全 文 ：收稿日期:2013-05-10; 修订日期:2013-11-15
基金项目:国家自然科学基金( No． 81260622) ;
云南省自然科学基金 ( No． 2011FB081) ;
云南省教育厅重点( No． 2012Z119) ;
重庆市教委科学技术研究项目资助( No． KJ131109)
作者简介:周 浓( 1978-) ，男( 汉族) ，重庆开县人，重庆三峡学院副教授，
硕士学位，主要从事药用植物栽培与质量控制研究工作．
* 通讯作者简介:郭冬琴( 1985-) ，女( 汉族) ，重庆合川人，重庆三峡学院
讲师，博士学位，主要从事微生物与植物营养研究工作．
滇重楼总黄酮提取工艺的正交试验法优选
周 浓1，2，张玉莲2，郭冬琴1* ，张采琼2，杨晓艳2
(1．重庆三峡学院生命科学与工程学院，重庆 404000; 2．大理学院药学院，云南 大理 671000)
摘要:目的 优选滇重楼中总黄酮的提取工艺。方法 以芦丁为对照，在单因素试验的基础上以提取时间、提取次数、料液
比为考察因素，以总黄酮转移率为指标，采用正交试验优选最佳提取工艺。结果 最佳提取工艺为以甲醇为提取溶剂，回
流提取 2 次，每次 2 h，料液比为 1∶ 60( g∶ ml) ;总黄酮含量为 0． 096 5 %。结论 该提取工艺合理、经济、简便，适用于滇
重楼中总黄酮的提取。
关键词:滇重楼; 总黄酮; 提取工艺; 正交试验
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2014． 03． 025
中图分类号:Ｒ284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2014) 03-0581-02
Study on extraction condition of total flavonoids from Paris polyphylla var． yunnanensis
by Orthogonal Test Method
ZHOU Nong1，2，ZHANG Yu-lian2，GUO Dong-qin1* ，ZHANG Cai-qiong2，YANG Xiao-yan2
( 1． College of Life Science and Engineering，Chongqing Three Gorges University，Chongqing 404000，China;
2． College of Pharmacy，Dali University，Dali 671000，China)
Abstract: Objective To select the best condition for extraction process of total flavonoids from Paris polyphylla var． yunnanen-
sis． Methods The determination of total flavonoids was spectrometrically carried out using rutin as the reference standard and tak-
ing extraction time，extraction frequency，ratio of material to liquid as crucial extraction parameters on the basis of single factor
experiment，the extraction process were optimized for maximizing the yield with orthogonal experiment． Ｒesults The optimal con-
ditions were set as follows: methanol as the extraction solvent to reflux twice and 2 h each，solid － liquid ratio 1∶ 60( g: ml) ，re-
sulting in a total flavonoids yield 0． 096 5 % ． Conclusion This extraction technology of flavonoids in Paris polyphylla var． yun-
nanensis is reasonably，economical and feasible．
Key words: Paris polyphylla var． yunnanensis; Total flavones; Extraction condition; Orthogonal test method
滇重楼为百合科植物云南重楼 Paris polyphylla Smith var．
yunnanensis (Franch．)Hand． － Mazz． 的干燥根茎，具有清热解
毒、消肿止痛、凉肝定惊的功效［1］。目前国内市场以重楼药材为
组方的中成药品种已有 65 种，生产厂家达 130 多个，是著名中成
药云南白药系列、季德胜蛇药、宫血宁胶囊、楼莲胶囊等的主要原
料［2］。其中以黄酮类化合物为其主要化学成分之一［3］，并具有
抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、抗炎、保肝、降血压等生物活性［4］，为滇
重楼的活性成分和衡量药材质量的重要指标之一。目前对滇重
楼质量控制的报道主要集中于甾体皂苷的含量［5 ～ 9］，但 UV法对
滇重楼中总黄酮含量的提取工艺研究尚未见报道。为此，本研究
采用正交设计试验，选择总黄酮含量为综合考察指标，优化滇重
