全 文 ：定的对象为经水解后其刺槐素总量。
4. 2　本法重复性良好 ,准确 ,干扰因素少 ,可适用于
野菊花浸膏粉和含野菊花成分的制剂如珍菊降压片
中刺槐素的测定 ,为这些药物的质量控制提供了一
种良好的测定方法。
参考文献
[1]　肖培根 .新编中药志 [M ] ,第二卷 ,北京: 化学工业出版社 ,
2001. 785-790
[ 2 ]　潘学田 .现代实用本草 [M ] ,北京: 人民卫生出版社 , 1997. 86-
89.
[ 3 ]　姜丽霞 ,徐世芳 . HPLC法测定野菊花中绿原酸的含量 [ J ].中
国药品标准 , 2003, 4( 6): 54-56.
[ 4 ]　徐礼　焱木 ,刘爱茹 .野菊花中刺槐甙的库伦滴定法 [ J].药
学学报 , 1987, 22( 4) . 318-320.
收稿日期: 2004-04-11
基金项目:四川省科技厅“天冬药材内江种植科技示范区”项目
作者简介:李敏 ,女 ,副教授 ,硕士生导师 ,现在成都中医药大学中药
鉴定与药用植物教研室从事中药品质和中药材 GAP专
题研究。近年来 ,以课题负责人的身份承担了多个四川省
中药材 GAP研究项目。 Tel: 028-88070396 028-87782078
( H) E-mai l: limin96@ yah oo. com. cn
天冬中菝葜皂苷元含量测定方法的探讨
李　敏 1 ,费　曜 1 ,王　琦1 ,方道硕 2
( 1.成都中医药大学中药鉴定和药用植物教研室 ,四川 成都 610075;
2.成都铁路局中心医院 , 四川 成都 610081)
　　摘要:目的　研究天冬中菝葜皂苷元的含量测定法。方法　采用薄层扫描法对天冬中菝葜皂苷元进行含
量测定。结果　菝葜皂苷元在 0. 5～ 4. 5μg范围内线性关系良好 ( r= 0. 998 5) ,平均回收率为 97. 4% , RSD=
2. 7%。 结论　本法简便、准确、灵敏 ,重现性良好 ,可用于天冬质量控制及 GAP研究。
　　关键词:天冬 ;菝葜皂苷元 ;薄层扫描法
　　中图分类号: R284. 1　　　　文献标识码: A　　　　文章编号: 1004-2199( 2004) 04-0034-04
　 Determination of Sarsasapogenin in Radix Asparagi by TLC Scaning Method
LI Min
1 , FEI Yao
1 , W ANG Qi
1 , FAN G Dao-shuo
2
( 1. Teaching and Resea rch Section of Herb Identi fica tion and Medicinal Plant , Chengdu Univ ersity
o f Tradi tional Chinese Medicine, Chengdu 610075, China; 2. M edicament Depa rtment
of Chengdu Railway Central Hospi tal , Chengdu 610081, China )
Abstract: Object　 To study a method fo r the determina tion o f Sa rsasapogenin in Radix Asparagi.
Methods　 Sa rsasapogenin in Radix Aspara determined by TCL-scanning. Results　 A good linearity w as
obtained in the range of 0. 5～ 4. 5μg ( r = 0. 9985 ) fo r sarsasapogenin. The average recovery of
sarsasapogenin was 97. 4% . RSD was 2. 7% . Conclusion　 The method is simple, sensi tiv e and accurate
w ith good reproducibi li ty w hich can be used in quali ty cont ro l and GAP s studying o f Radix Aspa ragi.
Key words: Radix Asparagi; Sarsasapogenin; TCL-scanning.
