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甘肃产藏药五脉绿绒蒿有效部位对肝纤维化大鼠抗氧化系统的影响



全 文 :甘肃产藏药五脉绿绒蒿有效部位对肝纤维化大鼠抗氧化系统的影响
王志旺1 王瑞琼 郭 玫1 邵 晶2 任 远1 (甘肃中医学院药学系,甘肃 兰州 730000)
〔摘 要〕 目的 探讨甘肃产藏药五脉绿绒蒿有效部位对肝纤维化大鼠抗氧化系统的影响。方法 在给药的基础上,采用四氯化碳(CCl4)、
喂饲高脂低蛋白复合饲料并饮用 20%乙醇来复制肝纤维化大鼠模型,6 w后处死大鼠,对大鼠肝脏纤维化程度评分,检测血清和肝组织各项指标,对
甘肃产藏药五脉绿绒蒿各提取部位防治肝纤维化疗效进行评价。结果 复合因素肝纤维化造模结束后,模型组大鼠肝组织病理结果显示其肝纤维
化处于Ⅱ ~Ⅲ期;与模型组比较,甘肃产藏药五脉绿绒蒿醇提物、黄碱组以及总黄酮能显著降低大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转
移酶(AST)与肝组织中丙二醛(MDA) ,明显升高肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT) ,显著改善大鼠肝纤维化的抗氧化系统;同时发
现总黄酮的抗肝纤维化作用显示出一定的量效关系,而生物碱的作用不明显。结论 甘肃产藏药五脉绿绒蒿醇提物及其中的总黄酮对 CCl4 复合因
素诱导的肝纤维化大鼠抗氧化系统有一定的保护作用。
〔关键词〕 肝纤维化;四氯化碳;五脉绿绒蒿;总黄酮;抗氧化系统
〔中图分类号〕 R56 〔文献标识码〕 A 〔文章编号〕 1005-9202(2013)20-5043-03;doi:10. 3969 / j. issn. 1005-9202. 2013. 20. 048
Influence of active fractions of Meconopsis quintuplinervia Regel growing in Gansu Province on antioxidant system of experimental
liver fibrosis rat
WANG Zhi-Wang,WANG Rui-Qiong,GUO Mei,et al.
Pharmacy Department of Gansu College of Traditional Chinese Medicine,Lanzhou 730000,Gansu,China
【Abstract】 Objective To investigate the influence of active fractions of Meconopsis quintuplinervia Regel (MQR)growing in Gansu
Province on antioxidant system of experimental liver fibrosis rat. Methods On the basis of drug using,model of hepatic fibrosis rat was es-
tablished by using sc CCl4,eating high-fat low-protein diet and drinking 20% alcohol. Six weeks later,the effects of the extractive parts from
MQR were valuated through detecting indexes in hepatic tissue and serum. Results Extractive of 90% ethanol,total flavones and mixture of
total flavones and total alkaloids from MQR growing in Gansu Province could significantly decrease ALT and AST in serum and MDA in liver
tissue. They could also increase SOD and CAT in liver tissue and improve antioxidant system of experimental liver fibrosis in rat. The effects
of total flavones exhibited the dose-effect relationship but the effects of total alkaloids were not obvious. Conclusions The ethanol extractive
from MQR growing in Gansu Province and total flavones in it have better protective effects on antioxidant system of liver fibrosis in rats in-
duced by CCl4 composited factor.
