全 文 ：书2 统计学分析
所有数据采用 SPSS13. 0 统计软件分析，计量资料用均
数 ±标准差(x ± s)表示，并采用 t检验，P ＜ 0. 05 为差异有
统计学意义。
3 结果
当归多糖含药血清对小鼠腹腔 Mφ释放 M － CSF的影
响见表 1。与空白对照组比较:与当归多糖一定剂量组含
药血清共同培养的小鼠腹腔 Mφ释放 M － CSF的水平明显
升高(P ＜ 0. 05 或 P ＜ 0. 01) ，且具有浓度差异性(P ＜
0. 01)。
表 1 当归多糖含药血清对小鼠腹腔 Mφ释放
M － CSF的影响(mg /kg，ng /L，x ± s)
组别 灌胃剂量 血清 M － CSF水平
生理盐水 — 84. 57 ± 9. 51
当归 300 113. 36 ± 14. 97992)
多糖
150 102. 07 ± 12. 9491)
75 93. 37 ± 13. 8299a)
注:与空白对照组比较:1)P ＜ 0. 05，2)P ＜ 0. 01;与大剂量组
比较:a)P ＜ 0. 01.
3 讨论
血清药理研究方法是近年发展起来的广泛用于中药
药理研究的新技术，其基本实验路线是采用中药干预实验
动物后，制备实验动物含药血清，进而检测含药血清的药
理效应。该技术因其兼有体内和体外研究方法的优点，广
受中药药理研究者推崇。祖国医药及现代研究结果显示，
当归补血活血，具有抗炎、免疫调节、干预造血和改善血管
功能的作用。在炎症调节等过程中，Mφ 所分泌的炎性细
胞因子发挥着极其重要的作用。实验研究显示，许多中药
多糖通过影响 Mφ 释放细胞因子的水平，进而影响 Mφ 的
免疫功能，是其发挥免疫干预作用的机制之一［5］。本文通
过制备当归多糖含药血清，观察其对 Mφ 释放 M － CSF 的
影响，旨在探索当归临床抗炎免疫作用的物质基础和疗效
机制。
本实验结果显示:与当归多糖一定剂量组含药血清共
同培养的小鼠腹腔 Mφ释放 M － CSF的水平明显升高(P ＜
0. 05 或 P ＜ 0. 01) ，且具有浓度差异性(P ＜ 0. 01)。提示当
归调节免疫功能的机制可能与其多糖组份干预 Mφ释放 M
－ CSF有关。值得注意的是，我们在前期研究中发现，当归
多糖灌服对实验小鼠血清 M － CSF 具有显著抑制效应(另
文发表) ，与本实验结果中当归多糖含药血清促进小鼠腹
腔 Mφ释放 M － CSF的结果相反，提示当归多糖在体内干
预 M － CSF水平的因素还有 Mφ以外的途径。有关当归多
糖对 M － CSF水平的影响在体内实验和血清药理实验中存
在差异的机制有待进一步研究。
参考文献
［1］ 国家药典委员会 . 中华人民共和国药典［S］. 北京:中国医
药科技出版社，201O:170．
［2］ 聂小燕，陈青，李祝 . 当归多糖药理活性研究新进展［J］. 现
代农业科学，2008，学 15(10) :36 － 38.
［3］ 韩洁，岳文鹏，何光志，等 . 八种中药多糖对小鼠巨噬细胞释
放细胞因子的影响［J］. 现代免疫学，2011，31(6) :495 － 498.
［4］ 吴强，胡宝坤 . 当归多糖提取工艺的优化研究［J］. 山东农业
科学，2010，12:81 － 84.
［5］ 薛那，沈国顺，赵福，等 . 中药免疫调节作用研究进展［J］. 中
国畜牧兽医，2008，35:84 － 86.