　 　 天 冬 为百 合 科 植 物 天 门 冬 Asparagus
cochinchinensis ( Lour. ) M err.的干燥块根 ,是临床
常用中药。始载于《神农本草经》 ,具有养阴清热、润
肺生津之功效 ,是传统的补阴中药。临床上多用于肺
燥干咳 ,顿咳痰粘 ,咽干口渴 ,肠燥便秘等症 ;现代药
理研究表明其水煎液具有抗菌、抗肿瘤的作用 ,现进
一步用于治疗肿瘤和延缓衰老。 2000版《中国药典》
中天冬项下只有水分和醇溶性浸出物的检查 ,无内
在质量控制指标 [1 ]。显然 ,现有标准难以客观评价天
冬的内在质量。我们就收集到的有关天冬近 30年的
背景资料看 ,单一成分定量分析方面的研究很少。天
冬中含有多种甾体皂苷 ,主要以菝葜皂苷元、薯蓣皂
苷元、雅姆皂苷元等皂苷元为非糖部分 [2～ 5 ] ,而菝葜
—34— 现代中药研究与实践 2004年第 18卷第 4期Resear ch and Practice o f Chinese Medicines
DOI : 10. 13728 /j . 1673 -6427. 2004. 04. 012
皂苷元已为药理药效学证明为滋阴清热中药知母中
的有效成分 ,结合天冬具有养阴清热之功效 ,笔者对
天冬中菝葜皂苷元 ( Sarsasapogenin)的含量测定方
法进行了方法学考察 [ 6～ 9] ,因该成分无紫外吸收 ,最
后确定采用薄层扫描法对天冬中的菝葜皂苷元进行
含量测定。该研究为天冬药材质量标准的制订提供
参考依据。
1　仪器与材料
1. 1　仪器　 GAM AG TLC SCANNER 3薄层扫描
仪 ; PBQ-II型薄层自动铺板器 (重庆南岸新力实验
电器厂 ) ; 定量点样毛细管 ( Drummond USA ) ;
BP211D电子分析天平 (德国 Sa rto rius)。
1. 2　材料　天冬样品均由鉴定教研室李敏副教授
自行采集并鉴定 ,见表 6; 菝葜皂苷元对照品
( Sa rsasapogenin) (中国药品生物制品检定所 <定量
用 > ,批号: 0744-200005) ;硅胶 G(薄层色谱用 ,青
岛海洋化工厂 ) ;其余所用试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　对照品溶液的制备　精密称取菝葜皂苷元对
照品 ,加氯仿∶乙醇 ( 1∶ 1)混合液制成每 1 mL含
0. 5 mg的溶液 ,作为对照品溶液。
2. 2　样品溶液的制备　精密称取药材粗粉 (过 40
目筛 ) 2 g ,加盐酸 10 m L及蒸馏水 80 mL,浸泡过
夜 ,置水浴上回流水解 2 h,放置室温 ,滤过 ,容器及
滤渣多次加少量水洗涤 ,至滤液无色。滤渣置烘箱中
100℃干燥 1 h后 ,置索氏提取器中用石油醚 ( 30℃
～ 60℃ )回流提取 3 h。 提取液回收石油醚至干 ,用
氯仿-乙醇 ( 1∶ 1)混合液溶解残渣 ,定容成 2 mL。
2. 3　薄层色谱条件　薄层板的制备:取硅胶 G,加
3倍量 0. 5%的 CMC-Na水溶液 ,搅拌均匀涂布于
20 cm× 20 cm的玻璃板上 ,厚度为 0. 5 mm,室温晾
干 ,于 105℃的烘箱中活化 1 h ,置干燥器中保存备
用。展开剂:氯仿-正己烷 -乙酸乙酯 ( 10∶ 10∶ 0. 5)。
展开方式: 上行展开约 15 cm ,取出 ,晾干 ,再用同一
展开剂进行二次展开。 显色剂为甲: 8%香草醛无水
乙醇液 ;乙: 取水 25 m L,缓慢加硫酸 50 mL,放冷
后 ,加乙醇 25 mL ,摇匀。用时甲∶乙 ( 1∶ 5)进行显
色 [1 ] ,临用现配。 70℃烘至斑点清晰 ,菝葜皂苷元呈
淡黄色斑点 ,取出 ,在薄层板上覆盖同样大小的玻璃
板 ,周围用胶布固定后进行薄层扫描测定见图 1。 Rf
= 0. 6。
1-云南产天冬　 2-云南大理宾川产天冬　 3-四川内江产天冬
4-广西玉林产天冬　 5-贵州习水产天冬　 S3-标准品:菝葜皂苷元
1-Radix Asparagi f rom yunnan p rovince
2-Radix Asparagi f rom bingch uan cou nty in yunnan province
3-Radix Asparagi f rom n eijiang city in Sichuan province
4-Radix Asparagi f rom yuning city in guangxi p rovince
5-Radix Asparagi f rom xishui ci ty in guizhou province
Standard article
S3-Sarsasapogenin
图 1　不同产地天冬的菝葜皂苷元薄层色谱图
Fig. 1　 TLC chromatograms of Sarsasapogenin in Radix Asparagi
from different producing areas
2. 4　薄层扫描条件　扫描波长为 443 nm ,单波长
反射法锯齿扫描 , SX= 3。测定供试品吸收度积分值
与对照品吸收度积分值。
2. 5标准曲线的制备　精密吸取对照品溶液 1. 0, 3.
