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轮叶马先蒿活性部位的抗氧化作用



全 文 :按优选出的最佳包合工艺,平行操作 3 份,结果
收得率均值为 90. 66,含油率均值为 9. 71,油利用率
均值,94. 80。说明该实验工艺包合效果可行,条件
稳定,因此,确定该工艺为最佳包合工艺,结果见表
4。
表 4 重复性验证实验
实验号 收得率(%) 含油率(%) 利用率(%)
1 91. 03 9. 70 94. 51
2 90. 29 9. 77 95. 22
3 90. 66 9. 67 94. 68
平均值 90. 66 9. 71 94. 80
3 讨论
为减少颗粒剂中挥发油的损失,研究采用 β-环
糊精包合技术,首先对 2 味药材所提取的挥发油进
行包合,再进行颗粒剂成型工艺的研究,以期提高颗
粒剂中挥发油成分的稳定性。
β-环糊精包合常用方法有饱和水溶液法、超声
波法和研磨法,单因素实验结果表明饱和水溶液法
对细辛、薄荷挥发油的包合效果优于超声波法,略低
于研磨法,与文献[7]结果一致。根据工业生产条件
和实验结果,最终选择饱和水溶液法为制备方法。
挥发油包合率是衡量包合效果的重要指标,包
合率越高包合效果越好,因此将包合率权重系数设
置为 0. 7,作为包合工艺综合筛选的指标。
参考文献:
[1] 梁学清,李丹丹.细辛药理作用研究进展[J].河南科技大学学
报(医学版) ,2011,(29(4) :318 ~ 320
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[J].中成药,2011,33(9) :1607 ~ 1670
[收稿日期:2013 - 12 - 15]
·论著·
轮叶马先蒿活性部位的抗氧化作用
*
龙文雄1 黎 梅1 金家宏2 夏增华2 李 慧2 王 琪3
(1.石河子大学药学院 2012 级硕士研究生,新疆石河子,832002;2.伽蓝(集团)股份有限公司研发中心,
上海,200233;3.新疆特种植物药资源教育部重点实验室 /石河子大学药学院,新疆石河子,832002)
【摘要】目的:对新疆特色药用植物轮叶马先蒿开展抗氧化作用的研究。方法:采用比色法,通过对 DPPH自由
基的清除作用和对弹性蛋白酶的抑制作用,评价轮叶马先蒿不同化学极性部位的抗氧化能力。结果:轮叶马先蒿
根 95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位和正丁醇萃取部位对 DPPH 自由基清除率分别为 89%和 88%,轮叶马先
蒿根 95%乙醇提取物的石油醚萃取部位和乙酸乙酯萃取部位对弹性蛋白酶的抑制率分别为 52%和 47%。结论:
轮叶马先蒿根的各极性部位均显示出良好的抗氧化能力,今后可作为天然抗氧化剂加以开发利用。
【关键词】轮叶马先蒿;活性部位;抗氧化作用
中图分类号:R284 文献标识码:A
·094·
第 6 期 农 垦 医 学 第 35 卷
* 基金项目:新疆生产建设兵团科技援疆项目(2011AB033)。
通讯作者:王琪,教授,博士研究生导师,从事中草药的活性成分及其资源的研究。
Antioxidant Activity of Pedicularis verticilata
LONG Wen-xiong1,LI Mei1,JIN Jia-hong2,XIA Zeng-hua2,LI Hui2,WANG Qi3
(1. Key Laboratory of Xinjiang Phytomedicine Resource,Xinjiang Shihezi,832002;2. R&D center,JALA group,Shanghai,200233)
【Abstract】This paper dealed with the evaluaiton of antioxidant activity of Pedicularis verticilata.,a traditional Chi-
nese herb distributed in Xinjiang Bayanbuluk meadow,by two methods:DPPH radical scavenging,and restraining the elas-
tase. The results showed that ethyl acetate sites and n-Butanol sites from the 95% alcohol extracts of roots had significant
activities to eliminating DPPH radical with the inhibiting ratio of 89% and 88%,and petroleum ether sites and ethyl acetate
sites to restraining elastase with the inhibiting ratio of 52% and 47% . The all sites from the 95% alcohol extracts of roots
can be employed as natural antioxidants.
