全 文 ：云南大学学报 (自然科学版) 　1998 , 20 (2):139 ～ 141　　　　　　　　　　CN 53-1045/ N　ISSN 0258_7971
Journal of Yunnan University
蘑芋精粉对小鼠免疫器官和细胞因子水平的影响①
王　玲1)　王国燕2)　邓学瑞1)　张才军1)　谢蒲伶1)　吴虢东1)
(1)昆明医学院微生物学与免疫学教研室;2)昆明医学院药学系药理学教研室 ,昆明 , 650031;第一作者 36 岁 , 女 ,副教授)
摘要　AKP(Amorphophallus konjac K Kohn Powder)具有明显促进小鼠免疫功能的作用 , 对胸腺指数和脾
指数具有增高作用.将小鼠 MΥ用 LPS(10 μg/m L)孵育 18 ～ 24 h 后 ,培养上清 IL-1 和 TNF-α水平均随 AKP
浓度的增加而增加 , 表明 LBP2 对 MΥ合成和释放 IL-1、TNF-α具明显促进作用.此外 , AKP 对小鼠血清中
TNF-α水平也有一定的促进作用.
关键词　AKP , 免疫器官 , IL-1 , TNF-α
分类号　R392
　　蘑芋精粉(Amorphophallus konjac K Kohn
Powder ,AKP)是从蘑芋(Amorphophallus konjac ,K
Kohn)块茎加工提取的 ,主要成分为葡甘露聚糖
(Glucomannan).此聚糖可降胆固醇 、降血糖 、利便
减肥 、抑制小鼠自发性肿瘤和大鼠二甲肼诱发结肠
癌 ,对小鼠甲基硝基亚硝基胍(MNNG)诱发的肺
癌可产生不同程度的抑制和预防作用[ 1] .为了进
一步研究 AKP 的抗肿瘤机制 ,本文首次从器官水
平和因子水平研究了 AKP的免疫调节作用.
1　材料与方法
1.1　试剂与药品 　RPM I-1640 培养基 ,脂多糖
(LPS), MTT 为美国 Sigma 产品 , 三联溶解液:
10%SDS-5%异丁醇-0.012 mol/L HCL(W/V/
V),TNF-α酶标试剂盒购自北京邦定试剂公司 ,小
牛血清为中国医学科学院血液研究所产品.AKP
为云南大学生物系微生物学教研室丁骅孙教授惠
赠 ,溶于 NS后过滤除菌 ,分装冻存备用.
1.2　实验动物　ICR小鼠 ,(24±2)g ,雌雄皆用 ,
购于云南省天然药物药理重点实验室.小鼠随机分
为四组:NS 对照组 、AKP 三个剂量给药组(50 ,
100 ,300 mg/kg .d).Balb/c小鼠 ,(23±2)g ,雄性 ,
上海实验动物中心供应(云南大学生物系细胞生物
学教研室马兰老师惠赠).
1.3　给药方法　整体给药 ,临用前用生理盐水配
成液体 ,充分混匀后每只小鼠 1 g.每天一次 ,连续
7 d ,第 8天进行免疫学指标的测定.
1.4　AKP对小鼠免疫器官质量的影响　按文献
[ 2]进行.
1.5　小鼠腹腔巨噬细胞的制备　取 ICR小鼠 ,无
菌收集腹腔渗出细胞(PEC),同组合并后用 RPM I-
1640培养液洗 2次 ,将细胞悬浮于含 10%小牛血
清 RPM I-1640 完全培养基中 , 调整细胞浓度到 2
×106/mL ,接种至培养板上 ,于 37℃,5%CO2 完全
湿度条件下培养 2 ～ 3 h ,然后洗去未贴壁细胞 ,得
到 MΥ单层.
1.6　IL-1的诱生与检测[ 3] 　将上述 PEC 悬液 ,按
每孔 1 mL 加到 24孔培养板上 ,得到 MΥ单层 ,于
各孔中加入 LPS(终浓度为 10 μg/mL),培养 24 h
后收获上清 ,作为 I L-1样品.
IL-1 活性的测定用 ConA(2.5 μg/mL)活化
的 Balb/c小鼠胸腺细胞增殖 MTT 法[ 4 , 5] .
1.7　TNF-α的检测
1.7.1　血清 TNF-α的检测　小鼠摘除眼球取血 ,
制备血清 , -70℃冻存 , 作为血清 TNF-α待测样
品.
1.7.2　TNF-α的诱生与检测[ 6] 　基本同 IL-1 ,只
是用无小牛血清的培养液培养 18 h 后收上清 ,作
为 TNF-α的待测样品.
