腔内，朝右侧方向缓慢推注25%苯酚胶浆0.06 ml，左
侧子宫不注射作为自身对照。造模完成后分层关腹，消
毒术区。保留10只仅进行开腹和关腹手术，不注射苯
酚胶浆造模，作为假手术对照组。
2.2 分组及给药
将成功建立CPID 模型的70只SD大鼠随机分为7
组，每组10只。菝葜活性成份的高、中、低剂量组均分
别灌胃给予32.4、16.2、8.1 g生药量/kg（相当于临床等效
剂量的4、2、1倍）浓度的药液，中药阳性对照药金刚藤胶
囊组按生药量16.2 g/kg（相当于临床活性剂量的2倍）
浓度配制药液，灌胃给予大鼠；模型对照组、空白对照组
和假手术组均灌胃给予等容积蒸馏水。于造模后第7
天开始给药，1次/d，连续给药14 d。
2.3 观察指标
于第15天，以3%戊巴比妥钠30 mg/kg腹腔麻醉大
鼠后，摘取左、右侧子宫，分别称质量，计算子宫肿胀率
及肿胀抑制率；取右侧造模子宫浸泡于福尔马林中，HE
常规染色，光学显微镜下观察大鼠子宫的病理变化程
度: 腔壁结构改变、上皮细胞增生、上皮细胞变性坏死、
慢性炎症细胞浸润及内膜充血水肿等，根据炎症病变程
度，每项为无（-）、轻度（+）、中度（++）和重度（+++），分
别评分为 0、1、2、3分［10］，以各组评分之和为炎性评分结
果进行统计学分析；称取100 mg右侧造模子宫组织，均
浆后取上清液做TNF-α和 IL-4含量测定。子宫组织中
TNF-α和 IL-4 含量的测定均采用酶联免疫法按照试剂
盒说明书方法测定。
肿胀率=（致炎侧子宫质量-未致炎侧子宫质量）/未
致炎子宫质量×100%
抑制率=（模型组子宫平均肿胀率-给药组子宫平均
肿胀率）/模型组子宫平均肿胀率 ×100%
2.4 统计学处理
所有数据均采用SPSS16.0软件进行统计。计量资
料统计结果用平均数±标准差表示，完全随机设计资料
的多个样本均数比较采用单因素方差分析，组间两两比
较，方差齐时采用LSD检测，方差不齐时采用Dunnetts
T3法，病理评分采用非参数检验的秩和检验进行统计学
处理。P<0.05差异具有统计学意义。
3 结果
3.1 对苯酚胶浆所致CPID模型大鼠子宫肿胀率及肿胀
抑制率的影响
由表1可知，大鼠子宫注射苯酚胶浆后会引起子宫
肿胀度的升高。菝葜活性成份的高剂量、中剂量与模型
对照组相比子宫肿胀率明显下降，有非常显著性差异
（P<0.01）；菝葜活性成份低剂量与模型对照组相比，无
统计学差异（P>0.05）；金刚藤胶囊组也能降低CPID模
型大鼠子宫的肿胀率（P<0.01）。
3.2 子宫组织病理学观察
光学显微镜下观察显示：模型对照组腔壁结构紊
乱，黏膜固有层变薄或消失，腺体萎缩变形，黏膜上皮细
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胞密集增生，上皮细胞部分变性坏死、脱落、呈分支乳头
状，全层分界不清、可见大量慢性炎症细胞浸润，内膜充
血、水肿（图1A）；空白对照组腔壁各层结构清晰，子宫
腺体完整，内膜无充血、水肿（图1B）；假手术组腔壁各
层结构完整、清晰，空腔呈单层柱状，有少量慢性炎症细
胞浸润，少见内膜充血、水肿（图1C）；金刚藤胶囊组宫
腔扩张，黏膜上皮细胞变性呈空泡状，固有层和肌层可
见中等量慢性炎症细胞浸润，内膜部分充血、水肿（图
1D）；菝葜活性成份高剂量组腔壁结构轻度改变，腔壁
黏膜固有层与肌层分界不清，部分上皮细胞呈空泡状，
炎症细胞减少，基本痊愈（图1E）；菝葜活性成份中剂量
组腔壁结构紊乱，黏膜固有层变薄或消失，全层结构分
界不清，黏膜上皮细胞密集增生，慢性炎症细胞散在灶
性并深入肌层浸润，内膜轻度充血、水肿（图1F）；菝葜活
性成份低剂量组宫腔粘连、扩张，腔壁结构紊乱，黏膜固
有层变薄或消失，全层结构分界不清，黏膜上皮细胞密
集增生呈分支乳头状突入宫腔，上皮细胞少量变性坏
死、脱落，全层可见大量慢性炎症细胞浸润，内膜水肿明
显（图1G）。通过病理评分可知：与模型对照组比较，菝
葜活性成份高、中、低剂量组能非常显著地改善上述症
状（P<0.01），减少慢性炎症细胞浸润，改善充血、水肿和
宫壁各层结构，大部分腺体结构清晰完整；且随着剂量
增高，改善效果越明显。金刚藤胶囊组具有非常显著地
治疗作用（P<0.01），但其炎症改善不如菝葜活性成份高
剂量组明显（表2）。
3.3 ELISA 法检测 CPID 模型各组大鼠子宫组织中
TNF-α和IL-4的含量
3.3.1 子宫组织TNF-α含量比较（表3） 与模型对照组比
较，空白对照组和假手术组TNF-α含量非常显著性升高
