全 文 ：天然产物研究与开发 NatProdResDev2008, 20:28-32, 51
文章编号:1001-6880(2008)01-0028-06
　
　
　收稿日期:2007-07-06　　　接受日期:2007-08-16
　基金项目:国家自然科学基金项目(30470038);教育部新世纪优
秀人才支持计划项目(NCET-05-0134)
＊通讯作者 Tel:86-10-62731199;E-mail:lgzhou@cau.edu.cn
TLC-生物自显影 -MTT法检测滇重楼内生真菌中抗菌活性成分
赵江林 ,徐利剑 ,黄永富 ,周立刚＊
中国农业大学农学与生物技术学院 , 北京 100094
摘　要:本文采用 TLC-生物自显影 -MTT法检测了 3株滇重楼内生真菌即芬芳镰刀菌 、季氏毕赤氏酵母和烟曲
霉正丁醇提取物对大肠杆菌 、枯草芽孢杆菌 、白色念珠菌和稻瘟病菌的抗菌活性成分 ,以芬芳镰刀菌和季氏毕
赤氏酵母菌液提取物中含有的抗菌活性成分为多。同时与打孔药剂扩散法的检测结果进行了比较 , 为进一步
快速分离内生真菌中抗菌活性成分提供了依据。
关键词:薄层层析;噻唑蓝;生物自显影;内生真菌;抗菌活性成分检测
中图分类号:Q939.96;S482.2 文献标识码:A
DetectionofAntimicrobialComponentsfromExtractsoftheEndophytic
FungiAssociatedwithParispolyphylavar.yunnanensis
UsingTLC-Bioautography-MTTAssay
ZHAOJiang-lin, XULi-jian, HUANGYong-fu, ZHOULi-gang＊
CollegeofAgronomyandBiotechnology, ChinaAgriculturalUniversity, Beijing100094 , China
Abstract:ATLC-bioautography-MTTassaywasusedtodetectantimicrobialcomponentsofn-butanolextractsobtained
fromthreeendophyticfungiFusariumredolens, PichiaguiliermondiiandAspergilusfumigatusisolatedfromtherhizomes
ofParispolyphylavar.yunnanensisagainsttwobacteriaEscherichiacoliandBacilussubtilis, aswelastwofungiCandi-
daalbicansandMagnaporthegrisea.ThereweremoreantimicrobialcomponentsdetectedinthefiltrateextractsofF.red-
olensandP.guiliermondiithaninothers.Theresultsofantimicrobialactivitywerealsocomparedwiththosedetectedby
agarwelldiffusionassay.Itisveryhelpfulforfurtherseparatingantimicrobialcomponentsfromtheendophyticfungi.
Keywords:Thin-layerchromatography(TLC);3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-dipenylterazoliumbromide;(MTT);
bioautography;endophyticfungi;antimicrobialcomponentdetection
　　植物内生真菌是指那些在其生活史的一定阶段或
全部阶段生活在健康植物组织或器官内部的并不引起
宿主植物出现明显病害症状的真菌[ 1, 2] 。植物内生真
菌是一个巨大的活性物质资源库 ,目前从植物内生真
菌中探寻新型活性物质日益成为研究热点 ,对于植物
内生真菌的开发 ,从中寻找新的抗菌活性物质无论是
在医药工业 、农业还是在食品工业等方面都有着巨大
的潜力[ 3-5] 。植物内生真菌普遍存在着抗菌活性 ,近年
来人们先后从植物内生真菌中发现了多种抗菌活性物
质 ,主要有生物碱 、萜类 、甾体类 、黄酮类 、肽类 、脂肪族
类 、酚类和苯丙素类等[ 3-6] 。
薄层层析 -生物自显影法 (TLC-Bioautography)
是近年来应用的一种将薄层层析和生物活性测定相
结合的抗菌活性物质检测方法 [ 7-9] 。利用薄层色谱
的分离能力将少量混合物(如植物提取物 、微生物
