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(收稿2016-01-22;修回2016-04-15)
*陕西省中医管理局中医药科研课题(JC17)
▲通讯作者
△陕西中医药大学(咸阳712046)
野生和人工培育陕重楼对荷瘤小鼠实体瘤及免疫因子的影响*
宋延平 许建秦▲ 张宇晨△ 王 磊△ 赵林涛 陕西省中医药研究院(西安710003)
摘 要 目的:探讨野生和人工培育陕产重楼的抑瘤及免疫作用。方法:采用小鼠移植瘤模型,观察
野生和人工培育陕重楼水提液灌胃14d对小鼠 H22实体瘤瘤重及血清中IL-2、TNF-a、NK
的活性的影响。结果:野生陕重楼及人工培育陕重楼2.46、1.23、0.615g/kg剂量对小鼠 H22
实体瘤均表现出明显抑瘤作用,2.46、1.23g/kg剂量使血清中NK含量明显提高,野生陕重
楼2.46、1.23g/kg明显提高荷瘤小鼠血清TNF-α含量。结论:野生和人工培育陕重楼对小
鼠 H22实体瘤均有明显抑制作用、可明显提高NK含量,提高血清中TNF-α含量。
主题词 重楼 实验,动物 免疫因子 @实体瘤
【中图分类号】 R282 【文献标识码】 A doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.09.069
重楼具有很高的药用价值,最早以蚤休之名载于《神农本
草经》,具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊作用,用于疔肿痈
肿,咽喉肿痛,跌扑伤痛,惊风抽搐[1]。陕产重楼主要是百合科
植 物 七 叶 一 枝 花 Paris polyphyla Smith var.chinensis
(Franch.)Hara的干燥根茎,又名灯台七,分布于秦岭、太白山
等地区[2]。目前,陕西药市上供应的基本为野生重楼,但野生
重楼繁殖率低,两年发育一次,生长速度缓慢,加之过分采挖,
野生重楼供不应求[3]。近来我们培育了一些人工陕重楼,但
培育出的人工陕重楼药用价值如何,并没有经过药效研究,本
文就野生和人工培育陕重楼的抗肿瘤及免疫作用进行了初步
的研究。
1 材 料 1.1 动 物 KM 小鼠,由西安交大及第四
军医大学实验动物中心提供,雌雄兼用,合格 证 号:No.
6100170000538、No.0015413、No.0015425。小鼠 H22细胞株,由
第四军医大学实验动物中心引进。
1.2 仪 器 注射用环磷酰胺(山西普德药业股份有限
公司);普通光学显微镜(日本olympus公司);SW-CJ-2D型双
人净化工作台(苏州净化设备有限公司)。ELISA酶联免疫反
2521 陕西中医2016年第37卷第9期
应试剂盒(南京建成生物科技有限公司)。
1.3 试 药 野生重楼(七叶一枝花)购自西安市药材市
场,人工培育陕重楼由陕西省宝鸡市太白县塘口村药材培育基
地提供,均由陕西中医药大学药学院生药教研室王继涛高级实
验师鉴定,均制成1g/ml水提液。药典规定重楼人用量为3~
9g,平均用量为6g,按人和小鼠的体表面积换算成小鼠的剂量
1.23g/kg,即为小鼠所用的中剂量,则大剂量与小剂量分别为
2.46g/kg、0.615g/kg。
2 方 法 按文献[4-6]方法,取小鼠90×3只,每批实验
单一性别,随机分为8组,分别为荷瘤对照组20只、环磷酰胺
组10只(30mg/kg ip)、野生陕重楼2.46、1.23、0.615g/kg剂量
组各10只(ig)和人工培育陕重楼2.46、1.23、0.615g/kg剂量组
各10只。将瘤株复苏,接种,选取接种7~10d的健康瘤源小
鼠,断颈处死,制备瘤细胞悬液(1×107/ml),以上均无菌操作。
每只小鼠右前肢腋窝皮下接种0.2ml瘤细胞悬液。次日给药,
除环磷酰胺隔天给药外,其他各组每天给药1次,连续给药
14d。末次给药后次日,小鼠麻醉后按眼球摘除法取血,离心取
上清,用酶联免疫测定法(ELISA试剂盒操作)测定血清中IL-
2、TNF-a、NK的活性。处死小鼠,剖取瘤块称重,计算抑瘤率。
抑瘤率=(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤
重×100%。实验重复3次,每次实验检测一项免疫指标。
3 结 果 与对照组比较,野生及人工陕重楼2.46、1.
