全 文 ：·生物技术· 北方园艺２０１６（０２）：８８～９１
第一作者简介：赵恺（１９８１－），男，博士，讲师，研究方向为果树遗传
育种。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｋｐｃ４＠１６３．ｃｏｍ．
基金项目：国家自然科学基金资助项目（３１１７１９２７）；松原市科技发
展计划资助项目（２０１４０２）。
收稿日期：２０１５－０９－３０
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１６０２０２４
“平邑甜茶”组织培养微嫁接技术研究
赵 　 恺１，２，张 志 宏２，李 井 会１，李 大 兴１，吕 　 萌１
（１．松原职业技术学院 农业工程系，吉林 松原１３８００５；２．沈阳农业大学 园艺学院，辽宁 沈阳１１０８６６）
　　摘　要：以苹果“平邑甜茶”（Ｍａｌｕｓ　ｈｕｐｅｈｅｎｓｉｓ　ｖａｒ．ｐｉｎｇｙｉｅｎｓｉｓ）为微嫁接砧木，“寒富”（Ｍａｌｕｓ　ｄｏ－
ｍｅｓｔｉｃａｃｖ．‘Ｈａｎｆｕ’）为接穗，研究了附加不同浓度６－ＢＡ的培养基、接穗不同生理状态、接穗具有
叶片数量、不同接穗／砧木组合对嫁接成活率和嫁接口愈合的影响。结果表明：最适于微嫁接
的培养基为 ＭＳ＋ＩＡＡ　０．３ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ，选用继代培养４０ｄ的接穗和砧木，并且接穗部
分具有２片真叶时的嫁接成活率最高；用“平邑甜茶”作为砧木的嫁接成活率高（８１．３％），嫁接口
愈合最好。该研究为下一步的转基因ｓＲＮＡ信号在砧木与接穗间的传递运输研究奠定基础。
关键词：微嫁接；苹果；“平邑甜茶”；ｓＲＮＡ传递
中图分类号：Ｓ　５７１．１０３．５２　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１６）０２－００８８－０４
　　组织培养微嫁接技术创立于１９７２年［１］，是一种组织
培养与嫁接相结合、将不同品种的砧木与接穗组培苗在
　　　　
组织培养条件下进行嫁接的技术。由于其具有所需试
材少、节约土地、研究方便等优点，已被广泛地应用于多
种果树的研究与生产。如桃属和柑橘属不同种间的嫁
接亲和性的早期鉴定［２］，杏、柠檬的嫁接苗分类［３］。同时
微嫁接技术还被广泛应用于植株脱毒［４］、接口部位组织
结构与生理研究、果树病毒的检测以及工厂化苗木快
繁等［５］

。
参考文献
［１］　ＨＥＲＭＡＮ　Ｒ．Ｇｒｅｅｎ　ｒｏｏｆｓ　ｉｎ　Ｇｅｒｍａｎｙ：ｙｅｓｔｅｒｄａｙ，ｔｏｄａｙ　ａｎｄ　ｔｏｍｏｒｒｏｗ
［Ｃ］．Ｐｒｏｃ　１ｓｔ　Ｎｏｒｔｈ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｇｒｅｅｎ　Ｒｏｏｆ　Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ：Ｇｒｅｅｎｉｎｇ　Ｒｏｏｆｔｏｐｓ　ｆｏｒ
Ｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅ　Ｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓ，Ｃｈｉｃａｇｏ，２００３：４１－４５．
［２］　ＷＩＬＫＩＮＳＯＮ　Ｓ　Ｊ，ＲＥＥＤ　Ｒ．Ｇｒｅｅｎ　ｒｏｏｆ　ｒｅｔｒｏｆｉｔ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｅｎｔｒａｌ
ｂｕｓｉｎｅｓｓ　ｄｉｓｔｒｉｃｔ［Ｊ］．Ｐｒｏｐｅｒｔｙ　Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，２００９，２７（５）：２８４－３０１．
［３］　邵天然，李超骕，曾辉．城市屋顶绿化资源潜力评估及绿化策略分
析：以深圳市福田中心区为例［Ｊ］．生态学报，２０１２，３２（８）：４８５２－４８６０．
［４］　陈华敏，钟愈平，黄和平．基于ＡＨＰ和“３Ｒ”原则的节能建筑评价指
标体系的构建［Ｊ］．生态经济，２００９（５）：９２－９５．
［５］　上海市质量技术监督局．上海市屋顶绿化技术规范［Ｓ］．２００８．
［６］　ＶＩＲＧＩＮＩＡ　Ｓ，ＤＵＮＮＥＴＴ　Ｎ，ＨＡＬＬＡＭ　Ａ．Ｇｒｅｅｎ　ｒｏｏｆｓ－ｇｅｔｔｉｎｇ
ｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅ　ｄｒａｉｎａｇｅ　ｏｆｆ　ｔｈｅ　ｇｒｏｕｎｄ［Ｃ］．Ｔｈｅ　６ｔｈ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ　ｏｆ
Ｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅ，Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　ａｎｄ　Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ　ｉｎ　Ｕｒｂａｎ　Ｗａｔｅｒ　Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，２００７：