0, 5. 0, 7. 0, 9. 0μL,分别点于同一硅胶 G薄层板
上 ,按上述薄层色谱条件展开显色 ,薄层扫描条件测
定各斑点峰面积积分值。 以菝葜皂苷元对照品点样
量 (μg)为横坐标 ,斑点峰面积积分值为纵坐标 ,绘
制标准曲线 ,计算回归方程 ,所得数据见表 1、图 2。
表 1　标准曲线测定结果
Tab. 1　 Standard curve resul ts
对照品质量 /μg 0. 05 0. 15 0. 25 0. 35 0. 45
吸收度 A 6684. 42 13305. 6417978. 4823655. 3730169. 90
图 2　菝葜皂苷元薄层扫描回归曲线图
Fig. 2　 Linear regression of sarsasapogenin
—35—现代中药研究与实践 2004年第 18卷第 4期Resear ch and Practice of Chinese Medicines
　　计算得菝葜皂苷元薄层扫描回归方程式 Y= 57
321X+ 4 028. 6, r= 0. 998 5。菝葜皂苷元在 0. 5～
4. 5μg范围内 ,点样量与峰面积积分值呈良好的线
性关系 ,因标准曲线为一不经过原点的直线 ,故用外
标两点法计算所测样品含量。
2. 6　重复性实验　按照 2. 2项下方法平行制备供
试品溶液 5份 ,测定其吸收度 ,结果表明该方法的重
复性良好。测定结果见表 2
表 2　重复性试验结果
Tab. 2　 Repeatabili ty results
样品编号 1 2 3 4 5 R SD /%
样品含量 /% 0. 095 0. 097 0. 093 0. 092 0. 096 2. 2
2. 7　稳定性试验　取供试品溶液 5μL,点样展开 ,
显色后立即进行扫描测定 ,然后每隔 10 min扫描一
次 ,持续 1 h,结果见表 3。
表 3　稳定性试验结果
Tab. 3　 Stabi lity results
测定时
间 min 0 10 20 30 40 50 60
测定值 A31985. 831526. 431006. 530277. 125343. 819733. 917518. 3
　　试验结果表明 ,该显色剂在 30 min内 RSD=
2. 4% ,n= 4。 该显色剂虽稳定时间较短 ,但灵敏度
高 ,故选用此显色剂。
2. 8　精密度试验　定量吸取同一样品供试液 5
μL,共 6份 ,分别点于同一薄层板上 ,展开 ,显色后
扫描测定 ,结果表明方法的精密度较好 ,结果见表
4。
表 4　精密度试验结果
Tab. 4　 Precision results
点样编号 1 2 3 4 5 6 RSD
测定值 A 28063. 7 28055. 6 28058. 0 28088. 9 28084. 4 28109. 7 1. 6%
2. 9　加样回收率试验　取已知含量的天冬药材 1.