* 基金项目: 贵州省特色重点学科，黔教高发［2011］07 号，贵州省创新人才基地，黔人领发［2011］1 号，973 计划前期
研究专项( No. 2012CB722601) 资助。
* 通讯作者: 曹佩雪 Tel: ( 0851) 3807713，E － mail: snowcpx@ 126. com
修回日期: 2013 － 02 － 25
黔产艾纳香黄酮类化学成分的研究*
傅 建1，2，梁光义1，2，李 霞3，胡占兴2，徐必学2，曹佩雪* 2
( 1. 贵阳中医学院，贵州贵阳 550002; 2. 贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室，贵州贵阳 550002;
3. 贵州宏宇药业有限公司，贵州贵阳 550018)
摘要:目的:研究少数民族用药艾纳香的化学成分。方法:采用硅胶柱色谱、薄层色谱、Sephadex LH － 20 柱色谱等方
法分离纯化化合物，然后根据理化性质和波谱数据鉴定单体化合物的结构，并对分离得到的黄酮类化合物进行了抗菌和
抗肿瘤活性的筛选。结果:从艾纳香中分离得到 6 个黄酮化合物，分别鉴定为艾纳香素( 1) 、二氢斛皮素 － 4 －甲醚( 2) 、
3，5，34 －四羟基 － 7 －甲氧基黄酮( 3) 、3，5，3 －三羟基 － 7，4 －二甲氧基黄酮( 4) 、5，7，3，5 －四羟基二氢黄酮( 5) 、3，
5，3 －三羟基 － 7，4 －二甲氧基二氢黄酮( 6) 。结论:化合物 3 对人肺癌细胞株 A549 细胞有一定的抑制作用，化合物 4、6
·9·
第 35 卷 第 3 期
2013 年 5 月
贵阳中医学院学报
JGCTCM
No. 3 Vol. 35
May 2013
书有微弱的抑制作用; 化合物 1、2、3、4 对人白血病细胞株 K562 细胞有微弱的抑制作用; 以上化合物对金黄色葡萄球菌和大
肠埃希氏菌均无抑制作用。
关键词:艾纳香; 化学成分; 黄酮; 抗菌; 抗肿瘤
Doi: 10. 3969 / j. issn. 1002 － 1108. 2013. 03. 0005
中图分类号:Ｒ961． 1 文献标识码:B 文章编号:1002 － 1108( 2013) 03 － 0009 － 04
艾纳香(Blumea balsamifera DC) ，又称之为冰片艾、大
风艾、大艾、大毛艾、家风艾等，为菊科艾纳香属多年生木
质草本植物，根、叶、枝均可入药。主要分布于印度、缅甸、
中国南部东南亚地区等地［1，2］。我国主要分布在贵州、云
南、广东、广西等少数湿热地区［3］。性温，味辛、苦。其叶
子有用做调味香料，又当茶治疗咳嗽等，少数民族用艾纳
香的根和叶治疗关节炎、风湿和妇科疾病等［3 － 5］。是我国
传统的中药材及天然冰片的原料，以艾纳香为主要原料药
的制剂有咽立爽、妇血康颗粒、复血康冲剂等。为了进一
步研究黔产艾纳香中药效物质基础，为其进一步深入开发
提供科学依据，本文对艾纳香的茎叶的化学成分进行了研
究，从该植物中分离得到 6 个黄酮类化合物，分别鉴定为艾
纳香素(1)、二氢斛皮素 － 4 －甲醚(2)、3，5，34 －四羟基
－ 7 －甲氧基黄酮(3)、3，5，3 －三羟基 － 7，4 －二甲氧基
黄酮(4)、5，7，3，5 －四羟基二氢黄酮(5)、3，5，3 －三羟
基 － 7，4 －二甲氧基二氢黄酮(6)。并对以上化合物进行
了抗菌和抗肿瘤活性的筛选。
1 仪器与材料
INOVA － 400 核磁共振仪(Varian，美国) ;HP1100 MSD
型质谱仪(HP，美国) ;HP － 5973 型质谱仪(HP，美国) ;半
制备高效液相色谱仪(Waters － 600，美国) ，色谱柱为 C －
18 反相硅胶柱;XT － 2 型双目显微熔点测定仪(北京泰克
仪器有限公司)。柱层析用硅胶(40 ～ 80、200 ～ 300、300 ～
400 目)、硅胶 H、薄层层析用硅胶(GF254)及 GF254 薄层
层析板均为青岛海洋化工厂分厂产品;柱层析凝胶(Sepha-
dex LH － 20，25 － 100μm)为瑞典 Amersham Biosciences 公
司产品;MCI CHP － 20 为日本三菱公司生产。大肠埃希氏
菌(CMCC 44113)、金黄色葡萄球菌(CMCC 26112)、人白血