楼的提取工艺，为滇重楼的开发利用提供理论依据。
1 仪器与试药
TU － 1901 型双光束紫外 －可见分光光度计(北京普析通用
仪器有限责任公司);ＲE － 2000A 型旋转蒸发仪(上海亚荣生化
仪器厂);AL104 型电子天平(梅特勒 －托利多仪器上海有限公
司);SHZ － DM型循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公
司) ;SB25 － 120 型超声波清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公
司);DKS － 28 型恒温水浴锅(嘉兴市中新医疗仪器有限公司)。
芦丁对照品(中国药品生物制品检定所，批号:100080 －
200707，供含量测定用);滇重楼采自云南省大理市花甸坝药材
场，经大理学院药学与化学学院生药教研室周浓副教授鉴定为云
南重楼 Paris polyphylla var． yunnanensis的干燥根茎;水为三重蒸
馏水;其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 提取方法的比较
2． 1． 1 超声提取法 精密称取滇重楼粉末(过 3 号筛)约 0． 50 g，
加 20 ml甲醇，超声提取 30 min，过滤，重复 2 次，合并滤液，以甲
醇溶解并定容至 10 ml，即可［10］。
2． 1． 2 回流提取法 精密称取滇重楼粉末(过 3 号筛)0． 50 g，加
20 ml甲醇，回流提取 2 h，过滤，重复 2 次，合并滤液，以甲醇溶解
并定容至 10 ml，即可。
2． 1． 3 索氏提取法 精密称取滇重楼粉末(过 3 号筛)约 0． 50 g，
加 20 ml甲醇，索氏提取 2 h，过滤，重复 2 次，合并滤液，以甲醇
溶解并定容至 10 ml，即可。
分别精密量取以上提取液 2 ml，加三氯化铝显色剂定容于
10 ml量瓶中，于分光光度计 425 nm 处，以三氯化铝显色剂为空
白，测定吸光度。
结果表明:超声提取法、回流提取法、索氏提取法所得总黄酮
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2014 VOL． 25 NO． 3 时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 3 期
的含量分别为 0． 059 1 %、0． 081 3 %、0． 052 4 %，回流提取法的
提取率最大，因此采用回流提取法。
2． 2 黄酮含量测定
2． 2． 1 对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品 2． 50 mg，置于
25 ml量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度，制成 0． 1 mg·ml －1的
芦丁对照品贮备液。
2． 2． 2 供试品溶液的制备 精密称取滇重楼粉末(过 3 号筛)
2． 50 g，置于 250 ml圆底烧瓶中，加甲醇 100 ml，回流提取 2 h，过
滤，重复 2 次，合并滤液，以甲醇溶解并定容至 50 ml，备用。
2． 2． 3 标准曲线的绘制 分别取芦丁对照品贮备液 0． 0，0． 5，
1． 0，1． 5，2． 0，2． 5 ml，置于 10 ml量瓶中，加三氯化铝显色剂溶液
定容至刻度。以第 1 份溶液为空白，在 425 nm 波长处测定吸光
度［10，11］。以芦丁检测浓度(C)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标，
制备标准曲线，得回归方程为 A = 33． 78 C + 0． 0269，(r =
0． 999 3)。结果表明，芦丁对照品在所试浓度 0． 005 ～ 0． 025 mg
·ml －1呈良好的线性关系。
2． 2． 4 总黄酮的含量测定 精确量取滇重楼提取液 2 ml 于 10
ml量瓶中，按照“2． 2． 3”的方法进行显色，在 425 nm 测定吸光
度，代入回归方程计算总黄酮质量浓度。
2． 2． 5 精密度试验 精密量取对照品贮备液 2 ml 于 10 ml 量瓶
中，加入三氯化铝显色剂定容至刻度，在 425 nm波长处测定吸光
度，同法操作 6 次，ＲSD = 1． 11 %(n = 6)。结果表明，仪器精密
度良好。
2． 2． 6 重复性试验 精密称取滇重楼粉末(过 3 号筛)6 份，分别
按“2． 2． 2”项下方法制备供试品溶液。精密量取供试品溶液 2
ml于 10 ml量瓶中，加入三氯化铝显色剂定容至刻度，在 425 nm
波长处测定吸光度，ＲSD = 0． 88 %(n = 6)。结果表明，方法重复
性良好。
2． 2． 7 稳定性试验 精密量取供试品溶液 2 ml于 10 ml量瓶中，
加入三氯化铝显色剂定容至刻度，在 0 ～ 60 min内每隔 10 min测
定一次吸光度(425nm)，ＲSD = 1． 34 %(n = 6)。结果表明，供试
品溶液显色后在 60 min内稳定。
2． 2． 8 加样回收率试验 精密称取已知总黄酮含量的滇重楼粉
末(过 3 号筛)0． 25 g，共 9 份，分别精密加入一定量的芦丁对照
品，按“2． 2． 2”项下方法制备供试品溶液，在 425 nm 处测定吸光
度，计算回收率，平均回收率为 97． 50 %，ＲSD = 1． 89 %(n = 9)。
2． 3 单因素考察
2． 3． 1 提取时间对总黄酮含量的影响 精确称取滇重楼粉末(过
3 号筛)0． 50 g，加入甲醇 20 ml，分别回流提取 1，1． 5，2． 0，2． 5，
3． 0 h，放冷，过滤，回收溶剂至干，浓缩物用甲醇溶解并定容至 10
