全 文 ：檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
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［责任编辑 聂淑琴］
［收稿日期］ 20120710(010)
［基金项目］ 2010 年度中医药英才基金(2010 年甘肃省中医药科研立项课题) (GZK-2010-52) ;甘肃省中医药管理局基金项目(GZK-
2008-31)
［第一作者］ 王志旺，副教授，硕士，从事中藏药药理与毒理学研究，Tel:13893224972，E-mail:wzw0933@ 126． com．
［通讯作者］ * 郭玫，教授，硕士生导师，从事中藏药有效成分与质量标准研究，Tel:0931-8765394，E-mail:guomeig@ sina． com
甘肃产藏药五脉绿绒蒿总黄酮
对小鼠实验性肝损伤的保护作用
王志旺1，2，王瑞琼1，郭玫1，3* ，邵晶1，3，任远1，2
( 1. 甘肃中医学院药学系，兰州 730000; 2. 甘肃省中药药理与毒理学重点实验室，兰州 730000;
3. 甘肃省高校中( 藏) 药化学与质量研究省级重点实验室，兰州 730000)
［摘要］ 目的:研究甘肃产藏药五脉绿绒蒿总黄酮对小鼠实验性肝损伤的保护作用。方法:取小鼠 55 只，按性别体重随
机分为 5 组;各组分别灌胃五脉绿绒蒿总黄酮(0. 300，0. 150，0. 075 g·kg －1)以及对照液 20 mL·kg －1;末次给药 1 h后，模型对
照组及各给药组腹腔注射四氯化碳(CCl4)15 mg·kg
－1、扑热息痛(AP)150 mg·kg －1或硫代乙酰胺(TAA)500 mg·kg －1，16 h
后采集标本，测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)与天冬氨酸转氨酶(AST)、肝组织中丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶
(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性。结果:0. 150 ～ 0. 300 g·kg －1的甘肃产藏药五脉绿绒蒿总黄酮能降低 CCl4，
TAA或 AP诱发肝损伤小鼠的血清 ALT和 AST(P ＜ 0. 01) ，提高 CCl4 或 TAA诱发肝损伤小鼠肝组织 SOD 与 GSH-Px 的活性
(P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01) ，降低 CCl4 或 AP诱发肝损伤小鼠肝组织 MDA的含量(P ＜ 0. 01) ;同时在 0. 075 ～ 0. 300 g·kg
－1，甘肃产
藏药五脉绿绒蒿总黄酮的肝损伤保护作用显示出一定的量-效关系。结论:甘肃产藏药五脉绿绒蒿总黄酮对 CCl4，AP，TAA造
成的小鼠急性肝损伤具有一定的保护作用。
［关键词］ 五脉绿绒蒿;总黄酮;急性肝损害
［中图分类号］ R285. 5 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)02-0206-04
Study on Liver Protection of Total Flavones
of Meconopsis quintuplinervia from Gansu Province in Mice
WANG Zhi-wang1，2，WANG Rui-qiong1，GUO Mei1，3* ，SHAO Jing1，3，REN Yuan1，2
(1. Pharmacy Department of Gansu College of Traditional Chinese Medicine (TCM) ，Lanzhou 730000，China;
2. Key Laboratory of Pharmacology and Toxicology for TCM of Gansu Province，Gansu College
·602·
第 19 卷第 2 期
2013 年 1 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 2
Jan．，2013
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2013.02.006
of TCM，Lanzhou 730000，China;3. Key Laboratory of Chemistry and Quality for TCM of the College
of Gansu Province，Gansu College of TCM，Lanzhou 730000，China)
［Abstract］ Objective:To investigate the liver protection of total flavones of Meconopsis quintuplinervia