【Key words】 Hepatic fibrosis;Carbon tetrachloride;Meconopsis quintuplinervia Regel;Total flavones;Antioxidant system
基金项目:甘肃省中医药英才基金项目(No. GZK-2010-52) ;甘肃省中医
药管理局基金项目(No. GZK-2008-31)
1 甘肃省中药药理与毒理学重点实验室
2 甘肃省高校中(藏)药化学与质量研究省级重点实验室
通讯作者:郭 玫(1963-) ,女,教授,硕士,主要从事中藏药有效成分及
质量标准研究。
第一作者:王志旺(1970-) ,男,副教授,硕士,主要从事中藏药药理与分
子生物学研究。
绿绒蒿味甘、涩,性凉,具有清热解毒、止痛利尿等功效,临
床用于治疗头痛、肝炎、肺炎、肝与肺的热症、水肿等病症〔1〕,而
藏医药以五脉绿绒蒿(MQR)为其正品,在 30 多个藏药复方中
配伍使用。前期研究显示甘肃产藏药 MQR及其中总黄酮具有
明显的镇痛抗炎〔2〕、体外抗氧化〔3〕等作用;本研究探讨甘肃产
藏药 MQR提高肝纤维化大鼠抗氧化系统水平以及保肝降酶等
作用的有效部位及其作用机制。
1 材料与方法
1. 1 实验材料 SPF级 Wistar大鼠,体重 180 ~ 220 g,雌雄兼
用,由甘肃中医学院实验动物中心提供,实验动物质量合格证
号 SCXK(甘)2011-0001;SPF级实验室,许可证号为 SYXK(甘)
2011-0001。甘肃产藏药 MQR醇提物、总黄酮及总生物碱提取
物适量,置研钵中,加入适量吐温-80,干胶法按“油∶胶∶水 = 2∶
1∶ 2”的比例制备初乳,适当稀释即得甘肃产藏药 MQR醇提物、
总黄酮与总生物碱混合物、总黄酮、总生物碱的乳剂;另取适量
吐温-80 制备 1. 5%的溶液作为对照液,冷藏备用。秋水仙碱,
西双版纳版纳药业责任有限公司生产,批号:20110711。四氯
化碳(CCl4) ,广东汕头市西陇化工厂;丙氨酸氨基转移酶
(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙二醛(MDA)、超氧化物
歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)试剂盒均为南京建成生物工
程研究所产品。TGL-16G高速冷冻离心机,上海安亭科学仪器
厂;722 型分光光度计,上海第三分析仪器厂产品;BS1103 型
Sartorius电子分析天平,北京赛多利斯仪器有限公司;HH-S 型
恒温水浴锅,金坛市正基仪器有限公司。
1. 2 实验方法
1. 2. 1 甘肃产藏药 MQR各受试药的制备 甘肃产藏药 MQR
全草购自甘肃省合作市藏医院,经甘肃省定西市临洮农校卢通
宁高级讲师鉴定。称取药材粗粉适量,用 90%乙醇回流提取
2 次,提取液减压回收乙醇,并进一步干燥得乙醇提取物干浸膏
·3405·王志旺等 甘肃产藏药五脉绿绒蒿有效部位对肝纤维化大鼠抗氧化系统的影响 第 20 期
(醇提物)。将醇提物溶于适量蒸馏水中,用石油醚萃除脂溶性
较强的杂质,残留物用 1 mol /L HCl 溶液溶解,调 pH 值至 2 ~
3,过滤,滤液中主要含有生物碱,残留物即为黄酮类粗品。将
上述黄酮粗品用 1 mol /L NaOH溶液溶解,调 pH值至 9 ~ 10,过
滤,碱水层再用 1 mol /L HCl溶液调 pH值至 2 ~ 3,用乙酸乙酯
萃取数次,合并乙酸乙酯,减压浓缩即得 MQR总黄酮。将上述
含有生物碱的酸性滤液用浓氨水调 pH 值至 9 ~ 10,用氯仿萃
取数次,分离氯仿层,回收氯仿即得 MQR总生物碱。将上述所
得总黄酮与总生物碱按提取率混合即得甘肃产藏药 MQR总黄
酮与总生物碱提取物(黄碱提取物)。
1. 2. 2 动物分组、造模与给药 取 SPF 级 Wistar 大鼠 88 只,