１１－１８．　
Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　ａｎ　Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　Ｉｎｄｅｘ　Ｓｙｓｔｅｍ　ｆｏｒ　Ｒｏｏｆ　Ｇｒｅｅｎｉｎｇ　Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔａｂｉｌｉｔｙ
ＷＡＮＧ　Ｘｉｎｊｕｎ１，ＸＩ　Ｇｕｏ’ａｎ２，ＣＨＥＮ　Ｄａｎ３，ＷＡＮＧ　Ｙａｎ１，ＷＡＮＧ　Ｊｉｋａｉ　１
（１．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ａｒｔ　ａｎｄ　Ｄｅｓｉｇｎ，Ｃｈａｎｇｚｈｏｕ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈａｎｇｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｓｕ　２１３０２２；２．Ｓｈｅｎｇ　Ｄｏｎｇ　Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ　Ｘｉｎｘｉｎｇ　Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ
Ｃｏｍｐａｎｙ　ｏｆ　Ｓｈｅｎｇｌｉ　Ｏｉｌｆｉｅｌｄ，Ｄｏｎｇｙｉｎｇ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ　２５７０００；３．Ｃｈａｎｇｚｈｏｕ　Ｌａｎｄｓｃａｐｉｎｇ　Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ　Ｂｕｒｅａｕ，Ｃｈａｎｇｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｓｕ　２１３００２）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｔ　ｉｓ　ｇｒｅａｔ　ｎｅｃｅｓｓｉｔｙ　ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ａ　ｇｒｅｅｎ　ｒｏｏｆ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ａｓｐｅｃｔｓ　ｏｆ　ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎ
ａｎｄ　ｓａｆｅｔｙ　ｂｅｆｏｒｅ　ｐｌａｎｔｉｎｇ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｔｏｐ　ｏｆ　ａｎ　ｅｘｉｓｔｉｎｇ　ｂｕｉｌｄｉｎｇ．Ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ，ｒｅｓｅａｒｃｈｅｄ　ｏｎ　ａ　ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　ｇｅｎｅｒａｌ
ｆａｃｔｏｒｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｔｈｅ　ａｔｔｒｉｂｕｔｅｓ　ｏｆ　ａ　ｂｕｉｌｄｉｎｇ，ｔｈｅ　ａｔｔｒｉｂｕｔｅｓ　ｏｆ　ｉｔｓ　ｒｏｏｆｔｏｐ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｌｏｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｔ，ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｎｉｎｅ　ｉｎｄｅｘｅｓ　ｆｏｒ
ｒｏｏｆ　ｇｒｅｅｎｉｎｇ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔａｂｉｌｉｔｙ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ｎａｍｅｌｙ　ｔｈｅ　ａｇｅ　ｏｆ　ａ　ｂｕｉｌｄｉｎｇ，ｔｈｅ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｔｈｅ　ｒｏｏｆ　ｄｅｓｉｇｎ　ｃａｐａｃｉｔｙ，ｔｈｅ　ｈｅｉｇｈｔ，