Regel (MQR)from Gansu Province in mice． Method:Fifty-five Kunming mice were randomly divided into five
groups that were orally administered the total flavones of MQR (0. 300，0. 150，0. 075 g·kg －1)or contrast
solution once per day for 7 d． Except normal mice，all the other mice were injected intraperitoneally 0. 15%
carbon tetrachloride (CCl4) ，1. 5% paracetamol (AP)or 5% thioocetamide (TAA) once． All mice were
executed after 16 h and collected serum and liver samples for determining alanine aminotransferase (ALT)and
aspirate aminotransferase (AST) in serum and malondialdehyde (MDA) ，superoxide dismutase (SOD)and
glutathion peroxidase (GSH-Px)in liver． Result:The total flavones of MQR growing in Gansu Province can
degrade the levels of ALT and AST in serum and MDA in hepatic tissue，upgrade the SOD and GSH-Px activity in
hepatic tissue． Furthermore，their protective effects exhibit the dose-effect relationship． Conclusion:The total
flavones of MQR from Gansu Province have some protective effects on acute hepatic injury induced by CCl4，AP or
TAA in mice．
［Key words］ Meconopsis quintuplinervia;the total flavones;liver injury
甘肃产罂粟科绿绒蒿属藏药五脉绿绒蒿
(Meconopsis quintuplinervia Regel，MQR) ，主要分布
于甘南高原、祁连山地及中部黄土高原的最高
峰———马衔山，系藏药欧贝的正品，在 30 多个藏药
复方中配伍使用;其味甘、涩，性凉，具有清热解毒、
止痛利尿等功效，临床用于治疗肝炎、肺炎、肝与肺
的热症、水肿等病症［1］。本课题组前期研究显示甘
肃产藏药五脉绿绒蒿及其总黄酮具有明显的镇痛抗
炎［2］、体外抗氧化［3］等作用;本次研究分别设计了
甘肃产藏药五脉绿绒蒿总黄酮对四氯化碳(CCl4)、
硫代乙酰胺(TAA)及扑热息痛(AP)诱发小鼠急性
肝损伤模型的影响，探讨甘肃产藏药五脉绿绒蒿总
黄酮的保肝作用及其作用机制，为临床用药提供理
论依据。
1 材料
1. 1 药物与试剂 甘肃产藏药五脉绿绒蒿
(Meconopsis quintuplinervia Regel)全草购自甘肃省合
作市藏医院，经甘肃省定西市临洮农校卢通宁高级
讲师鉴定。四氯化碳(CCl4) ，广东汕头市西陇化工
厂生产，批号 20100912;硫代乙酰胺(TAA) ，天津市
大茂化学试剂厂生产，批号 20090415;扑热息痛
(AP) ，上海化学试剂公司，批号 20110128。丙氨酸
转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙二醛
(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化
物酶(GSH-Px)试剂盒，均为南京建成生物工程研究
所提供。其余试剂均为分析纯。
1. 2 仪器 722 型分光光度计(上海第三分析仪器
厂产品) ，BS1103 型 Sartorius电子天平(北京赛多利
斯天平有限公司) ，HH-S 型恒温水浴锅(金坛市正
基仪器有限公司) ，TGL-16G 高速冷冻离心机(上海
安亭科学仪器厂)。
1. 3 动物 昆明种小鼠，SPF级，雌雄兼用，体质量
(20 ± 2)g，由甘肃中医学院实验动物中心提供，实
验动物许可证号 SCXK(甘)2011-0001。
2 方法
2. 1 甘肃产藏药五脉绿绒蒿总黄酮的制备 称取
甘肃产藏药五脉绿绒蒿全草粗粉适量，用 95%乙醇
回流提取，减压回收乙醇后用石油醚萃取脂溶性较
强的杂质，残留物用 1 mol·L －1 HCl溶液溶解，调 pH
2 ～ 3，过滤，残留物即为黄酮类粗品。将上述黄酮粗
品用 1 mol·L －1 NaOH 溶液溶解，调 pH 至9 ～ 10，过
滤，碱水层再用 1 mol·L －1 HCl 溶液调 pH 至 2 ～ 3，
