全 文 ：湖 北 农 业 科 学 2014 年
收稿日期：2014－01－13
基金项目：贵州省科技厅联合课题（黔科合 J 字 LKM［2011］27 号）；贵州省科技厅对外合作项目（黔科合处 G 字［2011］7034 号）
作者简介：严 敏（1973－），女，贵州印江人，高级实验师，在读硕士研究生，研究方向为植物化学，（电话）0851－3610313（电子信箱）
577977087＠qq．com；通讯作者，汤洪敏，教授，硕士生导师，主要从事分子生物学方面的研究（电子信箱）echoboy99＠163．com。
艾纳香（Blumea balsamifera L），别名管芽，假
东风草 ［1］、大风艾、大艾、冰片艾等，属于菊科艾纳
香属多年生木质草本植物， 在我国主要产于广西、
贵州、云南、广东等省 ［2］，以其全草或地上部分入
药，具有镇痛、发汗、祛风除湿、去痰止咳、通经止血
等功效，是一种重要的民间药物。 作为天然中草药，
艾纳香含有多种有效成分， 已经鉴定的有黄酮类、
有机酸、萜类等［3－5］。 同时，艾纳香是天然龙脑的重要
来源，艾纳香精油中含 30％左右龙脑 ［6］，是名贵药
材、高级香料、化妆品的理想原料及食品保健品的
添加剂。
艾纳香属多年生宿根植物，主要以宿根分株繁
殖，分生苗移栽成活率低；艾纳香利用种子育苗发
现种子结实率低、休眠期长、发芽率低［7，8］。这些情况
导致艾纳香种苗短缺，严重制约了艾纳香的规模化
生产，因此必须研究艾纳香的组织培养以快速获得
批量种苗，扩大种植规模以满足日益增长的市场需
求。 此外，在进行组织培养时，直接以组织培养物替
代原药材是解决艾纳香资源短缺的重要方法。 对不
同培养条件下的艾纳香中龙脑含量进行比较，有利
于扩宽艾纳香药材的应用，使这一古老的中药为人
类健康发挥更大的作用。
1 材料与方法
1．1 仪器
7890A ／ 5975C 气质联用仪（Agilent公司）。
1．2 试剂
龙脑对照品，无水乙醇。
气质联用法对艾纳香中龙脑含量的测定
严 敏，石成亮，汤洪敏
（贵州民族大学化学与环境科学学院，贵阳 550025）
摘要：以艾纳香（Blumea balsamifera L.）组织培养过程中的愈伤组织、组培苗以及罗甸野生苗为研究对
象，以乙醇为溶剂提取艾纳香中的龙脑，运用气质联用法分别测定艾纳香组培愈伤组织、组培苗、罗甸野
生苗中龙脑的相对百分含量。 结果表明，艾纳香组培愈伤组织中不含龙脑，组培苗、罗甸野生苗中龙脑的
含量分别为 3．216 7 和 3．620 0 mg/g。 该方法简便、精密度和重复性良好，龙脑在 0．020 0～0．060 0 mg/mL
内线性关系良好。 组培苗和罗甸野生苗的添加回收率分别为 97．11％和 97．78％。
关键词：艾纳香（Blumea balsamifera L.）；龙脑；气质联用仪
中图分类号：O657．63 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2014）21－5256-04
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2014.21.054
Determinating Borneol in Blumea balsamifera L with GC－MS
YAN Min， SHI Cheng－liang， TANG Hong－min
（College of Chemistry and Environmental Science， Guizhou Minzhu University， Guiyang 550025， China）
Abstract： Using callus and somaclone of Blumea balsamifera L seed， Luodian wild seedlings as materials， borneol of Blumea
balsamifera L was extracted by ethanol and analysed by GC-MS． The results showed that callus of of Blumea balsamifera L
seed did not contain borneol. The borneol content in somaclone and Luodian wild plants were 3．216 7 and 3．620 0 mg/g，
respectively． The method is simple， precise with good repeatability． Borneol content in the range of 0．020 0～0．060 0 mg/mL
had good linear relationship． The recoveries of standard addition were 97．11％ and 97．78％ for borneol in somaclone and
Luodian wild seedlings．
Key words：Blumea balsamifera L； borneol； GC－MS
第 53卷第 21期
2014年 11月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 53 No.21
Nov.，2014
第 21 期
图 1 龙脑对照品色谱图
4.