病细胞株 K562 细胞、人肺癌细胞株 A549 细胞、M － H培养
基、营养琼脂等。
本文所用药材由贵州宏宇药业有限公司提供，产地:
贵州省黎平县，经贵阳中医学院魏升华副教授鉴定为菊科
艾纳香属植物艾纳香(Blumea balsamifera DC.)的全草。
2 提取与分离
艾纳香茎叶 150 kg，粉碎，93%乙醇回流提取两次，每
次 3 h，药渣用 80%乙醇回流提取 3 h，合并三次提取液，减
压回收乙醇，所得浓缩液加水适量，依次用石油醚、三氯甲
烷、乙酸乙酯萃取，减压回收溶剂，分别得到石油醚浸膏
(1350g)、三氯甲烷浸膏 4105g、乙酸乙酯浸膏(516g)。取
三氯甲烷浸膏 4100 g，加入硅胶(40 ～ 80 目)5000g拌样，上
样于硅胶(200 ～ 30 目，9000g)层析柱，用三氯甲烷 －甲醇
混合溶剂进行梯度洗脱，合并相似组分。取组分 A36 ～
A54 合并蒸干得样品 2364 g，经硅胶(200 ～ 300 目)柱层
析，用三氯甲烷 －甲醇混合溶剂梯度洗脱，合并相似组分。
取组分 B8 ～ B15，经硅胶(200 ～ 30 目)柱层析，用三氯甲烷
－甲醇混合溶剂梯度洗脱，合并组分 C45 ～ C48，再经硅胶
(300 ～ 400 目，石油醚 －乙酸乙酯 3:1)柱层析，合并相似
组分。取组分 D27 经反复重结晶得到化合物 2(5. 0g) ，组
分 D38 经反复重结晶得到化合物 3(2. 2g) ;组分 D20 ～ D25
蒸干后经反复重结晶得到化合物 1(10. 3g) ，合并各次重结
晶所得母液蒸干，用 MCI柱层析除色素，以甲醇∶ 水(50∶
50)洗脱得到 7 个组分(Fr 1 ～ Fr 7)。组分 Fr 2 经 Si － gel
(300 － 400 目，石油醚 －乙酸乙酯洗脱)、Sephadex LH － 20
(甲醇和三氯甲烷∶ 甲醇 = 1∶ 1 洗脱)柱层析、制备型薄
层色谱(pre － TLC)、以及半制备 HPLC 分离纯化得化合物
4(80mg)、5(100mg)、6(23mg)。
3 结构鉴定
3. 1 化合物 1 为白色粉末，1%三氯化铝显黄色;ESI －
MS m/z:303［M + H］+;1H － NMＲ (400 MHz，DMSO)δ:
12. 10 (1H，s，OH － 5) ，9. 07 (2H，s，OH － 3，5) ，6. 87
(1H，s，H －4) ，6. 74 (2H，s，H － 2，6) ，6. 08 (1H，d，J =
2. 0 Hz，H － 8) ，6. 06 (1H，d，J = 2. 0 Hz，H － 6) ，5. 41
(1H，dd，J = 12. 4，2. 8 Hz，H － 2) ，3. 76 (3H，s，7 －
OCH3) ，3. 22 (1H，dd，J = 17. 2，12. 8 Hz，H － 3a) ，2. 70
(1H，dd，J = 17. 2，J = 2. 8 Hz，H － 3) ;13 C － NMＲ (100
MHz，DMSO)δ:197. 1 (C － 4) ，167. 5 (C － 7) ，163. 3 (C －
5) ，162. 9 (C － 9) ，145. 8 (C － 5) ，145. 3 (C － 3) ，129. 3
(C － 1) ，118. 1 (C － 4) ，115. 4 (C － 6) ，114. 4 (C － 2) ，
102. 7 (C － 10) ，94. 7 (C － 6) ，93. 9 (C － 8) ，78. 7 (C －
2) ，56. 0 (C － 7OCH3)。结合以上数据和理化常数与文
献［6］一致，故鉴定为艾纳香素。
3. 2 化合物 2 为无色方晶(丙酮) ，mp 172 ～ 173℃;1%
三氯化铝显黄色;ESI － MS m/z:319［M + H］+;1H － NMＲ
(400 MHz，DMSO)δ:11. 89 (1H，s，5 － OH) ，9. 07 (1H，s，
3 － OH) ，6. 93 (1H，dd，J = 8. 0，2. 0 Hz，H － 5)6. 92
(1H，d，J = 2. 0，H － 2) ，6. 87 (1H，d，J = 8. 0，H － 6) ，