自由饮食,适应性饲养 1 w 后,按体重、性别随机分成 8 组,即
正常对照组、模型组、秋水仙碱组(阳性对照组)、MQR 醇提物
组(醇提组)、MQR总黄酮 +总生物碱组(黄碱组)、MQR 总黄
酮高剂量组(黄酮高剂量组)、MQR总黄酮低剂量组(黄酮低剂
量组)以及MQR总生物碱组(生物碱组)各 11 只。参照张万国
等〔4〕CCl4 复合因素复制大鼠肝纤维化造模:除正常对照组外,
给大鼠皮下注射 40% CC14 橄榄油溶液,2 次 /w,首剂量为
5. 0 ml /kg,以后每次剂量 3. 0 ml /kg,持续 6 w;造模第 3、4 w给
予高脂、低蛋白质复合饲料(玉米粉 79. 5% +胆固醇 0. 5% +
猪油 20%) ,其余各周给予普通饲料;6 w造模期间用 20%乙醇
作为唯一饮料。正常对照组注射等量橄榄油,进食普通饲料并
自由饮水。各组大鼠从造模第 1 天起每天给予相应药物
15 ml /kg,其中正常对照组与模型组给予对照液,1 次 /d,连续
给药6 w。
1. 2. 3 指标观测与方法 实验开始时每组 11 只大鼠,实验期
间模型组有 1 只大鼠体重迅速下降而死亡,阳性对照组与黄酮
高剂量组各有 1 只大鼠因灌胃不当而死亡,其余 85 只大鼠完
成实验。实验第 6 周,大鼠末次给药 24 h,禁食 12 h后,用 2%
戊巴比妥钠麻醉,股静脉采血,血液 3 000 r /min离心 10 min,分
离血清,按试剂盒说明书检测 ALT与 AST 的水平。处死大鼠,
摘取肝脏,观察外形、色泽、质地并留取肝脏标本:在肝右叶固
定位置取肝组织,用 10%多聚甲醛固定、石蜡包埋、切片、HE染
色,做病理组织学观察,并进行半定量分析〔5〕;在肝左叶固定位
置取肝组织,立刻用生理盐水漂洗数次,滤纸拭干后,取适量置
冰浴中的组织匀浆器内,加入冰生理盐水,制成 100 g /L(10%)
肝组织匀浆,在 4℃下 4 000 r /min离心,取上清液,检测 SOD与
CAT的活性以及 MDA的含量。
1. 3 统计学方法 应用 SPSS11. 5 统计软件进行分析,数据采
用 x ± s表示,组间比较采用单因素方差分析。
2 结 果
2. 1 甘肃产藏药 MQR对肝纤维化大鼠血清肝功能的影响
与正常对照组比较,模型组 ALT 与 AST 显著升高(P < 0. 01) ;
与模型对照组比较甘肃产藏药 MQR 醇提物、黄碱组及总黄酮
高、低剂量组大鼠血清 ALT 与 AST 明显降低(P < 0. 01) ,且总
黄酮的降低作用有一定的量效关系;同时发现生物碱的降酶作
用不明显(P > 0. 05)。见表 1。
表 1 甘肃产藏药MQR对肝纤维化大鼠
血清肝功能的影响(x ± s)
组别 n ALT(IU /L) AST(IU /L)
正常对照组 11 45. 21 ± 6. 202) 174. 98 ± 15. 382)
模型组 10 119. 35 ± 22. 11 329. 93 ± 34. 46
阳性对照组 10 66. 44 ± 10. 032) 210. 99 ± 20. 802)
醇提物组 11 71. 40 ± 11. 392) 235. 22 ± 23. 642)
黄碱组 11 75. 76 ± 11. 522) 242. 18 ± 25. 952)
黄酮高剂量组 10 78. 65 ± 12. 802)3) 250. 21 ± 24. 872)4)
黄酮低剂量组 11 93. 11 ± 13. 232) 291. 35 ± 26. 972)
生物碱组 11 108. 47 ± 16. 60 306. 22 ± 28. 14
与模型组比较:1)P < 0. 05,2)P < 0. 01;与黄酮低剂量组比较:3)P <
0. 05,4)P < 0. 01;下表同
2. 2 甘肃产藏药 MQR对肝纤维化大鼠肝组织脂质过氧化的