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300 000
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200 000
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100 000
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丰
度
图 2 艾纳香样品色谱图
3.
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280 000
260 000
240 000
220 000
200 000
180 000
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140 000
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100 000
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60 000
40 000
20 000
0
丰
度
1．3 供试材料
艾纳香组培愈伤组织； 艾纳香组培苗由贵州
民族大学化学与环境科学学院组织培养实验室
培养了 7 个月的组培苗；艾纳香野生苗采自贵州罗
甸县。
1．4 龙脑对照品溶液的制备
精确称取龙脑对照品 10 mg， 置于 10 mL 的容
量瓶中，加无水乙醇溶解并加至刻度，摇匀，即可得
到浓度为 1 mg ／ mL 的溶液， 作为标准品贮备液；另
取 200、300、400、500、600 μL 的贮备液， 分别置于
10 mL 容量瓶中加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为
对照品溶液备用，浓度分别为 0．02、0．03、0．04、0．05、
0．06 mg ／ mL。
1．5 气质联用条件
1．5．1 色谱条件 采用 HP－5MS 气相色谱柱 （30
m×0．25 mm×0．25 μm）；进样口温度为 280 ℃，采用程
序升温，柱温起始温度为 90 ℃，以 5 ℃ ／min 升温至
100 ℃，维持 3 min；再以 5 ℃ ／min 升温至 150 ℃，维
持 2 min；分流比为 40∶1；载气为高纯氦气，载流速度
为 1．0 mL ／ min；进样量为 1．0 μL。
1．5．2 质谱条件 电子轰击粒子源， 电离能量为
70 eV；离子源温度为 230 ℃；传输线温度为 210 ℃；
四级杆温度为 150 ℃。
1．6 样品的处理
分别将艾纳香愈伤组织、艾纳香组培苗、野生
苗 3 种样品用研钵粉碎，准确称取粉碎样品 8 g，放
至 250 mL的锥形瓶中，加无水乙醇 100 mL，进行超
声提取（超声时间为 120 min，频率为 59 Hz，功率为
80％），冷却、摇匀、过滤，滤液置于 100 mL 容量瓶
中，放冷，加无水乙醇至刻度，摇匀，从 100 mL 容量
瓶中再取 1 mL 溶液，置 10 mL 容量瓶中，加无水乙
醇至刻度，摇匀，即为样品溶液。
1．7 龙脑对照品的气质联用分析
分别从 0．03 mg/mL 的龙脑对照品溶液及样品
溶液中精密量取 1 μL 溶液，运用气质联用仪进行
测定。
1．7．1 标准曲线的绘制 分别精密吸取浓度为
0．02、0．03、0．04、0．05、0．06 mg ／ mL 的龙脑对照品溶
液各 1 μL，依次进样，运用气质联用仪分别测定其
峰面积，以龙脑对照品的峰面积为纵坐标，龙脑对
照品浓度为横坐标，绘制标准曲线。
1．7．2 精密度测定 取浓度为 0．03 mg/mL 的龙脑
对照品溶液 1 μL，连续进样 6 次，根据峰面积计算
其相对标准偏差。
1．7．3 重复性试验 取艾纳香野生苗，按照样品溶
液制备方法配制 6 份 100 mL 的溶液， 根据气质联
用法依次对 6 份供试品溶液进行测定，记录样品的
峰面积，计算其相对标准偏差。
1．7．4 加标回收率试验 分别称取艾纳香组培苗
和贵州罗甸野生苗各 0．04 g， 制备成样品溶液，从
中各取出 6 份，先测出药材中龙脑的含量，再向每
份中加入 0．300 mg 龙脑对照品，由气质联用仪测定