5. 91 (1H，d，J = 2. 0，H － 8) ，5. 86 (1H，d，J = 2. 0，H －
6) ，5. 79 (1H，d，J = 6. 2 Hz，3 － OH) ，5. 02 (1H，d，J =
11. 2 Hz，H －2) ，4. 52 (1H，dd，J = 11. 2，6. 2 Hz，H － 3) ，
3. 78 (3H，s，4 － OCH) ;13 C － NMＲ (100 MHz，DMSO)δ:
196. 9 (C － 4) ，167. 3 (C － 7) ，163. 9 (C － 5) ，163. 2 (C －
9) ，148. 2 (C － 4) ，146. 2 (C － 3) ，129. 9 (C － 1) ，119. 5
·01· 贵阳中医学院学报 第 35 卷
书(C － 6) ，114. 4 (C － 2) ，111. 3 (C － 5) ，100. 5 (C － 10) ，
96. 0 (C － 6) ，94. 9 (C － 8) ，83. 5 (C － 2) ，72. 4 (C － 3) ，
55. 3 (2 － OCH3)。以上光谱数据和理化性质与文献［7］
报道的二氢斛皮素 － 4 －甲醚基本相同，故鉴定其为二氢
斛皮素 － 4 －甲醚。
3. 3 化合物 3 为黄色粉末，ESI － MS m/z:317 ［M +
H］+;1H － NMＲ (400 MHz，DMSO)δ:12. 42 (1H，s，OH) ，
10. 78 (1H，s，OH) ，9. 32 (2H，s，OH) ，7. 71 (1H，dd，J =
8. 4，2. 0 Hz，H － 6) ，7. 64 (1H，d，J = 2. 0 Hz，H － 2) ，
7. 05 (1H，d，J = 8. 4 Hz，H － 5) ，6. 40 (1H，d，J = 2. 0
Hz，H －8) ，6. 16 (1H，d，J = 2. 0 Hz，H － 6) ，3. 83 (3H，s，
OCH3) ;
13 C － NMＲ (100 MHz，DMSO)δ:176. 2 (C － 4) ，
163. 8 (C － 7) ，161. 2 (C － 9) ，156. 7 (C － 5) ，148. 6 (C －
4) ，145. 9 (C － 2) ，146. 7 (C － 3) ，136. 0 (C － 3) ，123. 0
(C － 1) ，120. 1 (C － 6) ，114. 6 (C － 2) ，111. 8 (C － 5) ，
103 (C － 10) ，98. 2 (C － 6) ，93. 4 (C － 8) ，55. 6 (7 －
OCH3)。以上理化性质和光谱数据与文献［8］对照一致，
因此鉴定化合物为 3，5，34 －四羟基 － 7 －甲氧基黄酮。
3. 4 化合物 4 为黄色粉末;1%三氯化铝显黄色;ESI －
MS m/z:353［M + Na］+;1H － NMＲ (400 MHz，DMSO)δ:
12. 03 (1H，s，OH) ，9. 04 (2H，s，OH) ，7. 26 (1H，d，J =
2. 0 Hz，H － 2) ，7. 10 (1H，dd，J = 8. 4，2. 0 Hz，H － 6) ，
6. 44 (1H，dd，J = 8. 4 Hz，H － 5) ，6. 23 (1H，d，J = 2. 0
Hz，H －8) ，5. 88 (1H d，J = 2. 0 Hz，H － 6) ，3. 39 (3H，s，
OCH3) ，3. 04 (3H，s，OCH3) ;
13C － NMＲ (100 MHz，DMSO)
δ:180. 2 (C － 4) ，166. 8 (C － 7) ，163. 2 (C － 9) ，158. 7 (C
－ 5) ，157. 6 (C － 4) ，151. 9 (C － 2) ，176. 7 (C － 3) ，
139. 0 (C － 3) ，124. 0 (C － 1) ，122. 1 (C － 6) ，116. 6 (C
－ 2) ，112. 8 (C － 5) ，105 (C － 10) ，99. 2 (C － 6) ，94. 4
(C － 8) ，60. 5 (OCH3) ，56. 6 (OCH3) ，结合以上信息与文
献［8］基本一致，鉴定该化合物为 3，5，3 －三羟基 － 7，4 －