ｔｈｅ　ｂｅｌｏｎｇｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｏｏｆ，ｔｈｅ　ａｒｅａ　ｏｆ　ｃｏｖｅｒｅｄ　ｒｏｏｆ，ｔｈｅ　ａｒｅａ　ｆｏｒ　ｏｔｈｅｒ　ｐｕｒｐｏｓｅｓ，ｔｈｅ　ｓｌｏｐｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｏｏｆ，ｔｈｅ　ｌｏｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｂｕｉｌｄｉｎｇ．Ａｌ　ｔｈｅ　ｉｎｄｅｘｅｓ　ｗｅｒｅ　ｌｉｍｉｔｅｄ　ｉｎｄｅｘｅｓ　ｅｘｃｅｐｔ　ｔｈｅ　ｌｏｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｕｉｌｄｉｎｇ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｂｅｌｏｎｇｉｎｇ　ｏｆ　ｉｔｓ　ｒｏｏｆ．Ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ
ａｌｓｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｔｈｅ　ｗｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ｉｎｄｅｘ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ＡＨＰ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ｔｈｕｓ　ｌａｉｄ　ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ａｄｖａｎｃｅ　ｉｎ　ｒｏｏｆ
ｇｒｅｅｎｉｎｇ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｒｏｏｆ　ｇｒｅｅｎｉｎｇ；ｃｏｎｓｔｒｕｃｔａｂｉｌｉｔｙ；ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ；ｉｎｄｅｘ　ｓｙｓｔｅｍ
８８
北方园艺２０１６（０２）：８８～９１ ·生物技术·
　　“平邑甜茶”是湖北海棠（Ｍａｌｕｓ　ｈｕｐｅｈｅｎｓｉｓ　Ｒｅｈｄ．）
中的天然三倍体，染色体数为２ｎ＝３ｘ＝５４［６］，无融合生
殖能力很强，实生后代能保持母本性状，是重要的矮化
砧木资源。但近来的研究结果表明，“平邑甜茶”有性后
代的无融合生殖能力大大退化［７］，因此组织培养就成了
快速繁殖的基础手段。
现以苹果“平邑甜茶”为微嫁接砧木、“寒富”为接
穗，建立了适宜的微嫁接体系，为下一步的转基因ｓＲＮＡ
信号在砧木与接穗间的传递运输研究奠定基础。
１　材料与方法
１．１　试验材料
供试材料为苹果“平邑甜菜”和“寒富”。
作为接穗使用的“寒富”组培苗在继代培养基（ＭＳ＋
６－ＢＡ　０．３ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ　０．２ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ　０．１ｍｇ／Ｌ）中培
养，作为砧木使用的“平邑甜茶”组培苗在培养基（ＭＳ＋
６－ＢＡ　１ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ　０．１ｍｇ／Ｌ）中培养，
４０ｄ后嫁接并进行后续研究。
１．２　试验方法
嫁接参照程玉琴等［６］的方法并略做改进。在无菌
条件下，砧木剪去顶端和茎段（长约１．５ｃｍ），为避免培养
过程中芽增殖，用刀片沿砧木上部纵切（深约为０．５ｃｍ），
将茎段基部侧芽切去。选择长约２ｃｍ，粗度与砧木相
近的接穗，保留２片叶，并将其基部削成楔形（长约
０．５ｃｍ）。将接穗插入砧木中，用铝铂纸将接口部位绑
紧，接入培养基中进行培养。培养条件：温度恒定在
（２４±ｌ）℃，光照强度２　０００ｌｘ，每日光照时数１６ｈ。嫁接
４５ｄ于实验台上将铝箔纸取下，嫁接口处完全愈合并且
接穗部分生活旺盛的视为成活苗，并统计嫁接成活率。
每处理２５株，重复３次。
１．２．１　附加不同浓度６－ＢＡ的培养基对嫁接成活率的
影响　以苹果“平邑甜茶”为砧木，“寒富”为接穗进行嫁
接。将嫁接后的组培苗接种于附加不同浓度（０．０、０．５、
１．０、１．５、２．０ｍｇ／Ｌ）６－ＢＡ的培养基中，４５ｄ后调查各处
理条件下接口愈合情况和成活率。
１．２．２　接穗不同生理状态对嫁接成活率的影响　以继
代４０ｄ“平邑甜茶”为砧木，分别选取继代培养３０、４０、
５０ｄ的“寒富”组培苗为接穗进行嫁接。将嫁接后的组培
苗接种于苹果继代培养基（ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ
０．３ｍｇ／Ｌ）中，４５ｄ后调查各处理条件下接口愈合情况
和成活率。
１．２．３　接穗叶片数量对嫁接成活率的影响　以继代
４０ｄ“平邑甜茶”为砧木，继代培养４０ｄ的“寒富”组培苗
为接穗进行嫁接，接穗顶端分别具有０、２、４片真叶，嫁接
完成后接种于苹果继代培养基（ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋
ＩＡＡ　０．３ｍｇ／Ｌ），４５ｄ后调查接穗叶片数量对嫁接苗成