1.7.3　TNF-α的测定　用 TNF-α酶标试剂盒 ,按
① 云南省教委科研基金资助项目.1997-12-10收稿
说明书进行.用 ELISA 仪(美国产 Biolek EL-340
型 , 云南省天然药物药理重点实验室提供)测
OD570 nm值 , TNF-α含量以 ng/mL表示.
1.8　统计分析　所有数据均用 t 检验表示组间的
差异.
2　结果
2.1　AKP 对小鼠免疫器官重量的影响　给药 7 d
后 ,取出脾脏和胸腺并称重 ,结果见表 1.从表 1可
看出 ,AKP给药组小鼠脾指数和胸腺指数不同程
度的高于 NS 对照组 ,其中 AKP 对脾指数的影响
以300 mg/kg.d最为明显(P <0.01);而对胸腺
指数的影响 , 50 mg/kg.d 无显著性(P >0.05),
100 mg/kg .d 和 300 mg/kg.d 组具高度显著性
(P<0.001).
表 1　AKP 对小鼠免疫器官重量的影响
Tab 1.The effect of AKP on immune organ o f mice　 x±s
组别 剂量/mg.kg -1.d-1
脾脂数
mg/ 10
脾脂数
mg/ 10
NS 对照组 - 70.53±11.49 34.06±3.10
AKP 组 50 82.75±7.22＊ 33.96±1.991)
100 82.69±7.32＊40.49±2.15＊＊＊
300 90.00±2.00＊＊41.71±1.85＊＊＊
n=10 1)P>0.05 , *P<0.05 , ＊＊P<0.01 , ＊＊＊P<0.001 ,
与 NS 对照组比较
表 2　AKP对小鼠 MΥ产生 IL-1 的影响(IL-1 样品 1:8 稀
释)
Tab 2.The effect of AKP on the release of IL-1 from murine
peritoneal macrophages (The sample of IL-1 at 1:8
dilusion)
组别 剂量/mg.kg -1.d-1 　　A570 nm( x±s)
NS 对照组 - 0.135±0.0058
AKP组 50 0.223±0.0080＊＊＊
100 0.296±0.0044＊＊＊
300 0.445±0.0146＊＊
n=6　＊＊P<0.01 , ＊＊＊P<0.001 ,用药组与 NS 对照组比较
2.2　AKP对小鼠MΥ产生 IL-1 的影响　ICR小
鼠腹腔 MΥ在 LPS(10 μg/mL)的刺激下可诱生出
较高水平的 IL-1 ,结果见表 2 ,AKP 不同剂量组均
可促进 I L-1 的合成和释放 , 以 50 mg/kg .d 及
100 mg/kg.kg 最明显(P<0.001).
2.3　AKP对小鼠血清及 MΥ产生 TNF-α的影响
小鼠血清中和腹腔 MΥ产生的 TNF-α用药组均高
于 NS对照组 ,特别是用无血清培养液培养 18 h
的腹腔 MΥ,可分泌出较高水平的 TNF-α,结果见
表 3所示.
表 3　AKP对小鼠 TNF-α的影响
Tab 3.The effect of AKP on the level of TNF-α
组别 剂量/mg.
kg -1.d-1
TNF-α含量/ ng.mL-1)
　 血清 腹腔 MΥ培养上清
NS对照组 - 0.206±0.0087 0.267±0.0161
AKP 组 50 0.326±0.0174＊＊ 0.430±0.136＊＊
100 0.470±0.0216＊＊ 0.551±0.0144＊＊＊
300 0.508±0.004＊＊ 0.592±0.0162＊＊＊
n=6　＊＊P<0.01 , ＊＊＊P<0.001 ,用药组与 NS对照组比较
3　讨论
AKP 的有效成分为葡甘露聚糖 ,其能抑制小
鼠自发性肝肿瘤和大鼠二甲肼诱发的结肠癌[ 1] ,
对小鼠甲基硝基亚硝基胍(MNNG)诱发的肺癌可
产生不同程度的抑制和预防作用[ 7] .为了进一步
开发和利用 AKP 的抗癌作用 ,本文进一步从器官
和因子水平研究了 AKP 的免疫调节作用.研究表
明 ,AKP 对免疫器官 、IL-1及 TNF-α具有上调作
用.