用乙酸乙酯萃取数次，合并乙酸乙酯，减压浓缩即得
五脉绿绒蒿总黄酮［4］。精密称取上述五脉绿绒蒿
总黄酮适量置研钵中，定量加入聚氧乙烯山梨糖醇
酐单油酸酯(吐温-80) ，采用干胶法按“油∶胶∶水2∶
1∶ 2”的比例制备初乳，适当稀释即得五脉绿绒蒿总
黄酮乳剂;另取适量吐温-80 制备 0. 5%的溶液作为
对照液，冷藏备用。
2. 2 对 CCl4 所致小鼠急性肝损伤的影响
［5-7］ 取
小鼠 55 只，按性别体重随机分为 5 组，各给药组动
物 ig甘肃产藏药五脉绿绒蒿总黄酮(0. 300，0. 150，
0. 075 g·kg －1)20 mL·kg －1，每日 1 次，正常对照组
和模型对照组 ig 等量对照液，连续 7 d。末次给药
·702·
王志旺，等:甘肃产藏药五脉绿绒蒿总黄酮对小鼠实验性肝损伤的保护作用
1 h后，模型对照组及各给药组 ip 0. 15% CCl4 花生
油溶液 10 mL·kg －1(15 mg·kg －1) ，正常对照组 ip等
量花生油。禁食(不禁水)16 h 后，称重，眼眶采血，
取血清测定 ALT，AST;脱颈椎处死小鼠，取出完整
肝脏，称重，计算肝脏指数;取肝组织适量制成 10%
匀浆液，按试剂盒说明书测定肝组织 SOD 活性及
MDA含量。
2. 3 对 TAA所致小鼠急性肝损伤的影响［6］ 取小
鼠 55 只，按 2. 2 项下方法分组、给药。末次给药 1 h
后，模型对照组及各给药组 ip 5% TAA 溶液 10
mL·kg －1(500 mg·kg －1) ，正常对照组 ip 等量蒸馏
水。禁食(不禁水)16 h 后，眼眶采血，测定血清
ALT，AST 活性;脱颈椎处死小鼠，取新鲜肝脏组织
制成 10% 匀浆液，按试剂盒说明书测定肝组织
GSH-Px活性。
表 1 甘肃产藏药五脉绿绒蒿总黄酮对 CCl4 所致小鼠急性肝损伤的影响 (珋x ± s，n = 11)
组别 剂量 / g·kg －1 ALT /U·L －1 AST /U·L －1 肝脏指数 /mg·g － 1 SOD /U·mg －1 MDA /mol·g － 1
正常对照 － 45． 08 ± 4． 772) 124． 08 ± 19． 802) 38． 95 ± 4． 102) 161． 67 ± 20． 692) 7． 58 ± 1． 242)
模型对照 － 150． 43 ± 24． 37 250． 18 ± 30． 08 47． 24 ± 5． 72 120． 69 ± 16． 21 13． 65 ± 2． 27
五脉绿绒蒿黄酮 0． 300 94． 05 ± 12． 862，4) 186． 75 ± 20． 412，4) 40． 93 ± 4． 731) 146． 01 ± 19． 602) 8． 43 ± 1． 842，4)
0． 150 110． 70 ± 18． 412，3) 199． 23 ± 24． 962) 41． 59 ± 5． 041) 139． 85 ± 18． 691) 10． 52 ± 1． 982，3)
0． 075 127． 55 ± 21． 571) 220． 72 ± 28． 401) 44． 29 ± 5． 54 131． 54 ± 17． 23 11． 13 ± 2． 121)
注:与模型对照组比较1)P ＜ 0. 05，2)P ＜ 0. 01;与黄酮低剂量组比较3)P ＜ 0. 05，4)P ＜ 0. 01(表 2 ～ 3 同)。
表 2 甘肃产藏药五脉绿绒蒿总黄酮对 TAA所致小鼠急性肝损伤的影响(珋x ± s，n = 11)
组别 剂 量 / g·kg －1 ALT /U·L －1 AST /U·L －1 GSH-Px /U·mg －1
正常对照 － 60． 58 ± 12． 522) 132． 68 ± 22． 332) 52． 37 ± 10． 842)
模型对照 － 171． 12 ± 20． 48 261． 35 ± 31． 99 34． 23 ± 6． 53
五脉绿绒蒿黄酮 0． 300 109． 22 ± 15． 482，4) 195． 96 ± 25． 462，4) 43． 94 ± 8． 152)
0． 150 131． 48 ± 18． 832，4) 209． 32 ± 25． 732) 40． 99 ± 7． 021)
0． 075 142． 41 ± 18． 962) 231． 25 ± 28． 621) 38． 71 ± 6． 78
2. 4 对 AP所致小鼠急性肝损伤的影响［8］ 取小
鼠 55 只，按 2. 2 项下方法分组、给药。末次给药 1 h
后，模型对照组及各给药组 ip 1. 5% AP 溶液 10
mL·kg －1(150 mg·kg －1) ，正常对照组 ip 等量蒸馏
水。禁食(不禁水)16 h 后，眼眶采血，测定血清
ALT，AST 活性;脱颈椎处死小鼠，取新鲜肝脏组织
制成 10%匀浆液，按试剂盒说明书测定肝组织 MDA
的含量。
2. 5 数据处理 实验数据以 珋x ± s 的形式表示，组
间比较采用单因素方差分析，应用 SPSS 11. 5 统计
软件进行统计学处理，P ＜ 0. 05 有统计学意义。
3 结果
3. 1 对 CCl4 所致小鼠急性肝损伤的影响 与正常