活率的影响。
１．２．４　不同接穗／砧木组合对嫁接成活率的影响　设
置“寒富”／“平邑甜茶”、“平邑甜茶”／“寒富”为不同的接
穗／砧木组合，以ＭＳ＋ＩＡＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ
为筛选培养基，外植体处理时，接穗保留２片真叶进行
微嫁接试验，培养４５ｄ后统计成活情况。
１．３　项目测定
嫁接成活率（％）＝成活个数／嫁接总数×１００。
１．４　数据分析
试验数据采用ＳＰＳＳ　１７．０软件进行统计分析。
２　结果与分析
２．１　不同６－ＢＡ浓度对嫁接成活率的影响
由表１可知，不同浓度６－ＢＡ对嫁接成活率有显著
的影响。在未添加６－ＢＡ的 ＭＳ培养基中，接穗部分不
能正常生长，将绑缚材料铝箔纸解除后，嫁接口愈合情
况较差，嫁接成活率很低（１３．３％）。但６－ＢＡ的浓度过
高（２．０ｍｇ／Ｌ以上），砧木基部丛生且生长旺盛，，嫁接成
活率急剧下降（４９．３％），砧木与接穗产生营养竞争，接口
因此愈合不是很好。而浓度过低时（０．５ｍｇ／Ｌ），嫁接成
活率也较低（４３．３％）；只有适宜浓度的６－ＢＡ成活率较
高，因此试验最终确定６－ＢＡ的最佳使用浓度为１．０ｍｇ／Ｌ
（成活率８５．３％），此时嫁接苗生长情况最好（图１）。
表１　不同浓度６－ＢＡ对微嫁接成活率的影响
　　Ｔａｂｌｅ　１ Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　６－ＢＡ　ｏｎ
ｔｈｅ　ｇｒａｆｔｉｎｇ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ
培养基
Ｍｅｄｉａ
６－ＢＡ浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　６－ＢＡ／（ｍｇ·Ｌ－１）
成活率
Ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ／％
ＭＳ＋ＩＡＡ　０．５ｍｇ／Ｌ
０．０
０．５
１．０
２．０
１３．３ｃ
４３．３ｂ
８５．３ａ
４９．３ｂ
　　注：多重比较采用邓肯式新复极差法，小写字母表示差异达０．０５显著水平（以
下分析相同）。
Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｃｏｍｐａｒｅ　ｕｓｅｓ　Ｄｕｎｃａｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｌｏｗｅｒｃａｓｅ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｓｈｏｗ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　ａｔ　５％（ｔｈｅ　ｆｏｌｏｗｉｎｇ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｕｓｅ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｍｅｔｈｏｄ）．
２．２　接穗不同生理状态对嫁接成活率的影响
用做砧木的“平邑甜茶”组培苗在继代３０～４０ｄ时，
植株矮小不适于嫁接，此时适当提高６－ＢＡ浓度，组培苗
高达到２．５～３．５ｃｍ，径粗０．２～０．３ｃｍ，适宜作为砧木
使用，此时试管苗嫁接易成活。
嫁接４０ｄ后将绑缚材料（铝箔纸）去除，统计嫁接
成活率。由表２可知，接穗继代培养时间过短（３０ｄ），
茎细节间较短导致操作困难，嫁接后叶片易萎蔫，成活
率低（１０．７％）；接穗继代培养时间过长（５０ｄ），叶片呈
深绿色，组培苗老化，嫁接成活率也较低（４５．０％）。接
穗继代培养时间为４０ｄ时，叶片颜色新鲜、茎粗度适
合，便于操作，成活率最高（７３．３％），且嫁接口愈合最
好（图２）。
９８
·生物技术· 北方园艺２０１６（０２）：８８～９１
图１　嫁接苗在培养基ＭＳ＋ＩＡＡ　０．３ｍｇ／Ｌ＋
６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ中的生长情况
Ｆｉｇ．１　Ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｇｒａｆｔｉｎｇ　ｐｌａｎｔ　ｉｎ　ＭＳ＋
ＩＡＡ　０．３ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ
表２　不同接穗苗龄对微嫁接成活率的影响
　　Ｔａｂｌｅ　２　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ａｇｅ　ｏｆ　ｓｃｉｏｎｓ　ｕｓｉｎｇ　ｆｏｒ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　ａｐｐｌｅ
培养基
Ｍｅｄｉａ
嫁接天数
Ｄａｙｓ　ｏｆ　ｇｒａｆｔｉｎｇ／ｄ
成活率
Ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ／％