代谢产物等)在薄层板上通过展开剂展开后 ,使薄
层板与含有供试微生物的培养基相接触 ,在一定条
件下培养一段时间后 ,非活性部位会被生长出的供
试微生物所覆盖而呈现背景色;活性部位由于抗菌
成分的存在 ,指示微生物的生长受到抑制而呈现抑
菌斑点 ,这样就可以初步了解混合物抗菌活性成分
的相对极性 ,为活性单体化合物的分离提供依据。
采用 TLC-生物自显影法检测植物内生真菌提取物
中抗菌活性成分鲜见报道[ 7] ,本文在 TLC-生物自显
影的基础上结合细胞活力 MTT测定方法 ,对 3种滇
重楼内生真菌菌液和菌丝正丁醇提取物中抗菌活性
成分进行了检测 ,为进一步分离纯化内生真菌中抗
菌活性成分提供了依据。
1　材料与方法
1.1　试剂与仪器
噻唑蓝 [ 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-di-
phenyltetrazoliumbromide, MTT]购自美国 Amresco
公司 ,用 pH7.2、0.2mol/L的磷酸缓冲液(PBS)配
成 0.5mg/mL的溶液;98%硫酸链霉素(Streptomy-
cinsulfate)购自石家庄曙光制药厂 ,用无菌水配成
0.2mg/mL的溶液;两性霉素 B(AmphotericinB)购
自美国 Amresco公司 ,用无菌水配成 0.2 mg/mL的
溶液;95%多菌灵(Carbendazim)购自江苏吴县市农
药厂 ,用无菌水配成 0.1 mg/mL的溶液。以上溶液
均于 4 ℃避光保存 ,其它试剂均为国产分析纯。
光照培养箱(HPG-280B, 哈尔滨),摇床(GFL-
1083, Japan),旋转蒸发仪(RE50, Yamato, Japan),紫
外分光光度计(TU-1810,普析通用 ,北京), GF254nm
硅胶板(青岛海洋化工集团)等。
1.2　内生真菌粗提物的制备
内生真菌为本实验室从滇重楼(Parispolyphyla
var.yunnanensis)的根状茎中分离到 , 芬芳镰刀菌
(Fusarium redolens, 缩 写 Fur, GenBank登录号
EF495234)、季氏毕赤氏酵母(Pichiaguiliermondi,
缩写 Pig, GenBank登录号 EF495244)和烟曲霉(As-
pergilusfumigatus, 缩 写 Asf, GenBank登 录 号
EF495242)。从试管斜面上挑取少许菌丝到马铃薯
葡萄糖琼脂培养基(Potatodextroseagar, PDA)平板
上活化 3d,然后将活化的菌丝接种于 1000mL的三
角瓶中 ,每瓶装 250 mL马铃薯葡萄糖 (Potatodex-
trose, PD)液体培养基 ,每种真菌培养 2瓶 ,共 500
mL培养液 ,在 25 ℃, 150 rpm下培养 7 d后收获 。
将获得的培养液真空抽滤 ,收集滤液和菌丝 ,滤液用
等体积的正丁醇萃取 3次;菌丝经冰冻干燥后研磨 ,
然后用正丁醇超声提取 3次 ,每次 1 h。正丁醇萃取
液和提取液分别在 50℃下减压浓缩 ,分别获得菌液
的正丁醇萃取部分和菌丝的正丁醇提取物样品 。
1.3　供试菌及其培养
供试细菌有:大肠杆菌(Escherichiacoli, G-)和
枯草芽孢杆菌(Bacilussubtilis, G+);供试真菌有:
白色念珠菌(Candidaalbicans)和稻瘟病菌(Magna-
porthegrisea)。以上菌株均由中国农业大学植物病
理学系提供 。
细菌的活化和培养采用 LB培养基。挑取单菌
落接到 25mLLB液体培养基中培养 24 h(250rpm,
37 ℃),然后将菌液稀释为 108 CFU/mL(0.5麦氏
标准),待溶化后的 LB培养基(琼脂含量为 0.5%)
温度降至 40 ～ 50 ℃之间 ,取 1 mL菌液(108 CFU/
mL)加入到 100 mL培养基(细菌最终浓度为 106
CFU/mL)中 ,迅速摇匀 ,待用。
白色念珠菌的活化和培养采用 PDA培养基。
挑取单菌落接入到 25 mLPD液体培养基中培养 48
h(250rpm, 28 ℃),用 PD培养基稀释至 108 CFU/
mL,待溶化后的 PD培养基(琼脂含量为 0.5%)温
度降至 40 ～ 50 ℃之间 ,取 1 mL校正好浓度的菌液
加入到 100 mL培养基(白色念珠菌的终浓度为 106
CFU/mL)中 ,迅速振荡均匀 ,待用。
稻瘟病菌的活化和培养采用燕麦番茄汁
(OTA)培养基。将稻瘟病菌接种在 OTA平板上活
化培养 , 25 ℃,培养 72 h后待出现灰白色菌落时即
进行继代培养 , 培养 48 h后进行机械刺激诱导产
孢 ,置于干燥光照条件 , 25℃下培养 ,培养 48h后用