23、0.615g/kg剂量均能明显减小瘤体的重量(P<0.01),野生
的平均抑瘤率分别为48.57%、43.88%、31.82%;人工的平均抑
瘤率分别为51.53%、46.20%、34.88%。环磷酰胺与对照组比
较IL-2、TNF-α、NK含量均明显下降(P<0.01或P<0.05);野
生及人工陕重楼与对照组比较小鼠血清中IL-2含量无明显变
化;野生陕重楼2.46、1.23g/kg与对照组比较血清中TNF-α含
量明显增加(P<0.01或P<0.05);野生及人工陕重楼2.46、1.
23g/kg与对照组比较均能明显提高血清中 NK含量(P<0.01
或P<0.05)。同剂量野生及人工陕重楼抑瘤作用及血清中
IL-2、TNF-α、NK含量无明显差异。提示野生与人工陕重楼均
能明显抑制 H22小鼠瘤体的生长,均能明显提高 H22小鼠血清
中NK活性,野生陕重楼尚能明显提高血清中TNF-α含量。
表1 野生和人工培育陕重楼对小鼠 H22实体瘤及免疫因子的影响
组 别 给药剂量(g/kg) 瘤重(g) 抑制率(%) IL-2(pg/ml) TNF-α(pg/ml) NK(U/ml)
荷瘤对照 - 1.136±0.393 - 215.39±16.56 98.86±6.90 235.22±10.10
环磷酰胺 0.03 0.215±0.111 81.11 192.86±31.24△ 92.53±7.01△ 220.41±9.42▲
野生重楼 2.46 0.584±0.233 48.57 213.13±12.67 109.37±5.57▲ 248.18±10.95▲
野生重楼 1.23 0.637±0.255 43.88 212.23±14.45 105.01±4.28△ 246.69±13.99△
野生重楼 0.615 0.774±0.227 31.82 207.97±15.58 99.24±9.09 240.53±16.38
人工重楼 2.46 0.551±0.195 51.53 216.09±17.03 104.70±8.62 250.21±10.40▲
人工重楼 1.23 0.611±0.223 46.20 211.02±17.15 99.32±15.46 243.48±6.28△
人工重楼 0.615 0.740±0.237 34.88 208.01±14.88 95.17±3.30 242.12±11.89
注:与荷瘤组比较,△P<0.05,▲P<0.01
4 讨 论 陕重楼的生长环境遭到破坏,植物繁殖率低,
资源再生较慢,各产区药材蕴藏量普遍下降,部分品种已濒临
灭绝。2016年3月4日,国务院办公厅《关于促进医药产业健
康发展的指导意见》中指出,要大力加强地道中药材的种植,并
制定相应的种植培育标准,提高人工中药材的质量,对野生中
药材开展生态环境影响评估。临床上普遍认为野生中药材的临
床效果要好于人工培育品种,本研究也表明了这一点。虽然野
生和人工培育陕重楼对 H22小鼠实体瘤均具有明显的抑制作
用,对血清中NK含量均具有明显提高作用,但野生陕重楼明
显提高 H22小鼠血清中TNF-α含量,而人工培育陕重楼对血清
中TNF-α含量无明显提高。说明人工培育陕重楼和野生陕重
楼的成分可能有一定的差异,有待于进一步研究,也有待改进
人工栽培技术。关于野生和人工培育重楼的其他方面的药效
比较有待于进一步研究。
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(收稿2016-04-21;修回2016-06-12)
3521陕西中医2016年第37卷第9期