ml。分别取上述提取液 2 ml于 10 ml量瓶中，以三氯化铝显色剂
定容至刻度，在 425 nm 处测定吸光度。总黄酮提取率分别为
0． 051 8 %、0． 077 3 %、0． 087 7 %、0． 093 9 %、0． 093 3 %，结果
提取时间在 1． 5 ～ 2． 5 h 之间，总黄酮含量随提取时间的增加而
增加，但 2． 5 h后趋于平衡，提取时间 2． 5 h 时总黄酮提取率最
大。
2． 3． 2 提取次数对总黄酮含量的影响 精确称取滇重楼粉末(过
3 号筛)0． 50 g，加入甲醇 20 ml，分别回流提取 1 次、2 次、3 次，每
次 2 h，放冷，过滤，回收溶剂至干，浓缩物用甲醇溶解并定容至
10 ml。分别取上述提取液 2 ml 于 10 ml 量瓶中，以三氯化铝显
色剂定容至刻度，在 425 nm 处测定吸光度。总黄酮提取率分别
为 0． 054 2 %、0． 069 0 %、0． 068 4 %，随着提取次数的增加而总
黄酮含量也增加，但提取 2 次后趋于平衡，提取次数 2 次时总黄
酮提取率最大。
2． 3． 3 固液比对总黄酮含量的影响 精确称取滇重楼粉末(过三
号筛)0． 50 g，分别加入甲醇 10，20 ，30 ，40 ，50 ，60 ，70 ml，回流
提取 2 次，每次 2 h，放冷，过滤，回收溶剂至干，浓缩物用甲醇溶
解并定容至 10 ml。分别再各取上述提取液 2 ml 于 10 ml 量瓶
中，以三氯化铝显色剂定容至刻度，在 425 nm处测定吸光度。总
黄酮提取率分别为 0． 051 0 %，0． 051 8 %，0． 052 4 %，0． 057 7
%，0． 060 1 %，0． 063 1 %，0． 062 1 %，料液比在 1∶ 20 ～ 1∶ 60
范围内总黄酮含量随料液比增大而增加较快，而 1:60 后趋于平
衡，综合各方面因素，料液比以 1∶ 20 ～ 1∶ 60 为宜。
2． 4 正交试验 根据单因素初筛结果，选择提取时间(A)、提取
次数(B)、料液比(C)三因素对黄酮提取工艺进行正交实验，并
以总黄酮含量作为提取工艺的判断指标。根据设置选用 L9(3
4)
正交表，试验方案设计及结果见表 1 ～ 3。
表 1 因素水平
水平
A
提取时间 /h
B
提取次数
C
料液比 /(g:ml)
1 1 1 1∶ 20
2 2 2 1∶ 40
3 3 3 1∶ 60
表 2 正交试验结果
No． A B C D(空白)总黄酮含量(%)
1 1 1 1 1 0． 052 7
2 1 2 2 2 0． 069 0
3 1 3 3 3 0． 063 1
4 2 1 2 3 0． 062 2
5 2 2 3 1 0． 082 9
6 2 3 1 2 0． 089 1
7 3 1 3 2 0． 081 7
8 3 2 1 3 0． 055 7
9 3 3 2 1 0． 054 2
K1 0． 061 6 0． 065 5 0． 065 8 0． 063 3
K2 0． 078 1 0． 069 2 0． 061 8 0． 079 9
K3 0． 063 9 0． 068 8 0． 075 9 0． 060 3
Ｒ 0． 016 5 0． 003 7 0． 010 1 0． 019 6
表 3 方差分析
因素 偏差平方和 自由度 F 显著性
A 0． 2501 2 25． 01 ﹡
B 0． 0532 2 5． 32
C 0． 2010 2 20． 10 ﹡
误差 0． 0102 2
F0． 05(2，2)=19． 00，F0． 01(2，2)=99． 00，﹡显著
由表 2 可知，影响因素主次 A ＞ C ＞ B，即提取时间对滇重楼
总黄酮的提取结果影响最大，料液比次之，提取次数的影响最小。
表 3 可知 A因素(提取时间)和 C因素(料液比)对黄酮的提取有
显著性影响，B因素(提取次数)影响不显著。通过正交实验得出
最佳提取工艺条件为 A2B2C3，即提取时间为 2 h，提取次数为 2
次，料液比为 1∶ 60(g∶ ml)。
2． 5 验证试验 精密称取滇重楼粉末(过 3 号筛)0． 50 g，按优选
最佳提取工艺进行提取，冷却，过滤，合并滤液，回收溶剂至干，浓
缩物用甲醇转移到 10 ml 量瓶中。分别取提取液 2 ml 于 10 ml
量瓶中，以三氯化铝显色剂定容至刻度，在 425 nm 处测定吸光
度。滇重楼中总黄酮的平均提取率为 0． 096 5 %，ＲSD = 1． 58 %
(n = 3)。表明所选工艺是合理的、可行的。
3 结论
本试验通过正交试验法对滇重楼总黄酮的提取工艺条件进
行了优化，确定滇重楼总黄酮最佳提取工艺为回流提取 2 h、料液
比 1∶ 60(g∶ ml)，重复提取 2 次。该工艺条件简单可行，为更有
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时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 3 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2014 VOL． 25 NO． 3
效的开发利用滇重楼资源提供了理论依据和基础资料。
参考文献:
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收稿日期:2013-03-13; 修订日期:2013-12-17
基金项目:四川省教育厅重点项目( No． 102A091)
作者简介:陈朝霞( 1988-) ，女( 汉族) ，四川广安人，成都中医药大学药学
院在读硕士研究生，主要从事药物分析研究工作．
* 通讯作者简介:张 梅( 1963-) ，女( 汉族) ，四川成都人，成都中医药大