无菌水洗下稻瘟菌孢子 ,这样得到的孢子量大且其
生长活力好。然后配制孢子悬液 ,利用血球记数板
测定孢子浓度 ,将孢子浓度调制为 108个 /mL。待
溶化后的 OTA培养基(琼脂含量 0.5%)温度降至
40 ～ 50℃之间 ,取上述配制好的孢子悬液 1 mL加
入到 100 mL培养基中(OT培养基中孢子的浓度约
为 106个 /mL),迅速振荡均匀 ,待用。
1.4　内生真菌提取物的薄层层析
分别称取内生真菌菌液和菌丝提取物 20.0 mg
于 1.5 mLEppendorf管中 ,加入甲醇 1 mL,超声波
助溶 40 min。采用微量进样器点样 , 点样量为 5
μL,点样直径小于 2 mm。为了获得最佳的层析条
件 ,先将层析后的薄层板置于紫外灯下观察 ,然后用
5%硫酸-乙醇喷雾 ,于 100 ℃下加热显色 5 min。优
化后的薄层层析步骤如下:预先加入展开剂(氯仿∶甲
醇 =10∶1, v/v)以饱和层析缸 ,静置 5 min后放入硅
胶板进行薄层层析 。当展开剂展开至离硅胶板上端
1cm处时 ,迅速取出硅胶板 ,及时用铅笔标记溶剂前
沿 ,室温下挥干溶剂 ,然后供生物自显影检测抗菌活
性 ,每个处理 3个重复。如果在后续的生物自显影
中供试菌为细菌 ,在薄层板的最右侧原点处点 5 μL
浓度为 0.2 mg/mL的硫酸链霉素作为阳性对照
(CK+);如果供试菌为白色念珠菌 ,在薄层板的最
右侧原点处点 5 μL浓度为 0.2 mg/mL的两性霉素
B作为 CK+;如果供试菌为稻瘟病菌 ,在薄层板的
29Vol.20 赵江林等:TLC-生物自显影-MTT法检测滇重楼内生真菌中抗菌活性成分
最右侧原点处点 5 μL浓度为 0.1mg/mL的多菌灵
作为 CK+。
1.5　供试菌的生物自显影
对于供试细菌和白色念珠菌 ,在无菌条件下 ,用
喷样器将制备好的菌悬液均匀喷洒到层析后的硅胶
板上。待培养基在硅胶板上冷却后 ,将硅胶板置于
培养皿中于 4℃的冰箱中放置 4h,以利于抗菌成分
的扩散 。然后将其置于 37 ℃下保湿培养 , 12 h后 ,
取出硅胶板 , 往上面喷加外源显色剂噻唑蓝
(MTT),约 10 min后 ,即可观察实验结果。有抗菌
活性成分处 ,供试菌由于受到抑菌成分的抑制而出
现抑菌斑;无抗菌活性成分处 ,供试菌正常生长 ,通
过 MTT显色后而出现背景色蓝色 ,从而与抑菌斑区
分开。
对于稻瘟病菌 ,在无菌条件下 ,用喷样器将制备
好的孢子悬液均匀喷洒到硅胶板上 ,待培养基在硅
胶板上冷却成形后 ,将硅胶板置于培养皿中 ,在 25
℃下保湿培养 ,光周期为 12 h光照 /12 h黑暗 ,培养
4 d后 ,即可观察实验结果 。有抗菌活性成分处 ,供
试菌由于受到抑菌成分的抑制而出现抑菌斑;无抗
菌活性成分处 ,供试菌菌丝生长正常 。
1.6　打孔药剂扩散法检测内生真菌提取物的抗菌
活性
打孔药剂扩散法参考 Moody等方法 [ 10] 。将提
取物溶于二甲基亚砜(DMSO)配成 50 mg/mL浓度
的溶液。将硫酸链霉素(Streptomycinsulfate)配成
0.2mg/mL的浓度 ,作为阳性对照。首先将水琼脂
(琼脂含量 3%)倒入培养皿内 ,每皿 15 mL,放置待
其冷却凝固。取 2mL培养好的菌液校正浓度到 0.5
麦氏标准(约 108 CFU/mL)。待融化后的 LB培养
基(琼脂含量 2%)温度降至 30 ～ 40 ℃之间 ,取 1
mL校正好浓度的菌液加入到 100 mL培养基(培养
基中菌的浓度为 106 CFU/mL),迅速摇匀 ,倒入培养
皿中 ,每皿 20mL。待培养基凝固后 ,打孔器(Ф=5
mm)在培养基上打孔 ,每皿 7个孔 ,每孔加 50 μL药
液。 4℃下放置 12 h,然后在 37℃培养 24 h后 ,观
察结果 ,测量抑菌圈直径 。实验设空白对照(H2O)、
溶剂对照(DMSO)、阳性对照(硫酸链霉素 0.2 mg/
mL)、样品处理(内生真菌提取物),每个处理均设 3
个重复。
2　结果与分析
2.1　TLC-生物自显影法进行抗细菌成分的检测
采用 TLC-生物自显影法初步检测了 3株滇重
楼内生真菌 (芬芳镰刀菌 、季氏毕赤氏酵母 、烟曲
霉)菌液和菌丝正丁醇提取物对 2种供试细菌(大
肠杆菌和枯草芽孢杆菌)的抑制活性(见图 1),菌液
提取物的抑制活性要强于菌丝提取物。对芬芳镰刀
菌提取物(FurM和 FurF),抗细菌活性成分极性中
等 ,菌丝和菌液中均存在 Rf值为 0.70 ～ 0.75的抗
菌成分 ,菌液中还有 Rf值为 0.10 ～ 0.30的抗菌成
分;对季氏毕赤氏酵母提取物(PigM和 PigF),有多
种抗菌成分的存在 , 且仅存在于菌液中 , Rf值为