6 个样品峰面积， 计算平均回收率以及相对标准偏
差。
1．7．5 样品含量的测定 分别量取愈伤组织供试
品溶液、组培苗供试品溶液和野生苗供试品溶液各
1 μL 依次进样，测定出峰面积，计算供试品溶液中
龙脑的含量，每份平行测定 3次。
2 结果与分析
2．1 龙脑对照品溶液及样品溶液气质联用分析
从 0．03 mg/mL 的对照品溶液及样品溶液中精
密量取 1 μL 溶液进样，从图 1 至 4 可以看出，龙脑
标准品的出峰时间在 7．621 min； 样品色谱图在
7．621 min 有一吸收峰与龙脑标准品保留时间一致；
质谱图检索结果为龙脑成分。
严 敏等：气质联用法对艾纳香中龙脑含量的测定 5257
湖 北 农 业 科 学 2014 年
2．2 线性关系分析
以龙脑的浓度为横坐标， 峰面积为纵坐标，绘
制标准曲线， 见表 1、 图 5， 计算回归方程为：y＝
173.602 5 x，R2为 0.997 01。 结果表明，龙脑在 0.02～
0.06 mg/mL 内线性关系良好(n=5)。
2.3 精密度测定结果
由精密度试验方法， 用气质联用仪进行分析，
结果见表 2，其相对标准偏差（RSD）为 0.44％。 表明
方法的精密度良好。
2.4 重复性试验结果
根据重复性试验考察方法，由气质联用仪进行
测定，结果见表 3。
由表 3 可得 ，6 份供试品溶液中龙脑平均含
量为 3.621 6 mg/g，RSD 为 0.16％，表明方法的重复
性好。
2.5 加标回收率试验结果
测得组培苗中龙脑的平均回收率 97.11％，RSD
为 1.14％； 野生苗中龙脑的平均回收率 97.78％，
RSD为 0.67％，表明该方法的准确度高（表 4）。
表 2 精密度试验结果
编
号
1
2
3
4
5
6
保留时间
min
7.621
7.623
7.621
7.627
7.624
7.623
峰面积
47.572 3
47.870 5
47.421 7
47.382 9
47.779 9
47.347 9
浓度
mg/mL
0.027 4
0.027 5
0.027 3
0.027 3
0.027 5
0.027 2
平均值
mg/mL
0.027 4
RSD
％
0.44
表 3 重复性试验结果
编号
1
2
3
4
5
6
取样量//g
8.00
8.00
8.00
8.00
8.00
8.00
含量//mg/g
3.612 5
3.625 0
3.627 5
3.617 5
3.625 0
3.622 0
平均值//mg/g
3.621 6
RSD//％
0.16
表 4 加样回收率试验结果
种
类
组
培
苗
野
生
苗
编
号
1
2
3
4
5
6
1
2
3
4
5
6
药材取
样量//g
0.04
0.04
0.04
0.04
0.04
0.04
0.04
0.04
0.04
0.04
0.04
0.04
药材龙脑
原有量//mg
0.129
0.129
0.129
0.129
0.129
0.129
0.132
0.132
0.132
0.132
0.132
0.132
龙脑加
入量//mg
0.300
0.300
0.300
0.300
0.300
0.300
0.300
0.300
0.300
0.300
0.300
0.300
总龙脑测
得量//mg
0.418
0.423
0.416
0.425
0.421
0.419
0.428
0.423
0.425
0.427
0.423
0.423
回收
率//％
96.33
98.00
95.67
98.67
97.33
96.67
98.33
97.00
97.67
98.33
97.00
98.33
平均回
收率//％
97.11
97.78
RSD
％
1.14
0.67
10 20 30 40 50 60 70 80 90 10
0
11
0
12
0
13
0
14
0
15
0
16
0
9 000
8 000
7 000
6 000
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4 000
3 000
2 000
1 000
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度
图 3 龙脑标准品质谱图
10 20 30 40 50 60 70 80 90 10
0
11
0