【Key words】Pedicularis verticilata;Active site;Antioxidant
抗氧化剂(Antioxidants)是一类能帮助捕获并
中和自由基,从而祛除自由基对人体损害的一类物
质,植物中含有丰富的天然抗氧化剂,可以帮助人类
预防心脏病和癌症等多种疾病,并能增进脑力,延缓
衰老。轮叶马先蒿(Pedicularis verticilata L.)俗名土
人参,为玄参科马先蒿属植物,马先蒿属(Pedicularis
L.)植物药用种类繁多,历史悠久。早在《神农本草
经》和《本草纲目》等中药典籍中,就有关于该属植
物的药用价值的记载[1]。轮叶马先蒿以根人药,性
温味甘,微苦,大补元气,生津安神,强心。多用于治
疗气血虚损、疲劳多汗、虚脱衰竭、血压降低等
症[2]。近年来对马先蒿属植物的化学成分和生物
活性研究中发现,该属植物含有环烯醚萜苷、苯丙素
苷、木脂素苷、生物碱、黄酮等多类化合物,其中环烯
醚萜苷、苯丙素苷类化合物是该属的特征性化合物,
表现出抗肿瘤、抗氧化、DNA 修复、提高机体免疫
力、保肝、降压利尿等各种生理活性[3 - 5]。据文献报
道[6],从轮叶马先蒿中分离鉴定了 16 个单体化合
物,这些化合物大多属于新木脂素苷、苯丙素苷和单
萜环烯醚苷。综合现有文献资料,未发现轮叶马先
蒿及其所含成分具有抗氧化作用的文献报道。本实
验旨在发现轮叶马先蒿抗氧化的活性部位及提取方
法,为今后将其作为制备具有抗氧化效果的药物、化
妆品和保健品提供参考。
1 材料与方法
1. 1 材料
实验用药材轮叶马先蒿于 2013 年 8 月,采自新
疆天山山脉南坡海拔 2 400 米的巴音布鲁克草原,
由石河子大学生命科学学院阎平教授鉴定,并确定
学名为轮叶马先蒿(Pedicularis verticilata L.) ,凭证
标本(WQ-PV-13-1)保存于石河子大学药学院中药
系标本室。
1. 2 仪器与试剂
旋蒸仪(上海爱郎仪器有限公司) ;TU-1900 双
光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限
责任公司) ;多功能酶标仪(Thermo 3001 VARIOS-
KAN FLASH ) ;AR2140 型万分之一电子天平(梅特
勒-托利多仪器有限公司制造) ;DL360 超声波清洗
机(浙江象山县石浦海天电子仪器厂)。刚果红-弹
性蛋白(Sigma公司) ;Tris(北京尔拜迪生物公司) ;
PBS缓冲液;其余试剂均为分析纯。
1. 3 方法
1. 3. 1 化学成分的提取 取轮叶马先蒿地上部分
干燥的粗粉和根干燥的粗粉各 60g,分别加入
100mL 95%的乙醇超声提取 30min、滤液回流得浸
膏,将浸膏混悬于水,再分别依次用石油醚、乙酸乙
酯和正丁醇进行萃取,水层与粗粉经水煎 1hr 的滤
液合并,旋转蒸发得到地上部分和根不同极性部位
的浸膏。
1. 3. 2 样品溶液的制备 称取 4 个极性部位的浸
膏各 8mg,分别配制成 200mg /L、100mg /L、50mg /L、
25mg /L、12. 5mg /L、6. 25mg /L,6 种浓度的溶液备
用。
2 结果
2. 1 自由基清除作用
·194·
2013 年 12 月
第 35 卷 第 6 期
农 垦 医 学
Journal of Nongken Medicine
Dec. 2013
Vol. 35 No. 6
此法是根据 DPPH 自由基有单电子,在 517nm
处有一强吸收,其醇溶液呈紫色的特性。当有自由
基清除剂存在时,由于与其单电子配对而使其吸收
逐渐消失,其褪色程度与其接受的电子数量成定量
关系,因而可用分光光度计进行快速的定量分析,来
检测自由基清除情况,从而评价样品的抗氧化能力。
其能力用清除率来表示,清除率越大,则表明其抗氧
化能力越强[7-8]。
将不同稀释度的待测样品溶液 2mL 加入试管
中;加入 2mL 76μmol /L DPPH乙醇溶液,混匀;室温
下避光在黑暗处反应 30min;在 525nm 处测定吸光
度(A525) ;每个浓度重复 3 次测试以保证实验结果
的准确性,最后取平均值作为拟合数据。
清除率 I(%)=[1 - (T - T0)/(C - C0) ]×
100%,式中:T0:2 mL水或 DMSO 加 2 mL DPPH 溶
液的吸光度;T:2mL 样品液加 2mL DPPH 溶液的吸
光度;C:2mL样品液加 2mL 95%乙醇的吸光度;C0:
2mL水或 DMSO 加 2mL 95%乙醇的吸光度。按照
上面公式计算清除率,清除率越大抗氧化能力越强。
试验结果如表 1 和图 1 所示。
表 1 轮叶马先蒿极性部位清除 DPPH自由基作用
样品 浓度(mg /mL)清除率(%)
轮叶马先蒿地上部分石油醚萃取物 0. 05 5 ± 1
轮叶马先蒿地上部分乙酸乙酯萃取物 0. 05 74 ± 7
轮叶马先蒿地上部分正丁醇萃取物 0. 05 54 ± 3
轮叶马先蒿地上部分水煎部位 0. 05 10 ± 1
轮叶马先蒿根石油醚萃取物 0. 05 10 ± 2
轮叶马先蒿根乙酸乙酯萃取物 0. 05 89 ± 11
轮叶马先蒿根正丁醇萃取物 0. 05 88 ± 8
轮叶马先蒿根水煎部位 0. 05 24 ± 2
图 1 轮叶马先蒿根乙酸乙酯萃取物和
正丁醇萃取物清除自由基能力
由实验结果可以看出,轮叶马先蒿地上部分乙
酸乙酯萃取物、轮叶马先蒿根乙酸乙酯萃取物和轮
叶马先蒿根正丁醇萃取物,在 0. 05 mg·mL -1时,对
DPPH自由基清除率分别为 74%,89%和 88%,表
现出显著的自由基清除作用,其中,轮叶马先蒿根乙
酸乙酯萃取物和轮叶马先蒿根正丁醇萃取物活性较
强。
2. 2 弹性蛋白酶抑制作用
测定方法按照文献[9]方法进行,测定步骤为:
在 96 孔板中加入 10μL 样品溶液和 130μL 含有 1.