0.10 ～ 0.15、0.60 ～ 0.70和 0.82;对烟曲霉提取物
图 1　TLC-生物自显影法检测内生真菌提取物中的抗细菌成分
Fig.1　AntibacterialcomponentscreeningoftheendophyticfungalextractsbyTLC-bioautographyassay
A.5%H2SO4-乙醇处理加热显色的 TLC结果;B.样品对大肠杆菌的抑菌效果;C.样品对枯草芽孢杆菌的抑菌效果;FurM和 FurF分别
为芬芳镰刀菌的菌丝和菌液提取物;PigM和 PigF分别为季氏毕赤氏酵母的菌体和菌液提取物;AsfM和 AsfF分别为烟曲霉菌丝和菌液
提取物。阳性对照(CK+)为硫酸链霉素。
A.TLCresultsoftheextractsaftersprayingwith5% H2SO4 -ethanolandthenheatingat100℃;B.AntibacterialactivityoftheextractsonE.co-
li;C.AntibacterialactivityoftheextractsonB.subtilis;FurMandFurFwerethemycelialandfiltrateextractsofF.redolensrespectively;PigTand
PigFwerethethalodicandfiltrateextractsofP.guiliermondirespectively;AsfMandAsfFwerethemycelialandfiltrateextractsofA.fumigatus
respectively;Positivecontrol(CK+)wasstreptomycinsulfate.
30 天然产物研究与开发　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　Vol.20
(AsfM和 AsfF),菌丝提取物中存在 Rf值为 0.70的
抗大肠杆菌成分 ,但对枯草芽孢杆菌没有抑制活性 ,
在菌液中存在 Rf值为 0.00、0.65 ～ 0.75的成分 ,对
大肠杆菌和枯草芽孢杆菌均有抑制活性。以上提取
物抗细菌活性成分的 Rf值见表 1。
2.2　TLC-生物自显影法进行抗真菌成分的检测
3株滇重楼内生真菌菌液和菌丝正丁醇提取物
对 2种供试真菌(白色念珠菌和稻瘟病菌)的抑制
活性结果见图 2和表 1。对芬芳镰刀菌提取物
(FurM和 FurF),菌丝和菌液中均存在 Rf值为 0.75
的抗菌成分 ,菌液中还有 Rf值为 0.25 ～ 0.30的抗
菌成分;对季氏毕赤氏酵母提取物(PigM和 PigF),
仅菌液中存在 Rf值 0.65 ～ 0.82的抗菌成分 ,对白
色念珠菌和稻瘟病菌均有活性;对烟曲霉提取物
(AsfM和 AsfF),菌丝和菌液提取物中均未检测到
抗真菌活性成分。
图 2　TLC-生物自显影法检测内生真菌提取物中的抗真菌成分
Fig.2　AntifungalcomponentscreeningoftheendophyticfungalextractsbyTLC-bioautographyassay
A.5%H2SO4-乙醇处理加热显色的 TLC结果;B.样品对白色念珠菌的抑菌效果;C.样品对稻瘟病菌的抑菌效果;FurM和 FurF分别
为芬芳镰刀菌的菌丝和菌液提取物;PigM和 PigF分别为季氏毕赤氏酵母的菌体和菌液提取物;AsfM和 AsfF分别为烟曲霉菌丝和菌
液提取物。对白色念珠菌的活性检测阳性对照(CK+)为两性霉素-B;对稻瘟菌的活性检测阳性对照(CK+)为多菌灵。
A.TLCresultsoftheextractsaftersprayingwith5%H2SO4 -ethanolandthenheatingat100℃;B.AntifungalactivityoftheextractsonC.albi-
cans;C.antifungalactivityoftheextractsonM.grisea;FurMandFurFwerethemycelialandfiltrateextractsofF.redolensrespectively;PigTand
PigFwerethethallodicandfiltrateextractsofP.guiliermondirespectively;AsfMandAsfFwerethemycelialandfiltrateextractsofA.fumigatus
respectively.Positivecontrols(CK+)wasamphotericinBonC.albicansactivity, andcarbendazimonM.griseaactivity.