二甲氧基黄酮。
3. 5 化合物 5 为白色粉末;1%三氯化铝显黄色;ESI －
MS m/z:289 ［M + H］+;1H NMＲ (400 MHz，DMSO)δ:
12. 13 (1H，s，OH) ，10. 80 (1H，s，OH) ，9. 04 (2H，s，OH) ，
6. 86 (1H，s，H － 4) ，6. 73 (2H，s，H － 2，H － 6) ，5. 86
(1H d，J = 2. 0 Hz，H － 8) ，5. 85 (1H d，J = 2. 0 Hz，H －
6) ，5. 36 (1H，dd，J = 12. 8，2. 8 Hz，H －2) ，3. 18 (1H，dd，
J = 17. 2，12. 8 Hz，H － 3a) ，2. 66 (1H，dd，J = 17. 2，2. 8
Hz，H －3b) ;13C － NMＲ (100 MHz，DMSO)δ:198. 0 (C －
4) ，168. 3 (C － 7) ，165. 2 (C － 5) ，164. 6 (C － 9) ，147. 4 (C
－ 5) ，146. 9 (C － 3) ，131. 2 (C － 1) ，119. 6 (C － 4) ，
117. 1 (C － 6) ，116. 1 (C － 2) ，103. 5 (C － 10) ，97. 5 (C
－ 6) ，96. 7 (C － 8) ，80. 2 (C － 2)。结合以上数据和理化
常数与文献［7］一致，故鉴定为 5，7，3，5 － 四羟基二氢
黄酮。
3. 6 化合物 6 为白色粉末;ESI － MS m/z:355 ［M +
Na］+;1H － NMＲ (400 MHz，DMSO － d6)δ:6. 93 (1H，d，J
= 5. 0Hz，H － 5) ，6. 90 (1H，s，H － 2) ，6. 89 (1H，d，J =
5. 0 Hz，H － 6) ，6. 11 (1H，d，J = 10. 0 Hz，H － 8) ，6. 09
(1H，d，J = 10. 0 Hz，H － 6) ，5. 08 (1H，d，J = 10. 0 Hz，H
－2) ，4. 57 (1H，dd，J = 10. 0，5. 0 Hz，H － 3) ，3. 79 (3H，
s，OCH3) ，3. 78 (3H，s，OCH3) ;
13 C － NMＲ (100 MHz，DM-
SO － d6)δ:198. 2 (C = O) ，167. 5，162. 9，162. 3，147. 9，
146. 1，129. 5，119. 1，115. 0，111. 7，101. 3，93. 7，82. 9，71. 8，
55. 8 (OCH3) ，55. 6 (OCH3)。以上数据与与文献
［7］对照
一致，鉴定此化合物为 3，5，3 －三羟基 － 7，4 －二甲氧基
二氢黄酮。
4 活性测试
化合物 3 对人肺癌细胞株 A549 细胞有一定的抑制作
用，化合物 4、6 对有微弱的抑制作用(表 1) ;化合物 1、2、3、
4 对人白血病细胞株 K562 细胞有微弱的抑制作用(表
2) ;。以上化合物对金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌均无
抑制作用;
表 1 化合物对人肺癌细胞株 A549 细胞活性(M，%)
化合物编号 终浓度(M) 抑制率(%)
1 1. 00 × 10 －3 8. 44 ± 4. 42
1. 00 × 10 －4 0
1. 00 × 10 －5 0. 34 ± 6. 53
2 1. 00 × 10 －3 73. 68 ± 1. 83
1. 00 × 10 －4 0
1. 00 × 10 －5 0
3 1. 00 × 10 －3 59. 68 ± 0. 63
1. 00 × 10 －4 51. 04 ± 5. 90
1. 00 × 10 －5 21. 82 ± 2. 65
4 1. 00 × 10 －3 49. 00 ± 9. 27
1. 00 × 10 －4 20. 71 ± 0. 52
1. 00 × 10 －5 11. 02 ± 4. 85
5 1. 00 × 10 －3 55. 75 ± 0. 75
1. 00 × 10 －4 0
1. 00 × 10 －5 0