ＭＳ＋ＩＡＡ　０．５ｍｇ／Ｌ
３０
４０
５０
１０．７ｃ
７３．３ａ
４５．０ｂ
图２　嫁接４０ｄ后接口生长愈合情况
Ｆｉｇ．２　Ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｇｒａｆｔｉｎｇ　ｐｌａｎｔ　４０ｄｙａｓ　ａｆｔｅｒ　ｇｒａｆｔｅｄ
２．３　接穗叶片数量对嫁接成活率的影响
不同接穗所具有叶片数量对嫁接成活率影响显著。
由表３可知，叶片少不利于嫁接苗成活，以带２～４片叶
片效果较好，嫁接成活率最高（达到８０％以上），但微嫁
接试验操作极复杂，接穗叶片过多，嫁接时难度大，不便
于操作，因此一般只保留２片叶。
２．４　不同接穗／砧木组合对嫁接成活率的影响
由表４可知，无论哪一种组合，具有２片真叶的接
穗成活率都高于不具叶片的成活率，二者差异显著，说
明叶片在制造养分的同时，促进嫁接接口的愈合；而不
具真叶的接穗，在生长过程中砧木提供的营养一部分提
供给基部的叶芽，因此生长初期接口的愈合较差，导致
成活率较低。
另外“平邑甜茶”其本身在生产中作为砧木使用，吸
收营养能力强，因此做为微嫁接苗砧木，嫁接成活率更
高。砧木根系吸收养分的能力一般要比栽培苹果高，但
该试验未进行砧木带根方面的研究。
表３　不同接穗叶片数量对嫁接成活率的影响
　　Ｔａｂｌｅ　３　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　ｓｃｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｇｒａｆｔｉｎｇ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ
接穗留叶数量
Ｌｅａｖｅｓ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｓｃｉｏｎ／个
成活率
Ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ／％
０
２
４
１３．３ｃ
８１．３ａ
８５．３ａ
　　表４　不同接穗／砧木组合及叶片数量对
嫁接成活率的影响
　　Ｔａｂｌｅ　４　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｓｃｉｏｎ／ｒｏｏｔｓｔｏｃｋ　ａｎｄ
ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　ｓｃｉｏｎ　ｏｎ　ｓｕｒｖｉｖａｌ ％
接穗砧木组合
Ｓｃｉｏｎ　ａｎｄ
ｒｏｏｔｓｔｏｃｋｓ
接穗带叶成活
Ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｏｆ　ｓｃｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｌｅａｖｅｓ
接穗不带叶成活率
Ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｏｆ　ｓｃｉｏｎ　ｗｉｔｈｏｕｔ　ｌｅａｖｅｓ
“寒富”／“平邑甜茶” ８１．３ａ ３４．６ａ
“平邑甜茶”／“寒富” ６５．３ｂ ２４．０ｂ
３　讨论
目前，国内多数的嫁接绑缚材料为锡箔纸或铝箔
纸。而国外的一些研究则使用硅胶管作绑缚材料，优点
是能及时观察到接口的愈合程度，及时排除死亡的植
株，且操作便利［８］，但如嫁接口愈伤组织过于膨大则不
利于成活，因此绑缚材料也会不断更新。进行组培苗嫁
接试验时叶片容易失水萎蔫，不利于嫁接的成活，所以
在嫁接时应尽量提高速度［９］。
该试验结果表明，接穗继代培养３０ｄ左右，组培苗
虽生长旺盛，但叶小而鲜嫩，茎细，植株不高不适于嫁
接。当提高细胞分裂素类浓度（６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ），此时
苗高２．５～３．５ｃｍ左右，径粗０．２～０．３ｃｍ，顶端有明显
的新梢，嫁接易成活。
在２００６年召开的国家苹果育种研讨会上，山东农
业大学束怀瑞院士建议并提出“利用中国特色的资源，
重视远缘杂交，生物技术与常规技术结合，转基因育种
仍然不能放松”。可见利用转基因技术将在苹果育种方
面的应会有大幅度的提升。但是，转基因食品的安全性
一直备受关注。ＲＮＡｉ是沉默目的基因的有效手段。所
产生的ｓＲＮＡ（ｓｍａｌ　ＲＮＡ）能进行细胞－细胞的短距离传
递，也能经由韧皮部进行长距离运输，长距离运输也被
称为系统性沉默。由于木本植物木质化的影响，果树生
物技术取得的成果不多，而其中嫁接技术则是最有可能
获得成功的技术之一［１０］。借助于嫁接传递转基因砧木
中的ｓＲＮＡ已有报道［１１－１２］。基因沉默信号如果通过了
嫁接口，这样信号分子就能影响到接穗部分，此方向的
０９
北方园艺２０１６（０２）：８８～９１ ·生物技术·
研究已有报道。如周瑞金等［１３］研究结果表明，外源ｎｐｔ
Ⅱ基因只在转化植株体内表达，不通过嫁接在接穗和砧