影响 CCl4 复合因素在复制肝纤维化的过程中,引起大鼠肝组
织 SOD、CAT的活性明显减低、MDA 的含量显著升高,与正常
对照组比较有统计学意义(P < 0. 01) ;甘肃产藏药 MQR 醇提
物、黄碱组、总黄酮高、低剂量组能明显提高 SOD 与 CAT 的活
性,降低氧化产物 MDA的含量;同时,随着剂量的加大,甘肃产
藏药 MQR总黄酮的作用逐渐增强,显示出明显的量效关系,差
异有统计学意义(P < 0. 05,P < 0. 01)。此外,实验结果显示,
甘肃产藏药 MQR总生物碱的抗氧化作用不明显(P > 0. 05)。
见表 2。
表 2 甘肃产藏药MQR对肝纤维化大鼠肝组织
脂质过氧化的影响(x ± s)
组别
SOD
(U /mg)
CAT
(U /mg)
MDA
(mmol /mg)
正常对照组 188. 53 ± 24. 072) 25. 23 ± 2. 802) 10. 06 ± 1. 282)
模型组 105. 30 ± 18. 96 10. 39 ± 1. 70 24. 94 ± 3. 02
阳性对照组 143. 52 ± 19. 402) 16. 30 ± 1. 942) 17. 35 ± 2. 552)
醇提物组 166. 25 ± 20. 572) 21. 59 ± 2. 632) 14. 93 ± 2. 152)
黄碱组 165. 45 ± 19. 672) 21. 07 ± 1. 992) 15. 04 ± 2. 192)
黄酮高剂量组167. 59 ± 21. 122)4) 22. 34 ± 2. 652)4) 15. 25 ± 2. 432)3)
黄酮低剂量组 132. 68 ± 19. 032) 15. 45 ± 1. 912) 18. 37 ± 2. 862)
生物碱组 122. 49 ± 19. 021) 11. 53 ± 1. 81 22. 51 ± 2. 95
2. 3 甘肃产藏药 MQR对肝纤维化大鼠肝组织病理变化的影
响 随着 CC14 注射次数的增加,造模大鼠逐渐出现弓背喜卧,
委靡不振,毛发干枯,进食差,其中模型组动物的表现更为明
显。实验动物解剖后肝脏表面颜色、质地有明显的区别:空白
对照组肝脏呈紫红色,表面光滑匀质;模型组肝脏表面粗糙,颜
色发暗,边缘变钝,表面有粟米大小暗黄色颗粒,质硬脆;各给
药组动物肝脏较光滑,色泽较模型组光亮,表面凸起较小、较
浅,弹性较好。肝组织 HE 染色结果显示,正常对照组肝小叶
结构完整,肝细胞排列规则,无肝纤维化病理情况出现(0. 91 ±
0. 38) ;模型组肝小叶结构破坏,可见明显纤维间隔形成,出现
大量的胶原沉积,汇管区增粗,脂肪细胞多见(5. 14 ± 1. 12) ;阳
性对照组、醇提物组、黄碱组、黄酮高剂量组与低剂量组虽仍可
见肝胶原沉积、纤维组织形成的现象,但范围较小,出现的频率
·4405· 中国老年学杂志 2013 年 10 月第 33 卷
较低(2. 86 ± 1. 00,2. 77 ± 0. 85,2. 91 ± 0. 94,2. 82 ± 0. 90,
3. 91 ± 1. 09) ;生物碱组肝纤维化的减轻程度不明显,仍可见菲
薄的纤维条索(4. 27 ± 1. 13)。各给药组对肝细胞脂肪变影响
不大。对肝纤维化大鼠肝脏胶原纤维增生程度评分结果显示,
甘肃产藏药 MQR醇提物、黄碱组以及总黄酮能明显缓解肝纤
维化大鼠肝脏胶原纤维组织增生的程度。见图 1。
图 1 甘肃产藏药五脉绿绒蒿对肝纤维化大鼠肝脏病理的影响(HE,×20)
3 讨 论
肝纤维化是肝组织对慢性损伤的修复反应,是大多数慢性
肝病共同的病理特征,目前多数学者认为肝纤维化进程可逆,
预防和治疗肝纤维化是肝病防治的重要环节〔6〕。CCl4 为选择
性肝毒性药物,在肝脏经细胞色素 P450 激活后,与细胞膜脂质
和蛋白质结合,引起膜结构与功能的破坏而导致肝细胞坏死,
乙醇及其代谢物乙醛能够直接诱导肝星状细胞(HSC)活化和