（P<0.01）；菝葜活性成份高、中、低剂量组均能非常显著
性降低大鼠组织中促炎症细胞因子 TNF-α含量（P<
0.01）；金刚藤胶囊组能非常显著性降低大鼠组织中促
炎症细胞因子TNF-α含量（P<0.01）。
3.3.2 子宫组织IL-4含量比较（表3） 空白对照组、假手
术组与模型对照组比较有非常显著性差异（P<0.01）；与
模型对照组比较，菝葜活性成份高、中剂量组均能显著
提高抗炎症细胞因子IL-4在大鼠组织中的含量，具有非
常显著性差异（P<0.01）；菝葜活性成份低剂量组能显著
提高抗炎症细胞因子 IL-4在大鼠组织中的含量（P<
0.05）。金刚藤胶囊组能非常显著性提高抗炎症细胞因
子IL-4在大鼠组织中的含量（P<0.01）。
4 讨论
CPID是盆腔炎症性疾病的后遗症，由盆腔的急性
炎症演变而来，是促炎/抗炎因子相互作用和局部免疫
调节共同参与的结果［11］。CPID患者免疫系统遭到破
坏，抗病能力明显减弱，盆腔易受需氧菌和厌氧菌的混
合感染，炎性细胞不断浸润，对宫旁和盆腔的结缔组织
产生影响［12］。目前，西医治疗主要以抗菌素为主，疗效
欠佳，副作用大，长期服用易产生耐药性，而中医中药治
疗有副作用小、标本兼治，尤其是对于治疗慢性疾病及
疑难杂症具有独特的优势和特色［13］。因此，本研究通过
现代提取、分离、纯化工艺富集菝葜药材中的活性成份，
来开发菝葜有效成份制剂，但CPID大鼠子宫病理图片
结果显示：菝葜活性成份高、中、低剂量组对CPID均有
较好的治疗作用，但只有菝葜活性成份高剂量组的治疗
作用比金刚藤胶囊组好，菝葜活性成份中剂量组与金刚
藤胶囊组药效相近，菝葜活性成份低剂量组的治疗作用
不如金刚藤胶囊组。这可能是菝葜活性成份的分离纯
化工艺需要进行改善，以得到活性成份明确、损失更少、
含量更高的黄酮类成分。另一种可能存在的原因还有，
菝葜中主要含皂苷和黄酮类成分［14］，黄显章等［15］对金刚
藤醇提取物进行了分离纯化得到了主要含黄酮、皂苷和
鞣质等成分的中药提取物，对其进行了抗炎、镇痛和抗
CPID模型的实验研究，结果显示：金刚藤有效物质成份
群具有明显的抗炎、镇痛作用，且能明显减轻慢性盆腔
炎模型大鼠子宫的炎症反应。可能单一成份的黄酮类
成分没有多个部位组成的有效部位群的治疗作用好。
CPID大鼠子宫组织脏器指数结果显示：菝葜活性成份
的高、中、低剂量组治疗后子宫肿胀率下降，但菝葜活性
Group
Normal control group
Model control group
Sham operation group
Baqias Bioactive fraction group
Jingangteng capsules group
Dose（g/kg）
Water
Water
Water
32.4
16.2
8.1
16.2
Swelling rate of uterine (%)
-
20.19±0.80
1.29±0.22**
10.72±0.83**
18.72±0.41**
20.11±0.60
18.35±0.33**
Swelling inhibition rate of uterine (%)
-
-
-
46.90
7.28
0.40
9.11
**P<0.01 vs model group.
表1 对苯酚胶浆所致CPID模型大鼠子宫肿胀率及肿胀抑制率的影响
Tab.1 Effect of Baqia bioactive fraction on uterine swelling rate and swelling inhibition rate in rats with CPID(n=10, Mean±SD)
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A B C
图1 各组大鼠给药14 d后子宫组织标本病理学变化
Fig.1 Histopathological changes of the uterine tissues in each group after 14 days of
treatment (HE staining, original magnification: ×100). A: Model; B: Normal control; C:
Sham-operated; D: Jingangteng capsule; E: High-dose Baqia; F: Medium-dose Baqia; G:
Low-dose Baqia.