表 1　薄层层析-生物自显影法检测内生真菌提取物中抗菌活性成分
Table1　ScreeningofantimicrobialcomponentsoftheendophyticfungalextractsbyTLC-bioautographyassay
真菌提取物
Fungalextract
大肠杆菌
E.coli
枯草芽孢杆菌
B.subtilis
白色念珠菌
C.albicans
稻瘟病菌
M.grisea
芬芳镰刀菌菌丝提取物
F.redolensmycelialextract 0.70～ 0.75 + 0.70 ～ 0.75 + 0.75 + 0.75 ++
芬芳镰刀菌菌液提取物
F.redolensfiltrateextract
0.70～ 0.75 +
0.10～ 0.30 ++
0.70 ～ 0.75 +
0.10 ～ 0.30 ++
0.75 +
0.25～ 0.30 ++
0.75 ++
0.25～ 0.30 ++
季氏毕赤氏酵母菌体提取物
P.guiliermondithalodicextract - - - -
季氏毕赤氏酵母菌液提取物
P.guiliermondifiltrateextract
0.82 ++
0.60～ 0.70 ++
0.82 +0.60 ～ 0.70 ++
0.10 ～ 0.15 + 0.65～ 0.82 ++ 0.65～ 0.82 ++
烟曲霉菌丝提取物
A.fumigatusmycelialextract 0.70 ++ - - -
烟曲霉菌液提取物
A.fumigatusfiltrateextract 0.65～ 0.75 ++0.00 + 0.65～ 0.75 ++0.00 + - -
阳性对照 CK+ ++ ++ ++ ++
　　注:表中数据为抑菌斑点的 Rf值;“ -”:无抑菌斑出现;“ +”:抑菌斑直径为 0～ 5mm;“ ++”:抑菌斑直径为 5～ 13mm。Note:ThedadainthetablewereRfvaluesofinhibitorycompounds;-, noinhibition;+, diameterofinhibitoryareawasmorethan0mmandlessthan
5mm;++, diameterofinhibitoryareawasmorethan5mmandlessorequal13mm.