胶原纤维的生成,高脂低蛋白饲料导致三大营养物质代谢失
衡,因此,由 CCl4、乙醇及高脂低蛋白饲料组成的复合因素致大
鼠肝纤维化模型成模率更高、成模时间更短、模型更加稳定,尤
其是与肝纤维化临床病变过程具有较高的相似性〔7〕,适用于肝
纤维化发生、发展的动态观察和研究〔8〕。本研究结果提示复合
因素引起肝细胞受损明显。
肝纤维化与脂质过氧化之间有密切的内在联系。机体在
生命过程中,通过抗氧化酶的系列催化反应将自由基转化为 O2
和 CO2,抑制自由基启动的脂质过氧化反应,保护生物膜结构和
功能的完整性,抗氧化酶 SOD 与 CAT 等活性的高低可间接反
映机体清除氧自由基的能力;MDA是自由基脂质过氧化的终末
产物,其含量高低可间接反映机体细胞受自由基攻击的严重程
度和体内自由基过氧化的水平。目前认为 HSC 的活化增殖是
肝纤维化形成的中心环节,肝脏是脂质过氧化物降解的主要场
所,肝脏发生病变、肝细胞受损时,必然导致自由基代谢紊乱。
自由基除能直接作用于各种信号分子,促使 HSC增殖与活化诱
导肝纤维化的发生外,还能攻击肝细胞的各种膜结构,引起脂
质过氧化链式反应,脂质过氧化损伤可刺激 HSC等细胞的胶原
基因与蛋白表达增加,最终导致肝纤维化的形成,研究〔9,10〕表
明,活性氧自由基及其诱导的脂质过氧化是肝脏炎性损伤发展
至肝纤维化的桥梁,脂质过氧化产物是直接刺激胶原基因转录
的重要因素。本研究也表明,甘肃产藏药 MQR 醇提物、黄碱组
以及总黄酮具有一定的抗氧化作用,可以通过减缓脂质过氧化
及 MDA的生成,在肝纤维化形成的过程中减轻肝细胞的损伤,
减少胶原产生,防止肝纤维化的进一步发展。
自由基参与肝纤维化等多种病理过程,作为天然抗氧化剂
的黄酮类化合物是该领域的研究热点。前期研究表明〔3〕,甘肃
产藏药 MQR总黄酮及其中的苜蓿素具有清除自由基及体外抗
脂质过氧化的作用。本次研究显示甘肃产藏药 MQR 醇提物及
其中的总黄酮具有明显的体内抗氧化作用,该作用可能是其抗
肝纤维化的重要机制之一。
4 参考文献
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〔2012-06-20 收稿 2012-09-10 修回〕
(编辑 安冉冉 /曹梦园)
反复紫外线照射建立皮肤光老化模型
石 潇1 陈 炜 (江苏大学附属医院上海市第八人民医院,上海 200235)
〔摘 要〕 目的 采用紫外线反复照射裸鼠局部皮肤的方法,造成皮肤光老化,探讨建造皮肤光老化模型的新方法。方法 紫外线照射裸鼠背
部右侧标记区域皮肤(2. 5 cm × 1. 5 cm) ,并以对侧未照射皮肤作为对照,观察紫外线对皮肤老化的影响。照射方法:第 1 周每次给予裸鼠紫外线照
射量为 180 mJ /cm2(180 mJ /cm2 为最小致红斑量) ,第 2 ~ 4 周每周能量比前 1 w 增加 1 /3,分别为 240、300、360 Mj /cm2,此后第 5 周起维持
360 mJ /cm2分别至 6(A组)、8(B组)、10 w(C组)。每周每只裸鼠照射 3 次,完成最后一次照射 24 h后处死。取标记区域照射皮肤和对侧未照射皮
肤,进行 HE染色,并检测超氧化物歧化酶(SOD)、羟脯氨酸(Hyp)、丙二醛(MDA)等生化指标。结果 照射 10 w(C组)的裸鼠标记区域皮肤 HE 染
色显示表皮明显增厚,真皮组织排列紊乱,SOD、Hyp、MDA指标与对侧未照射组具有统计学差异,符合光老化皮肤特性,证明紫外线局部照射裸鼠皮
肤 10 w的皮损状态可以作为皮肤光老化模型,用于皮肤光老化的相关研究。结论
〔关键词〕 皮肤;光老化;UV紫外线;动物模型;裸鼠
〔中图分类号〕 R75 〔文献标识码〕 A 〔文章编号〕 1005-9202(2013)20-5046-03;doi:10. 3969 / j. issn. 1005-9202. 2013. 20. 049