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0
13
0
14
0
15
0
16
0
9 000
8 000
7 000
6 000
5 000
4 000
3 000
2 000
1 000
0
丰
度
图 4 样品中龙脑质谱图
表 1 龙脑对照品线性考察结果
编号
1
2
3
4
5
对照品溶液//mg/mL
0.02
0.03
0.04
0.05
0.06
出峰时间//min
7.625
7.621
7.621
7.624
7.621
峰面积
34.720 5
47.889 4
62.326 2
84.461 2
103.614 3
图 5 龙脑标准曲线图
3.50e+0.05
3.00e+0.05
2.50e+0.05
2.00e+0.05
1.50e+0.05
1.00e+0.05
5.00e+0.04
响
应
值
0.00 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06
浓度//mg/mL
5258
第 21 期
需要所有的光谱数据都参与校正，而只用某些光谱区
间就可以得到很好的校正效果，这样可以减少参与
建模的数据量，降低不相关区间的噪音干扰。因此，需
要对不同波段进行比较，以选择最好的建模波段。
按照文献［7］的规定，需要使用烘干法对巴戟
天药材中水分进行测定，但该法操作繁琐，耗时较
长，受到多种条件限制。 本研究利用近红外光谱技
术结合化学计量学建立了巴戟天水分的定量模型
后，仅需要采集样品的近红外光谱，并代入近红外
模型中，便可马上得到药材的水分含量。 与传统水
分测定方法相比，本研究所建立的利用近红外光谱
测定巴戟天中水分含量的方法， 具有操作简单、测
定速度快、对药材无损等优势，可应用于中药质量
控制及相关方面。
参考文献：
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品，2006，8（5）：45－46．
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出版社，2006．
（责任编辑 胡西洲）
（上接第 5255页）
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
2.6 样品含量的测定
从表 5 可以得出艾纳香组培苗中龙脑的平均
含量为 3.216 7 mg/g，贵州罗甸艾纳香野生苗中龙脑
的平均含量为 3.620 0 mg/g。
3 小结与讨论
在拟定的色谱条件下，以无水乙醇作为艾纳香
中龙脑的提取溶剂，采用超声提取，简化了样品的
制备方法，而且艾纳香中龙脑的含量测定没有受到
其他成分的干扰。 气质联用仪用于检测挥发性物质
灵敏度高、准确度好。 运用该方法，在对照品标准溶
液中，色谱图中龙脑出峰的时间在 7．621 min，愈伤
组织的色谱分析显示， 在该时间处没有吸收峰，这
说明愈伤组织中不存在龙脑。 组培苗、罗甸野生苗
质谱图分析确定是龙脑，其中组培苗中龙脑的含量
较野生苗低，但差异不大，原因可能是组培苗培养
时间较短， 龙脑在植物体内有一个逐步累积的过
程。 但组培苗可以人工快速培育繁殖，缩短培育周
期，为艾纳香药材应用提供大量的苗木，以满足日
益增长的市场需求。
参考文献：
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版社，1979．
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［7］ 江兴龙，潘俊锋，司 健，等．艾纳香人工栽培技术［J］．林业科技
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［8］ 何元农，丁 映，曾令祥，等．影响艾纳香移栽成活率的因素分析
及技术对策［J］．贵州农业科学，2005，33（3）：40－43．
（责任编辑 胡西洲）
表 5 组培苗与罗甸野生苗中龙脑的含量
种类
组培苗（7 个月）
罗甸野生苗
进样
次数
1
2
3
1
2
3
龙脑含量
mg/g
3.237 5
3.225 0
3.187 5
3.650 0
3.550 0
3.650 0
龙脑平均含量
mg/g
3.216 7
3.620 0
RSD
％
0.81
1.60
严 敏等：气质联用法对艾纳香中龙脑含量的测定 5259