D E F
G
Group
Model control
Sham operation
Normal control
Baqias bioactive fraction
Jingangteng capsules
Dose (g/kg)
Water
Water
Water
32.4
16.2
8.1
16.2
Disease degree (Points)
－
2
37
47
9
2
3
1
+
4
13
3
37
34
14
26
++
8
0
0
4
14
30
21
+++
36
0
0
0
0
3
2
Mean rank
298.00
82.46**
58.26**
158.58**
196.75**
238.03**
196.42**
表2 菝葜活性部位对各组大鼠子宫病理组织积分的影响
Tab.2 Effect of Baqia bioactive fraction on uterine pathological scores (n=10, Mean±SD)
**P<0.01 vs model group.
Group
Model control
Normal control
Sham operation
Baqias bioactive fraction
Jingangteng capsules
Dose (g/kg)
-
-
-
32.4
16.2
8.1
16.2
TNF-α
302.30±20.17
28.58±11.36**
65.14±11.01**
99.27±12.70**
214.11±8.88**
267.87±14.16**
196.25±12.93**
IL-4
3.53±0.22
12.48±0.42**
11.47±0.50**
8.21±0.43**
5.17±0.20**
3.89±0.41*
5.21±0.47**
表3 菝葜活性部位对各组大鼠组织中TNF-α和IL-4含量的影响
Tab.3 Effect of Baqia bioactive fraction on uterine TNF-α and IL-4 expression (n=10, Mean±SD)
*P<0.05, **P<0.01 vs model group.
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成份低剂量组与模型对照组相比没有统计学差异，这可
能与子宫组织的病变有关，子宫病变后管腔肿胀，管腔
内可见黄色脓液或清亮液体，菝葜活性成份低剂量组治
疗后管腔内液体未见明显改善。
机体参与免疫系统的炎症因子主要分为前炎症因
子和抑炎症因子两类，分别由辅助性 T1细胞（Th1）和辅
助性 T2细胞（Th2）分泌。一般情况下，Th1/Th2 细胞处
于动态平衡以维持正常的细胞免疫和体液免疫功能，
Th1/Th2 细胞平衡异常均可导致疾病的产生［16］。TNF-α
是一种促炎症因子和免疫调节因子，主要由Th1 细胞分
泌［17］。在炎症的初始阶段可有助于机体免疫系统的抗
感染作用，但持续升高则导致一些病理生理改变，TNF-
α能刺激内皮细胞产生多种黏附分子，使释放的中性粒
细胞、淋巴细胞黏附到内皮细胞上，诱导血管内皮细胞
产生炎症介质，引起局部的炎症反应，对子宫组织造成
炎症病理性损伤。经菝葜活性成份治疗后，CPID模型
大鼠子宫组织中TNF-α含量显著降低，表明菝葜活性成
份治疗CPID的药理作用机制可能是其具有抗免疫和抗
炎症细胞因子作用，从而抑制外周血管单核细胞和巨噬
细胞分泌TNF-α，使外周血管TNF-α含量降低，降低其
对单核细胞、淋巴细胞的趋化作用而减轻炎症细胞对组
织的浸润而实现其治疗作用。IL-4是由活化 Th2 细胞
产生的一种重要的抑炎性细胞因子［18］，能抑制Th1细胞
的活化及分泌细胞因子TNF-α等，对机体的免疫功能和
炎症过程具有重要的调节作用。经菝葜活性成份治疗
后，大鼠子宫组织TNF-α水平显著降低，大鼠子宫组织
IL-4水平显著升高，提示菝葜活性成份可能通过提高细
胞免疫反应，协调 Th1/Th2 细胞作用，使机体免疫功能
恢复正常而发挥其药理作用。
本实验主要从炎症组织修复和抗炎症细胞因子方
面阐述了菝葜活性成份治疗CPID的抗炎药理作用机
制，为CPID的治疗机制研究提供了参考。
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（编辑：吴锦雅）
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