木间进行传导；ＦＬＡＣＨＯＷＳＫＹ等［１４］将内源ＡＮＳ和外
源ＧＵＳ基因构建成ＲＮＡｉ表达载体，分别转入苹果品种
“Ｐｉｎｏｖａ”并以此为砧木进行器内嫁接，结果发现砧木部
分的基因沉默信号ｓＲＮＡ经由韧皮部传递到接穗部分
的传递运输方式不同，ＧＵＳ基因属于系统性的长距离运
输，而ＡＮＳ基因则是区域性短距离运输。
以上结果似乎表明木质化决定嫁接信号沉默，但是
这也为下游调控砧木中的特定基因而不影响非转基因接
穗提供了可能性。如ＢＵＬＬＥＹ等［１５］将反义ＭｐＧＡ２０ｏｘ１
基因导入砧木“Ｍ２６”，结果发现不仅转基因系植株高度
减少了近５０％，而且用转基因系作为砧木嫁接时，接穗
部位也有明显的矮化特性。在后续试验中，课题组通过
ＲＮＡｉ技术下游调控苹果ＧＡ２０－ｏｘ基因获得了具有明显
矮化效应的转基因系，进行组培苗嫁研究时发现接穗部
分矮化特征明显（如节间数量和长度，叶片颜色等），目
前正在进行田间苗的嫁接。
果树的优势在于可以选用嫁接的繁殖方式，若能通
过试验的方法来探讨目的基因在砧木和接穗之间的传
递性，如某些基因的ｓＲＮＡ能从砧木传向接穗，也就意
味着抗性选择标记仍然留在砧木部分，而不影响果树的
可食用部分，这样则有可能解决食品安全性的难题，为
今后的转基因育种开阔更广泛的空间，显然基于组织培
养微嫁接技术将成为这方面研究的重点课题。
参考文献
［１］　ＭＵＲＡＳＨＩＧＥ　Ｔ，ＢＩＴＴＥＲＳ　Ｗ，ＲＡＮＧＡＮ　Ｔ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｏｆ　ｓｈｏｏｔ
ａｐｅｘ　ｇｒａｆｔｉｎｇ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｔｏｗａｒｄｓ　ｒｅｃｏｖｅｒｉｎｇ　ｖｉｒｕｓ－ｆｒｅｅ　ｃｉｔｒｕｓ　ｃｌｏｎｅｓ［Ｊ］．
Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９７２（２）：１９－２５．
［２］　ＮＡＶＡＲＲＯ　Ｌ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｈｏｏｔ－ｔｉｐ　ｇｒａｆｔｉｎｇｉｎ　ｖｉｔｒｏｔｏ　ｗｏｏｄｙ　ｓｐｅｃｉｅｓ
［Ｊ］．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ　ｏｎ　Ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ　Ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｗｏｏｄｙ　Ｓｐｅｃｉｅｓ，
１９８７，２２７：４３－５６．
［３］　ＪＯＮＡＲＤ　Ｒ，ＬＵＫＭＡＮ　Ｄ，ＳＣＨＡＬＬ　Ｆ，ｅｔ　ａｌ．Ｅａｒｌｙ　ｔｅｓｔｉｎｇ　ｏｆ　ｇｒａｆｔ　ｉｎ－
ｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｉｅｓ　ｉｎ　ａｐｒｉｃｏｔ　ａｎｄ　ｌｅｍｏｎ　ｔｒｅｅｓ　ｕｓｉｎｇｉｎ　ｖｉｔｒｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｔｉａ
Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｅ，１９９０，４３：１１７－１２８．
［４］　ＳＩＮＧＨ　Ｂ，ＳＨＡＲＭＡ　Ｓ，ＲＡＮＩ　Ｇ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｎｖｉｔｒｏ　ｍｉｃｒｏｇｒａｆｔｉｎｇ　ｆｏｒ　ｐｒｏｄｕｃ－
ｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｉｎｄｉａｎ　ｃｉｔｒｕｓ　ｒｉｎｇｓｐｏｔ　ｖｉｒｕｓ（ＩＣＲＳＶ）－ｆｒｅｅ　ｐｌａｎｔｓ　ｏｆ　ｋｉｎｎｏｗ　ｍａｎｄａｒｉｎ
（Ｃｉｔｒｕｓ　ｎｏｂｉｌｉｓ　Ｌｏｕｒ×Ｃ．ｄｅｌｉｃｉｏｓａＴｅｎｏｒａ）［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｒｅｐｏｒｔｓ，
２００８（２）：１３７－１４３．
［５］　ＫＡＤＡＭ　Ｊ，ＫＡＲＡＬＥ　Ａ，ＧＡＲＡＤ　Ｂ，ｅｔ　ａｌ．Ｍｉｃｒｏｇｒａｆｔｉｎｇ　ｉｎ　ｗｏｏｄ
ａｐｐｌｅ，ｒｅｃｅｎｔ　ｔｒｅｎｄｓ　ｉｎ　ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ　ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｎａｔｉｏｎａｌ　ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ　ｏｎ　ｂｉｏ－
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ　ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ　ｃｒｏｐｓ［Ｊ］．Ｎｅｗ