6 1. 00 × 10 －3 67. 22 ± 3. 70
1. 00 × 10 －4 18. 78 ± 0. 50
1. 00 × 10 －5 9. 40 ± 7. 63
阿霉素 1. 00 × 10 －5 75. 54 ± 2. 82
8. 00 × 10 －7 60. 04 ± 0. 31
4. 00 × 10 －7 43. 60 ± 5. 41
2. 00 × 10 －7 27. 12 ± 3. 22
1. 00 × 10 －7 13. 72 ± 2. 42
·11·第 3 期 傅 建，梁光义，李 霞，等．黔产艾纳香黄酮类化学成分的研究
书表 2 化合物对人白血病细胞株 K562 细胞活性(M，%)
化合物编号 终浓度 抑制率
1 1. 00 × 10 －3 8. 92 ± 4. 67
1. 00 × 10 －4 18. 14 ± 1. 04
1. 00 × 10 －5 15. 18 ± 2. 96
2 1. 00 × 10 －3 65. 87 ± 0. 11
1. 00 × 10 －4 28. 64 ± 7. 04
1. 00 × 10 －5 11. 06 ± 2. 84
3 1. 00 × 10 －3 100. 00 ± 0. 86
1. 00 × 10 －4 35. 04 ± 5. 68
1. 00 × 10 －5 37. 54 ± 4. 82
4 1. 00 × 10 －3 100. 00 ± 3. 49
1. 00 × 10 －4 23. 50 ± 14. 45
1. 00 × 10 －5 22. 10 ± 2. 47
5 1. 00 × 10 －3 18. 52 ± 10. 42
1. 00 × 10 －4 1. 94 ± 8. 60
1. 00 × 10 －5 5. 13 ± 5. 44
6 1. 00 × 10 －3 0
1. 00 × 10 －4 0
1. 00 × 10 －5 12. 36 ± 10. 53
阿霉素 1. 00 × 10 －5 75. 44 ± 0. 12
8. 00 × 10 －7 62. 78 ± 1. 96
4. 00 × 10 －7 42. 55 ± 2. 02
2. 00 × 10 －7 22. 67 ± 0. 40
1. 00 × 10 －7 16. 39 ± 1. 02
致谢:核磁和质谱数据分别由贵州省中国科学院天然
产物化学重点实验室张建新研究员和王道平老师测定。
活性筛选结果由贵州省中国科学院天然产物化学重点实
验室活性筛选室孙黔云、杨付梅老师完成。
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* 基金项目: 贵州省中药现代化科技产业研究开发专项，黔科合中药字［2010］5016.
* 通讯作者: 刘文，教授，研究方向为缓控释制剂，E － mail: liuwen16258@ sina. com.
收稿日期: 2012 － 10 － 12
HPLC法测定戊己胃漂浮缓释片中
盐酸小檗碱的含量*
陈龙富，刘 文* ，司 娜，宋信莉
( 贵阳中医学院，贵州贵阳 550002)
摘要:目的:建立戊己胃漂浮缓释片中盐酸小檗碱含量测定方法。方法:采用 Thermo ODS － 2( 5μm，250mm × 4. 6mm)
色谱柱，以乙腈: 0. 05mol磷酸二氢钾溶液( 用磷酸调 pH至 3. 0) = 30: 70 为流动相进行等度洗脱，流速为 1. 0mL /min，检测
波长 345nm，柱温 30℃。结果:盐酸小檗碱在 0. 404557 ～ 1. 415951μg线性关系良好( r = 0. 9999) ，平均回收率为 99. 84%。
结论:本方法简便、准确，可测定戊己胃漂浮缓释片中盐酸小檗碱的含量。
关键词:戊己胃漂浮缓释片;盐酸小檗碱; 高效液相色谱
Doi: 10. 3969 / j. issn. 1002 － 1108. 2013. 03. 0006
中图分类号:Ｒ927． 2 文献标识码:A 文章编号:1002 － 1108( 2013) 03 － 0012 － 03
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第 35 卷 第 3 期
2013 年 5 月
贵阳中医学院学报
JGCTCM
No. 3 Vol. 35
May 2013