015 mM 反应底物 Succ-Ala-Ala-Ala-p-硝 基酰替苯
胺标准溶液的 0. 1M Tris-Cl 缓冲溶液(PH8. 0) ,在
25℃下温育 5 分钟,加入 15μL 弹性蛋白酶溶液(0.
5 U /mL) ,继续在 25℃下温育 30 min,然后用酶标仪
测定 410 nm波长的吸光度(A410)。用去离子水替
换样品水溶液,作为参比溶液同样测定吸光度,计算
抑制率,抑制率越大抗氧化能力越强。试验结果见
表 2 和图 2。
表 2 轮叶马先蒿极性部位弹性蛋白酶抑制作用
样品 浓度(mg /mL)抑制率(%)
轮叶马先蒿地上部分石油醚萃取物 - - - -
轮叶马先蒿地上部分乙酸乙酯萃取物 - - - -
轮叶马先蒿地上部分正丁醇萃取物 - - - -
轮叶马先蒿地上部分水煎部位 - - - -
轮叶马先蒿根石油醚萃取物 1. 0 52 ± 8
轮叶马先蒿根乙酸乙酯萃取物 1. 0 47 ± 4
轮叶马先蒿根正丁醇萃取物 - - - -
说明:- -表示无活性。
图 2 轮叶马先蒿根石油醚萃取物和乙酸乙酯
萃取物弹性蛋白酶抑制作用
由实验结果可以看出,轮叶马先蒿根石油醚萃
取物和轮叶马先蒿根乙酸乙酯萃取物,在 1. 0 mg·
mL -1时,对弹性蛋白酶抑制率分别为 52%和 47%,
由此可见,石油醚和乙酸乙酯部位均具有较强的弹
性蛋白酶抑制作用,其中,以石油醚部位抑制作用最
强。
·294·
第 6 期 农 垦 医 学 第 35 卷
3 讨论
在进行自由基清除作用实验时,我们事先在
500 ~ 550 nm对待测样品溶液进行扫描,未发现明
显吸收峰,说明样品溶液中的成分对本实验无影响;
在测定弹性蛋白酶抑制作用之前,我们同样验证了
样品溶液在 410 nm波长处对吸光度的测定无影响。
轮叶马先蒿根的各极性部位均显示出良好的抗
氧化能力。由实验结果可以看出轮叶马先蒿作为传
统天然药物,其根应具有更大的药用价值,虽然其地
上部分的乙酸乙酯萃取部位对 DPPH自由基也有一
定的清除作用,但根的乙酸乙酯和正丁醇萃取部位
对清除 DPPH自由基以及根的石油醚和乙酸乙酯萃
取部位抑制弹性蛋白酶表现出更显著的活性。
弹性蛋白酶是与抗衰老有关的指标之一,通常
与 DPPH自由基清除一起表达该提取物的抗衰老作
用。轮叶马先蒿作为一种牧场杂草,在西北地区有
丰富的资源。对其进行进一步的研究,今后在抗氧
化药物、化妆品和保健品领域中具有良好的应用前
景。
参考文献:
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[收稿日期:2013 - 12 - 15]
·论著·
超声波辅助水酶法提取油莎豆油
*
高芳芳1 田丽萍1 薛 琳2
(1.石河子大学药学院,新疆石河子,832002;2.新疆石河子蔬菜研究所,新疆石河子,832000)
【摘要】目的:探讨超声波辅助水酶法提取油莎豆油的最佳提取工艺条件。方法:以油莎豆油提取率为考察指
标,采用单因素筛选出超声提取的最佳条件,以最佳超声条件结合水酶法提取油莎豆油,在对各影响因素进行单因
素试验的基础上,通过正交试验确定最佳提取工艺并进行验证试验。结果:最佳水酶法提取工艺条件为:料液比 1 ∶
8,pH 9. 0,酶解温度 55℃,酶解时间 3 h,酶用量 2. 5% ,超声功率 240W,超声时间 7min,在此条件下提取率为(94.
78 ± 0. 22)%。结论:该方法提取条件温和,操作简单可行,为油莎豆油的进一步开发利用提供科学依据。
【关键词】油莎豆;水酶法;超声波;油莎豆油
中图分类号:R284. 2 文献标识码:A
·394·
2013 年 12 月
第 35 卷 第 6 期
农 垦 医 学
Journal of Nongken Medicine
Dec. 2013
Vol. 35 No. 6
* 基金项目:新疆兵团农八师石河子市级资助项目(2012NY14)。
通讯作者:田丽萍,女,教授,硕士研究生导师,从事生物学研究。