Ｉｎｄｉａ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ａｇｅｎｃｙ，２００７（２）：３７１－３７３．
［６］　程玉琴，韩振海，许雪峰，等．试管微嫁接早期鉴定小金海棠与苹果
品种的亲和性［Ｊ］．农业生物技术学报，２００３（１１）：４７２－４７６．
［７］　王颖，商月惠，王玉霞，等．平邑甜茶与扎矮山定子杂交后代的胚胎
发育特征研究［Ｊ］．园艺学报，２００８，３５：１０９３－１１００．
［８］　ＫＡＮＥＨＩＲＡ　Ａ，ＹＡＭＡＤＡ　Ｋ，ＩＷＡＹＡ　Ｔ，ｅｔ　ａｌ．Ａｐｐｌｅ　ｐｈｌｏｅｍ　ｃｅｌｓ
ｃｏｎｔａｉｎ　ｓｏｍｅ　ｍＲＮＡｓ　ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｄ　ｏｖｅｒ　ｌｏｎｇ　ｄｉｓｔａｎｃｅｓ［Ｊ］．Ｔｒｅｅ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ
Ｇｅｎｏｍｅｓ，２０１０（６）：６３５－６４２．
［９］　陈蕾．梨组织培养及器内嫁接技术的研究［Ｄ］．延吉：延边大
学，２００８．
［１０］ＨＡＲＯＬＤＳＥＮ　Ｖ，ＰＡＵＬＩＮＯ　Ｇ，ＣＨＩ－ＨＡＭ　Ｃ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　ａ－
ｄｏｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ　ｃｏｕｌｄ　ｉｍｐｒｏｖｅ　Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ　ｆｒｕｉｔ　ａｎｄ　ｎｕｔ
ｃｒｏｐｓ［Ｊ］．Ｃａｌｉｆ　Ａｇｒ，２０１２，６６（２）：６２－６９．
［１１］ＳＡＮＯ　Ｔ，ＩＳＯＮＯ　Ｓ，ＭＡＴＳＵＫＩ　Ｋ，ｅｔ　ａｌ．Ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｔｓ
ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ｒｏｌｅ　ａｓ　ａ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｂｏｔｔｌｅｎｅｃｋ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｈａｐｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｐｐｌｅ　ｆｒｕｉｔ　ｃｒｉｎｋｌｅ
ｖｉｒｏｉｄ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ａｐｐｌｅ　ａｎｄ　ｈｏｐ　ｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．Ｖｉｒｕｓ　Ｇｅｎｅｓ，２００８，３７３：２９８－
３０３．　
［１２］ＨＡＲＯＬＤＳＥＮ　Ｖ，ＳＺＣＺＥＲＢＡ　Ｍ，ＡＫＴＡＳ　Ｈ．Ｍｏｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ
ｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄｓ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｗｉｔｈｉｎ　ｇｒａｆｔｅｄ　ｒｏｏｔｓｔｏｃｋｓ　ｆｏｒ　ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　ｉｍｐｒｏｖｅ－
ｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｆｒｏｎｔ　Ｐｌａｎｔ　Ｓｃｉ，２０１２（３）：３９．
［１３］周瑞金，杜国强，师校欣．标记基因ｎｐｔⅡ在转基因苹果嫁接砧穗间无
相互传导［Ｊ］．园艺学报，２００６（３３）：１３２９－１３３０．
［１４］ＦＬＡＣＨＯＷＳＫＹ　Ｈ，ＴＲＡＮＫＥＲ　Ｃ，ＳＺＡＮＫＯＷＳＫＩ　Ｉ，ｅｔ　ａｌ．ＲＮＡ－ｍｅｄｉａｔｅｄ
ｇｅｎｅ　ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ　ｓｉｇｎａｌｓ　ａｒｅ　ｎｏｔ　ｇｒａｆｔ　ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｒｏｏｔｓｔｏｃｋ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｓｃｉｏｎ
ｉｎ　ｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅ－ｇｒｏｗｎ　ａｐｐｌｅ　ｐｌａｎｔｓ　Ｍａｌｕｓ　ｓｐ［Ｊ］．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１２（１３）：９９９２－１０００９．