0 g ,精密称定 ,精密加入一定量菝葜皂苷元对照品
溶液 ,按 2. 2项下方法制备样品溶液 ,依法测定 ,计
算回收率 ,结果见表 5。
表 5　回收率试验结果 (n= 5)
Tab. 5　Recovery results
样品含量
/mg
标准品加入量
/mg
测定结果
/mg
回收率
/%
平均回收率 /% R SD /%
0. 468 0. 450 0. 907 97. 56
0. 459 0. 450 0. 879 93. 33
0. 476 0. 450 0. 915 97. 56 97. 4 2. 7
0. 479 0. 450 0. 932 100. 67
0. 480 0. 450 0. 921 98. 00
2. 10　样品的含量测定　精密吸取各样品液 5μL,
对照品溶液 1μL、 9μL,交叉点于同一硅胶 G板上 ,
展开 ,显色 ,扫描测定 ,计算各样品中菝葜皂苷元的
含量 ,含量均以干燥品计 ,共测定了 6个不同产地
(生长期均为 2～ 3年 )和 8个不同生育期、不同药用
部位样品中菝葜皂苷元的含量 ,结果见表 6、表 7。
表 6　不同产地样品含量测定结果 (n= 3)
Tab. 6　 Determination results of Sarsasapogenin of dif ferent
producing areas
样号 产地 品种 含量
/%
RSD
/%
1 四川内江 A . cochinchinensis( Lour. )M err. 0. 047 0. 12
2 云南 A .myriacanthus Wang et S. C. Chen 0. 093 0. 26
3 广西玉林 A . cochinchinensis ( Lour. ) Merr. 0. 011 0. 14
4 贵州都匀 A . cochinchinensis ( Lour. ) Merr. 0. 0096 0. 12
5 贵州习水 A . cochinchinensis ( Lour. ) Merr. 0. 0025 0. 23
6 云南大理宾川 A. cochinchinensis ( Lour. ) Merr. 几乎不含
　　由表 6可得出 ,不同产地的天冬药材中菝葜皂
苷元的含量差别较大。
表 7　不同生育期、不同药用部位样品含量测定结果 (n= 3)
Tab. 7　 Determination results of Sarsasapogenin of different growth
and different using parts
样号 产地 生育期 药用部位 含量
/%
RSD
/%
7 四川内江郭北镇 半年生 去皮药材 0. 0092 0. 54
8 四川内江郭北镇 一年生 去皮药材 0. 012 0. 49
9 四川内江郭北镇 一年半生 去皮药材 0. 028 1. 41
10 四川内江双凤镇 一年半生 去皮药材 0. 029 0. 21
11 四川内江郭北镇 一年半生 带皮药材 0. 025 1. 55
12 四川内江双凤镇 一年半生 带皮药材 0. 030 0. 27
13 四川内江郭北镇 一年半生 天冬皮 0. 095 0. 70
14 四川内江双凤镇 一年半生 天冬皮 0. 11 0. 26
　　注:以上四川内江产天冬均为药典收载品种 A . coch inchinensis
( Lou r. ) Merr.郭北镇、双凤镇为“四川内江天冬规范化种植示范区”
试验基地所在地。
由表 7可得出 ,天冬中菝葜皂苷元的含量随生
育期增长而增大。天冬皮中菝葜皂苷元含量较高。
3　讨论
3. 1　对于天冬中菝葜皂苷元含量测定方法 ,曾有资
料作过报道 [3 ]。但经笔者反复实验 ,该文所报道的展
开系统正己烷 -丙酮 ( 4∶ 1)难以将菝葜皂苷元黄色
斑点与 β -谷甾醇红紫色斑点完全分开 ,容易影响测
定结果。因此经笔者反复尝试和方法学考察 ,确定采
用上述报道方法 ,经氯仿 -正己烷 -乙酸乙酯 ( 10∶ 10
∶ 0. 5)三次展开后 ,菝葜皂苷元与 β -谷甾醇斑点分
离度达到 3 cm以上 ,该法简便、准确、灵敏 ,重现性
良好 ,可用于天冬质量控制及 GAP研究。
3. 2　以菝葜皂苷元为对照品 ,采用薄层扫描法测定
了 6个不同产地和 8个不同生育期、不同药用部位
—36— 现代中药研究与实践 2004年第 18卷第 4期Resear ch and Practice o f Chinese Medicines
药材样品中菝葜皂苷元的含量 ,方法准确、简便、灵
敏、重现性良好。 虽然天冬中菝葜皂苷元的含量不
高 ,但在至今天冬尚无单一指标性成分的含量测定
标准的情况下 ,该法可作为天冬及其制剂的质量控
制手段之一。
3. 3　样品溶液制备时 ,笔者对天冬的提取方法进行
过考察 ,对先提取皂苷再水解成皂苷元与先水解后
再提取皂苷元 ,采用超声提取和索氏提取器回流提
取分别进行了对比研究 ,结果表明:采用先水解后再
用索氏提取器回流提取皂苷元杂质干扰少 ,样品提
取完全 ,故确定采用 2. 2样品制备方法。
3. 4　在天冬样品液薄层层析板上 ,在菝葜皂苷元淡
黄色斑点上方有一红紫色斑点 ,经验证该点为 β-谷
甾醇斑点。此二点极难分离 ,故须多次展开。
3. 5　天冬药材的传统加工工艺是将生品蒸或煮后
剥去外皮 ,晒干得药材。但由表 7可看出天冬皮中菝
葜皂苷元的含量较高 ,笔者还曾对天冬皮中多糖和
总皂苷含量进行过测定 ,结果表明天冬皮中总多糖
和总皂苷的含量亦较高 (该内容将另文报道 )。由此 ,
笔者认为天冬传统加工工艺的合理性有待于进一步
验证。
参考文献
[ 1 ]　中华人民共和国卫生部药典委员会 .中国药典 .一部 [S ] .北
京:人民卫生出版社 , 2000. 42.