1 上海交通大学附属第九人民医院
通讯作者:陈 炜(1962-) ,女,博士,主任医师,硕士生导师,主要从事
皮肤老化的构建研究。
第一作者:石 潇(1983-) ,男,硕士,主要从事皮肤老化研究。
光老化指由紫外线日积月累的照射引起的皮肤老化,表现
为皮肤暴露部位粗糙、皱纹加深加粗、结构异常、不规则性色素
沉着、血管扩张、表皮角化不良、出现异常增殖、真皮弹性纤维
变性及降解产物蓄积等〔1,2〕。而皮肤光老化可以并发和诱发多
种皮肤病变,并与一些皮肤恶性肿瘤有着密切关系。此外,光
老化导致皮肤过早皱缩粗糙、毛细血管扩张、色素斑形成等,严
重影响外表的美观甚至人的心理。目前,皮肤光老化已经作为
一个独立的疾病或者综合征成为国内外的研究热点,因此建立
光老化动物模型对研究光老化的机制、预防、治疗皮肤光老化
有重要的意义,并且已经有了各种相关的报道〔3,4〕。由于可以
省去反复脱毛的繁琐过程以及脱毛对皮肤的刺激和损伤,因此
目前国外主要以裸鼠和无毛豚鼠作为模型动物〔5,6〕,而紫外线
照射建立的光老化裸鼠,其皮肤结构改变更接近于人的皮肤光
老化改变。本文综合考虑国内外建立模型的优势和问题,旨在
建立裸鼠局部皮肤光老化模型,为皮肤光老化研究提供更好的
动物模型。
1 材料与方法
1. 1 药品与仪器 手持式紫外线灯(美国路阳仪器 LEB-
280 L,2 根 8 w UVB 灯,峰值 308 nm) ;小鼠超氧化物歧化酶
(SOD)试剂盒,小鼠羟脯氨酸(Hyp)试剂盒,小鼠丙二醛
(MDA)试剂盒(上海恒远生物科技有限公司) ;普通光学显微
镜 Olympus显微镜(日本)。
1. 2 实验动物 BALB /c雌性裸鼠 15 只,6 周龄,购于上海斯
莱克实验动物有限责任公司。日光灯模拟自然环境(昼夜交替
12 h)饲养,常规饲食和饮水,无不良因素影响,适应性饲养 1 w
使其适应实验室环境后开始进行实验。
1. 3 实验方法
1. 3. 1 实验动物的分组 将 15 只雌性裸鼠随机分成 A、B、C
3 组,每组 5 只。在裸鼠 6 周龄时用 10%水合氯醛(0. 2 ml /
100 g)麻醉,于其右侧背部用墨汁皮内标记出 2. 5 cm × 1. 5 cm
大小的位置,作为紫外灯照射区域;左侧相对区域皮肤不照射
紫外线,为对照组。A组照射时间为 6 w,B组照射时间为 8 w,
C组照射时间为 10 w,并进一步分为 6 w实验组 A1 和 6 w对照
组 A2、8 w实验组 B1 和 8 w对照组 B2 以及 10 w实验组 C1 和
10 w对照组 C2。
1. 3. 2 照射方法及处理 将适应性饲养后的 7 周龄裸鼠固
定,充分暴露出标记区域,用厚纱布遮盖未标记区域皮肤,防止
紫外线照射。将紫外灯垂直置于暴露的标记区域皮肤上方
6 cm处,按 Moloney〔7〕实验所述方法,第 1 周每次给予裸鼠紫外
线照射量为 180 mJ /cm2(180 mJ /cm2 为最小致红斑量) ,第 2 ~
4 周间能量较前 1 w增加 1 /3,分别为 240、300、360 MJ /cm2,此
后第 5 周起维持360 mJ /cm2至各组照射实验结束。此后,A
组、B组、C组在各自完成最后一次照射 24 h 后,断颈处死裸
鼠,并立刻取下紫外线照射区域皮肤和对侧等大未照射皮肤。
1. 3. 3 HE染色 将所取皮肤固定 48 h 后,取出、脱水,于石
蜡包埋,切片后,进行 HE常规染色。
1. 3. 4 SOD、Hyp、MDA检测 取下裸鼠皮肤后立即进行组织
匀浆,取上清液,采用 ELISA方法测定 SOD、Hyp、MDA。
1. 4 统计学方法 采用 SPSS18. 0 统计软件,计量资料用 x ± s
表示,采用单独样本 t检验处理数据。
2 结 果
2. 1 裸鼠照射 6 w的实验结果
·6405· 中国老年学杂志 2013 年 10 月第 33 卷