［１５］ＢＵＬＬＥＹ　Ｓ，ＷＩＬＳＯＮ　Ｆ，ＨＥＤＤＥＮ　Ｐ，ｅｔ　ａｌ．Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇｉｂｂｅｒｅｌｉｎ
ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｇｒａｆｔｅｄ　ａｐｐｌｅ　ｓｃｉｏｎ　ａｌｏｗｓ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　ｔｒｅｅ　ｈｅｉｇｈｔ　ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ
ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｏｏｔｓｔｏｃｋ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｊｏｕｒｎａｌ，２００５（３）：２１５－２２３．
Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｎｉｎ　ｖｉｔｒｏ　Ｍｉｃｒｏｇｒａｆｔｉｎｇ　ｏｆ　Ｍａｌｕｓ　ｈｕｐｅｈｅｎｓｉｓ　ｖａｒ．Ｐｉｎｇｙｉｅｎｓｉｓ
ＺＨＡＯ　Ｋａｉ　１，２，ＺＨＡＮＧ　Ｚｈｉｈｏｎｇ２，ＬＩ　Ｊｉｎｇｈｕｉ　１，ＬＩ　Ｄａｘｉｎｇ１，ＬＹＵ　Ｍｅｎｇ１
（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｏｎｇｙｕａｎ　Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ　Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ　Ｃｏｌｅｇｅ，Ｓｏｎｇｙｕａｎ，Ｊｉｌｉｎ　１３８００５；２．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，
Ｓｈｅｎｙａｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ，Ｌｉａｏｎｉｎｇ　１１０８６６）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ‘Ｐｉｎｇｙｉｔｉａｎｃｈａ’（Ｍａｌｕｓ　ｈｕｐｅｈｅｎｓｉｓ　ｖａｒ．ｐｉｎｇｙｉｅｎｓｉｓ）ａｓ　ｒｏｏｔｓｔｏｃｋ　ａｎｄ‘Ｈａｎｆｕ’（Ｍａｌｕｓ　ｄｏｍｅｓｔｉｃａ　ｃｖ．
‘Ｈａｎｆｕ’）ａｓ　ｓｃｉｏｎ，ｔｈｅ　ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　６－ＢＡ，ａｇｅｓ　ｏｆ　ｓｃｉｏｎ，ｌｅａｖｅｓ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｓｃｉｏｎ，ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｓｃｉｏｎ／
ｒｏｏｔｓｔｏｃｋ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｇｒａｆｔｉｎｇ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　ｒｅｓｅａｒｃｈｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ＭＳ＋ＩＡＡ　０．３ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ，
ｒｏｏｔｓｔｏｃｋｓ　ａｎｄ　ｓｃｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｆｏｒ　４０ｄａｙｓ，ｗｉｔｈ　２ｌｅａｖｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｓｃｉｏｎ　ａｎｄ‘Ｐｉｎｇｙｉｔｉａｎｃｈａ’ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｔｈｅ
ｒｏｏｔｓｔｏｃｋ，ｔｈｅ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｇｒａｆｔｉｎｇ　ｗａｓ　８１．３％．Ｔｈｏｓｅ　ｗｅｒｅ　ｔｈｅ　ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎｇ　ｓＲＮＡ　ｆｒｏｍ　ｒｏｏｔｓｔｏｃｋｓ
ｔｏ　ｓｃｉｏｎｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｍｉｃｒｏｇｒａｆｔ；ａｐｐｌｅ；Ｍａｌｕｓ　ｈｕｐｅｈｅｎｓｉｓ　ｖａｒ．ｐｉｎｇｙｉｅｎｓｉｓ；ｓＲＮＡ　ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ
１９