IL-1是一种作用非常广泛的细胞因子 ,体内
至少有 20多种细胞能分泌 IL-1 ,但 MΥ是 IL-1产
生的主要来源 , LPS 可诱导体外培养的 MΥ产生
IL-1.本文首次研究了 AKP 对 IL-1 产生的影响 ,
结果表明 ,AKP 可明显促进 LPS活化的小鼠腹腔
MΥ产生 I L-1.I L-1 具有多种生物学效应[ 6] ,作用
于多种免疫细胞 ,可辅助 T 细胞活化 ,分泌 IL-2 ,
IL-6及表达 IL-2R;IL-1不仅是 B细胞增殖及分化
因子 ,也是 MΥ趋化因子 , IL-1对某些肿瘤细胞也
有杀伤和抑制作用.AKP 的免疫调节和抗肿瘤作
用与此密切相关.
肿瘤坏死因子(tumo r necrosis factor , TNF)具
有广泛的生物学活性 ,体内外均有明显的抗肿瘤活
性 ,还具有激活 MΥ和中性粒细胞功能以及促进
抗原活化 T , B淋巴细胞增殖 、分化等作用;TNF
在机体感染 、移殖排斥 、自身免疫性疾病 、炎症反应
等病理过程及其肿瘤免疫治疗中发挥重要的作用.
本文研究了 AKP 对 ICR小鼠血清中 TNF-α及经
140 　　云南大学学报(自然科学版)　　　　　　　　　　　　　　　第 20 卷
LPS 活化的 MΥ产生 TNF-α的影响 ,实验证明
AKP具有促进 MΥ合成和分泌 TNF-α的作用.
AKP的抗肿瘤作用至少部分是通过活化 MΥ产生
IL-1和 TNF-α来实现的.进一步的作用机制有待
深入研究.
另外 ,据报道 ,AKP 除具抗癌作用外 ,对实验
动物及人体还具有降低血清胆固醇 、血糖及减肥作
用[ 1 ,8] ,至今尚无对人体有害反应的报道 ,可望作
为一种治疗肿瘤的免疫调节辅助性制品.
参　考　文　献
1　周　静.近年国内植物多糖生物活性研究进展.中草药.
1994 , 25(1):40～ 44
2　王　玲 , 李　俊 , 李　欣 , 等.枸杞多糖 2 对辐射损伤小
鼠免疫功能恢复的影响.上海免疫学杂志 , 1995 , 15:
　209 ～ 212
3　李一 , 杨贵贞.白细胞介素 1.见:杨贵贞主编.免疫生物
工程纲要与技术 ,长春:吉林科学出版社 , 1991.1 ～ 17
4　Mosmann T.Rapid colo rimetric assay fo r celluler grow th
and survival:Application to proliferation and cy totox icity
assays.Journal of Immunological Methods , 1983 , 65:55 ～
63
5　周建军 , 乐秀芳 , 韩家娴 , 等 , 评价抗癌物质活性的改良
M TT 方法.中国医药工业杂志.1993 , 24(10):455 ～ 457
6　张　明.鼠腹腔巨噬细胞诱生 TNF 的条件探讨.免疫学
杂志 , 1991 , 7:245
7　罗德元 , 李玉琼.蘑芋精粉对MNNG 诱发小鼠肺癌的抑
癌效果.中华肿瘤杂志.1992 , 14(1):48 ～ 50
8　张银柱 , 郑志仁 , 杨超英 , 等.蘑芋精粉降低大鼠血清和
肝组织胆固醇水平及其抗脂肪肝作用的观察.华西医科
大学报 , 1988 , 19(3):324～ 328
Effect of AKP on the S tandard of Immune Organ
and Cy tokines of the Mice
Wang Ling
1)　Wang Guoyan2)　Deng Xueduan1)　Zhang Caijun1)　Xie Puling1)　Wu Guodong1)
(1)Department of M icrobiology and Immunology , Kunming Medical Colleg e;
2)Depar tment of Pharmacolo gy , Kunming Medical Colleg e , 650031 , Kunming , PRC)
Abstract　AKP(Amorphophallus konjac K Kohn Powder enhanced the funct ion of the mice.It could
markedly accelerated thymus index and spleen index.AKP was shown to signigicantly induced ext racellular
production of interleukin-1(I L-1)and tumor necrosis factor-α(TNF-α)w ith LPS(10 μg/mL)in 18 ～ 24 hours.
Moreover ,AKP increasesd the level of TNF-αin serum of the mice.
Key words　AKP , immune org an , IL-1 , TNF-α
141第 2期　　　　　　　　　　王　玲等:蘑芋精粉对小鼠免疫器官和细胞因子水平的影响