31Vol.20 赵江林等:TLC-生物自显影-MTT法检测滇重楼内生真菌中抗菌活性成分
2.3　TLC-生物自显影法与打孔药剂扩散法的比较
所有内生真菌提取物对 3种供试菌均有不同程
度的抑制活性(表 2),且菌液提取物的抗菌活性要
明显强于菌丝(菌体)提取物 ,这与采用 TLC-生物自
显影法检测菌液提取物中含有多个抗菌活性成分是
相对应的。一些在 TLC-生物自显影法中检测不到
抗菌活性成分的提取物(如季氏毕赤氏酵母提取
物 、烟曲霉提取物)在打孔药剂扩散法中能检测到
抗菌活性 ,推测在 TLC-生物自显影检测中单一的活
性成分浓度较低 ,或者是在打孔药剂扩散法中多个
抗菌活性成分联合起作用 。
表 2　打孔药剂扩散法检测内生真菌提取物的抗菌活性
Table2　Antimicrobialactivitydetectionoftheendophyticfun-
galextractsbyagarweldifusionassay
真菌提取物
Fungalextract
大肠杆菌
E.coli
枯草芽
孢杆菌
B.subtilis
白色
念珠菌
C.albicans
芬芳镰刀菌菌丝提取物
F.redolensmycelialextract 0.60±0.10 0.60±0.07 0.72±0.05
芬芳镰刀菌菌液提取物
F.redolensfiltrateextract 3.00±0.06 3.03±0.04 2.40±0.08
季氏毕赤氏酵母菌体提取物
P.guiliermondithalodicextract0.77±0.24 1.73±0.18 0.56±0.19
季氏毕赤氏酵母菌液提取物
P.guiliermondiifiltrateextract1.08±0.08 2.52±0.04 2.12±0.05
烟曲霉菌丝提取物
A.fumigatusmycelialextract 0.83±0.11 1.13±0.04 0.68±0.06
烟曲霉菌液提取物
A.fumigatusfiltrateextract 1.58±0.08 2.92±0.05 1.15±0.08
阳性对照 CK+ 2.17±0.07 1.63±0.06 1.56±0.09
　　注:表中数据为抑菌圈直径(cm);每孔中内生真菌提取物量为
2.5mg,针对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的阳性对照(硫酸链霉素)为
每孔 10 μg,针对白色念珠菌的阳性对照(两性霉素 B)为每孔 10
μg。
Note:Thedadainthetablewerethediameters(cm)oftheinhibito-
ryzones.Thequantityofthefungalextractineachwelwas2.5mg.The
positivecontrolforE.coliandB.subtiliswasstreptomycinsulfateatits
quantityof10μgforeachwel, andthepositivecontrolforC.albicans
wasamphotericinBatitsquantityof10μgforeachwel.
3　讨论
为了快速检测内生真菌中的抗菌活性成分 ,准
确地筛选到目标菌株 ,加速新药研发的进程 ,有必要
采用快速 、灵敏 、微量的适合于植物内生真菌抗菌活
性成分的检测方法。目前常用的抗菌活性成分检测
方法主要有:药剂扩散法(如打孔药剂扩散法 、滤纸
片法)、生长速率法(如菌丝平板生长速率法 、液体
悬浮培养法 、多孔板比浊度法)、孢子萌发法 、通过
检测细胞酶活性的分光光度法等 [ 11-14] ,这些方法各
具优点 ,同时也存在着一定的局限性 ,如操作过程繁
琐 、检测周期长 、耗费高 、需要特定的仪器设备等。
而 TLC-生物自显影法在一定程度上可以弥补以上
不足 ,其操作简单 、经济 、灵敏度高 ,是一种快速检测
抗菌活性成分的方法[ 7-9] 。 1983年 Mosmann首创了
噻唑蓝(MTT)比色法来间接反应细胞的活力水平 ,
其基本原理是活细胞中的脱氢酶将淡黄色的 MTT
还原成蓝紫色的化合物 Formazane[ 14] 。本文在 TLC-
生物自显影的基础上结合细胞活力 MTT测定方法 ,
检测了 3株滇重楼内生真菌芬芳镰刀菌 、季氏毕赤
氏酵母和烟曲霉正丁醇提取物对大肠杆菌 、枯草芽
孢杆菌 、白色念珠菌和稻瘟病菌的抗菌活性成分 ,能
快速 、有效地检测提取物的抗菌活性成分。为了防
止漏筛 ,较全面地了解和评估抗菌成分 ,本研究还考
虑到供试菌的代表性和广谱性 。另外 ,通过 TLC-生
物自显影法可以大致了解到所检测内生真菌提取物
抗菌活性成分的极性大小 ,这为下一步抗菌活性成
分的分离工作提供了依据 。当前 ,天然活性物质的
研究已从单一的 “化合物 ”模式转向 “化合物 +生物
活性 ”模式 [ 15] , TLC-生物自显影 -MTT法将成为一种
快速 、有效检测内生真菌以及其它生物体抗菌活性
成分的方法。
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(下转第 51页)
32 天然产物研究与开发　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　Vol.20
对太少 ,使得模型存在过拟合现象。逐步回归表明 ,
7变量模型的复相关系数 、标准偏差和交互检验的
复相关系数值均达到较好的值 ,说明模型的稳定性
和预测能力更高。由于 H-MEDV矢量是一个二维
拓扑描述子 ,暂时还不能区分顺反异构和旋光异构
的化合物结构 ,这些问题还有待进一步探讨 。本文
首次将 H-MEDV用于天然产物挥发性组分的 QSRR
研究并取得良好的结果 ,这对于天然产物中挥发性
有机化合物的 QSRR研究具有一定的参考价值 。
参考文献
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