对照组比较，模型对照组血清 ALT 与 AST 含量、肝
脏指数以及肝组织 MDA 的含量明显升高，肝组织
SOD的活性明显降低(P ＜ 0. 01) ，显示 CCl4 致小鼠
急性肝损伤模型复制成功;与模型对照组比较，甘肃
产藏药五脉绿绒蒿总黄酮各剂量组对实验各项指标
有不同程度的改善作用且显示出一定的量-效关系。
见表 1。
3. 2 对 TAA所致小鼠急性肝损伤的影响 TAA引
起小鼠 ALT，AST，GSH-Px 明显变化(P ＜ 0. 01) ;甘
肃产藏药五脉绿绒蒿总黄酮能明显减低血清 ALT
与 AST的水平，提高肝组织 GSH-Px的活性;同时随
着剂量的加大，甘肃产藏药五脉绿绒蒿总黄酮对
ALT与 AST的降低作用增强，显示出一定的量-效关
系。见表 2。
3. 3 对 AP 所致小鼠急性肝损伤的影响 AP 引起
小鼠急性肝损伤:与正常对照组，模型对照组血清
ALT、AST 与肝组织 MDA 的含量明显升高(P ＜
0. 01)。甘肃产藏药五脉绿绒蒿总黄酮能明显改善
上述指标，即减低 ALT，AST与 MDA的含量;其改善
作用显示出一定的量-效关系。见表 3。
4 讨论
藏药五脉绿绒蒿的记载可追溯到藏医古籍《月
王药诊》，作为藏药应用已有千余年的历史;本属植
物的化学成分研究始于 20 世纪 60 年代的捷克布尔
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第 19 卷第 2 期
2013 年 1 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 2
Jan．，2013
表 3 甘肃产藏药五脉绿绒蒿总黄酮对 AP所致小鼠急性肝损伤的影响 (珋x ± s，n = 11)
组别 剂量 / g·kg －1 ALT /U·L －1 AST /U·L －1 MDA /mol·g － 1
正常对照 － 75. 27 ± 10. 062) 138. 39 ± 20. 412) 7. 83 ± 1. 682)
模型对照 － 182. 88 ± 21. 75 272. 83 ± 31. 08 15. 19 ± 2. 25
五脉绿绒蒿黄酮 0. 300 144. 75 ± 18. 732，4) 210. 42 ± 26. 742，3) 9. 09 ± 1. 872，4)
0. 150 155. 02 ± 18. 992) 221. 18 ± 29. 792) 10. 94 ± 1. 992，3)
0. 075 172. 14 ± 20. 97 240. 30 ± 30. 941) 12. 93 ± 2. 071)
诺 Masarykova 大学的 J． Slavik，现研究显示藏药五
脉绿绒蒿主要含有黄酮类、生物碱类化合物以及少
量挥发油和油脂类等成分，但对其生物活性的研究
涉及甚少［9］。本研究组以甘南高原所产藏药五脉
绿绒蒿为研究对象，运用现代提取分离技术与药理
活性相结合的方法，对甘肃产藏药五脉绿绒蒿的药
效物质基础展开研究，部分实验结果已进行了报
道［2-3］;本次研究在绿绒蒿治疗肝炎、肝的热症等藏
医临床应用的指导下，结合前期研究的基础，探讨甘
肃产藏药五脉绿绒蒿总黄酮的保肝降酶活性。
在肝损伤模型的复制中，利用四氯化碳
(CCl4)、硫代乙酰胺(TAA)以及扑热息痛(AP)等
化学物质的氧化性损伤是复制动物模型的经典方
法［10］。一般认为，CCl4 在肝脏经细胞色素 P450 激
活为自由基·CCl3，后者与细胞膜脂质和蛋白质结
合，引起膜结构与功能的破坏而导致肝损伤，同时自
由基·CCl3可加速 Ca
2 +内流、细胞内“钙超负荷”而
导致肝细胞坏死;TAA 经代谢生成亲电子活性基团
产物而干扰细胞核内 RNA转移、影响蛋白质合成与
酶的活性，小剂量 TAA 可诱发肝细胞凋亡，大剂量
可导致肝脂质氧化和小叶中央坏死;AP经代谢可生
成活性中间代谢物 N-乙酰对苯醌亚胺，后者具有强
大的氧化作用，使生物膜系统发生脂质过氧化，干扰
细胞内的能量代谢，导致肝细胞变性坏死。本次研
究利用上述化合物复制肝损伤模型，实验结果显示，
0. 150 ～ 0. 300 g·kg －1甘肃产藏药五脉绿绒蒿总黄
酮能降低 CCl4，TAA 与 AP 诱发肝损伤小鼠血清中
的 ALT，AST(P ＜ 0. 01) ，降低 CCl4 致肝损伤小鼠的
肝脏指数(P ＜ 0. 05) ;在肝组织抗氧化酶及氧化产
物的研究中，甘肃产藏药五脉绿绒蒿总黄酮能明显
降低受损肝组织 MDA的含量，提高 SOD与 GSH-Px
的活性(P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01)。研究结果提示甘肃产
藏药五脉绿绒蒿总黄酮具有一定的保肝降酶活性，
这可能与提高肝细胞抗氧化能力有关，至于具体作
用机制尚需进一步研究。
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［责任编辑 聂淑琴］
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王志旺，等:甘肃产藏药五脉绿绒蒿总黄酮对小鼠实验性肝损伤的保护作用