[ 2 ]　天冬类专题研究 .常用中药材品种整理与质量研究 (第四册 )
[M ] , 1995. 216.
[3 ]　余伯阳 ,罗向东 ,徐颖 .天冬类药材中洋菝葜皂苷元的含量测定
[ J ].中药材 , 2001, 24( 8): 577.
[ 4 ]　姚念环 ,孔令义 .天门冬属植物中的甾体皂苷及药理作用 [ J ].
国外医药 (植物药分册 ) , 2001, 16( 6): 247.
[ 5]　程志红 ,余伯阳 .天门冬属植物化学成分及生物活性研究进展
[ J ].天然产物研究与开发 , 2000, 11( 2): 67.
[ 6 ]　马长华 ,钱　捷 .知母中菝葜皂苷元含量测定 [ J ] .中成药 ,
2000, 22( 11): 804.
[7 ]　任爱农 ,季锡忠 ,农湘鸿 .知母中菝葜皂苷元含量测定方法探讨
[ J ].中成药 , 2000, 22( 2): 171.
[8 ]　张国刚 ,徐绥绪 ,周　密 .双波长薄层扫描法测定抗病毒口服液
中菝葜皂苷元的含量 [ J] .中草药 , 1994, 25(2) : 69, 90.
[9 ]　闫雪生 ,于宗渊 ,周向华 .薄层扫描法测定酸枣仁颗粒中菝葜皂
苷元的含量 [ J] .中草药 , 1997, 28( 5): 271.
收稿日期: 2004-02-20
不同采收期三花龙胆中龙胆苦苷含量测定
林政义1 ,姚丽娜 1 ,闫广慧 2
( 1.哈药集团制药六厂 ,黑龙江 哈尔滨 150056; 2.哈药集团世一堂制药厂 ,黑龙江 哈尔滨 150056)
　　摘要: 目的　研究不同时节采收的三花龙胆中龙胆苦苷的含量。 方法　采用 HPLC法 ,以甲醇 -水 ( 60∶
40)为流动相 , 274 nm为检测波长。结果　三花龙胆中龙胆苦苷的含量随采收月份不同而各异 ,地下部分根中
龙胆苦苷的含量以新生根含量较高 ,药用价值最大。结论　采收期为春季的三花龙胆中龙胆苦苷含量最高。
　　关键词:三花龙胆 ;龙胆苦苷 ; HPLC;含量测定
　　中图分类号: R284. 1　　　　文献标识码: A　　　　文章编号: 1004-2199( 2004) 04-0037-02
Determination of Gentiopicroside inGent iana triflora Pall.
Collected from Different Seasons
LIN Zheng-yi
1 , YAO Lina
1 , YAN Guang-hui
2
( 1. Ha rbin Rha rmaceutical Group Six th Pharm Facto ry, Ha rbin 150056, China;
2. Harbin Rharmaceutical Group Shiyi tang Pharm Factory )
Abstract: Objective　 To study the contents o f Gentiopio roside in Gentiana t ri flo ra Pall. collected f rom
di fferent seasons. Method　 The method of HPLC was used wi th the methanol-w ater( 60∶ 40) as mobi le
pha se and wi th 274 nm as the checking waveleng th. Results　 The contants of g entiopicroside varied
—37—现代中药研究与实践 2004年第 18卷第 4期Resear ch and Practice of Chinese Medicines