学教授，博士研究生导师，博士学位，主要从事中药及其复方物质基础及
质量标准化研究工作．
川明参对大鼠内分泌激素水平影响的实验研究
陈朝霞，张 梅* ，陈 璐，姚红娥，徐 秒
(成都中医药大学药学院，中药材标准化教育部重点实验室，
中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地，四川 成都 611137)
摘要:目的 探讨补益药川明参对 SD大鼠内分泌激素水平的影响。方法 SD 大鼠连续 4 周灌胃给予 5． 5g /kg、11g /kg、
22g /kg的川明参水煎液，采用酶联免疫法测定其血清醛固酮、胰岛素、血清游离三碘甲状腺原氨酸( FT3 ) 、游离甲状腺素
( FT4 ) 、睾酮( T) 和雌激素( E2 ) 的水平。结果 川明参 11g /kg、22g /kg剂量能显著降低大鼠游离甲状腺素( FT4 ) 水平和雌
性大鼠的血清睾酮水平。结论 长期食用药食同源补益药川明参，可能会影响体内与能量代谢及生殖功能调控相关的部
分内分泌激素水平。
关键词:川明参; 大鼠; 内分泌系统激素; 酶联免疫法
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2014． 03． 026
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2014) 03-0583-02
Ｒesearch on the effects of Chuanminshen violaceum on the endocrine hormone level in rats
CHEN Chao-xia，ZHANG Mei* ，CHEN Lu，YAO Hong-e，XU Miao ．
( School of Pharmacy，Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Key Laboratory of Standardization
of Chinese Herbal Medicines of Ministry of Education，State Key Laboratory Breeding Base of Systematic re-
search，Development and Utilization of Chinese Medicine Ｒesources ，Chengdu，611137，China)
Abstract: Objective To explore the effects of tonic Chuanminshen violaceum on the endocrine hormone level in SD rats ．Meth-
ods The SD rats from different groups had been consecutively given 5． 5g /kg，11g /kg，and 22g /kg water extract of Chuanminshen
violaceum separately for gavage for 4 weeks． Serum levels of aldosterone，insulin，free triiodothyronine ( FT3 ) ，free thyroxine
( FT4) ，testosterone and estrogen were examined by ELISA ． Ｒesults In comparison with control group，the 11g /kg and 22g /kg
dose of Chuanminshen violaceum significantly reduced free thyroxine( FT4) level and female rats testosterone level． Conclusion -
Long － term consumption of food and medicine homologous tonic Chuanminshen violaceum may affect some part of the endocrine
hormone level of energy metabolism and reproductive function regulation．
Key words: Chuanminshen violaceum; Ｒats; Endocrine hormone; ELISA
伞形科(Umbelliferae)川明参属植物川明参 Chuanminshen vi-
olaceum Sheh et Shan． 为我国特有单种属植物，是四川道地药
材［1］，具有润肺化痰、和胃、解毒等功效，主治肺热咳嗽、热病伤
阴。临床及民间作为滋阴要药，适用于病后补虚和强壮身体，为
一药食同源植物。课题组前期研究表明川明参具有提高免疫功
能等作用［2，3］。基于补益药具有影响人体内分泌、免疫调节等作
用的现代研究结果［4］，本课题从内分泌系统激素分泌水平角度，
初步探讨其连续服用的干预作用。
1 材料
1． 1 药物 川明参，购于金堂县药材市场。经成都中医药大学药
学院中药资源与鉴定系裴瑾教授鉴定为伞形科川明参属植物川
明参 Chuanminshen viloaceum Sheh et Shan． 的干燥根。川明参药
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2014 VOL． 25 NO． 3 时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 3 期