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第 1 5 卷 第 5 期
2013 年 5 月
辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 15 No. 5
May，2013
重楼（Rhizoma Paridis）是百合科重楼属植物
的泛称。《中华人民共和国药典》2010年版收载的
为 云 南 重 楼Paris polyphylla Smith var.yunnanensis
（Franch.）Hand.-Mazz.和 七 叶 一 枝 花P.D phylla
Smith var.chinensis（Franch.）Hara的干燥根茎。本
品具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊之功效，用于
痈、疮、咽喉肿痛、毒蛇咬伤、跌打伤痛、凉风抽搐等
症[1]。现代药理研究表明重楼具有抑菌、止血、镇静
镇痛、祛痰、抗早孕杀灭精子和抗细胞毒等作用，是
一类非常具有药用价值的植物。本课题组前期研究
表明，重楼醇提物和水提物对CCl4所致的化学性肝
损伤均有较好的保护作用[2]。由于急性肝炎多与患
者免疫功能异常有关，为此，本实验进一步验证重楼
醇提物对经典的刀豆蛋白A致急性免疫性肝损伤模
型的保护情况，探讨重楼醇提物对该模型小鼠的保
护作用。
1 材 料
1.1 药品及试剂 重楼饮片由安徽省中医院中药
重楼醇提物对小鼠免疫性肝损伤保护作用
洪燕1，韩燕全2，桂洁1，姜辉2
（1.安徽中医学院，安徽 合肥 230031；2.安徽中医学院第一附属医院，国家中医药管理局中药制剂三级实验室，安徽 合肥 230031）
摘 要：目的：观察重楼醇提物对刀豆蛋白A（Concanavalin A，ConA）介导的急性免疫性肝损伤小鼠的保护作
用及其机制。方法：昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、联苯双酯组（0.150 g·kg-1）、重楼醇提物低（1.3 g·kg-1）、
中（2.6 g·kg-1）和高剂量组（3.9 g·kg-1）。采用ConA尾静脉注射法制作急性免疫性肝损伤模型。模型组、正常组
给予生理盐水灌胃，其余组每日分别给予重楼醇提物、联苯双酯溶液灌胃，连续14 d。末次灌胃给药后1 h，除正常
组外，其余各组按照15 mg·kg-1体重尾静脉注射ConA造模，造模给药后8 h处死动物取血或组织标本检测ALT、
AST、SOD、MDA、GSH-Px含量；HE染色法观察肝组织病理学变化。结果：重楼醇提物能降低急性免疫性肝损伤
小鼠ALT、AST和MDA含量（P<0.05或P<0.01）；减轻肝组织病理损伤程度；升高SOD、GSH-Px活性（P<0.05或
P<0.01）。结论：重楼醇提物对急性免疫性肝损伤小鼠具有一定的保护作用。
关键词：重楼醇提物；刀豆蛋白A；免疫性肝损伤
中图分类号：R256.4 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2013) 05- 0031- 03
收稿日期：2012-11-19
基金项目：国家中医药重点学科临床中药学建设项目(国中医药人教发[2012]32号) ；安徽中医学院临床科研基金项目（2009LC1-019A）；
安徽中医学院自然科学基金项目（2012zr010）
作者简介：洪燕（1975-），女，安徽合肥人，讲师，硕士，研究方向 ：中药药理学。
通讯作者：韩燕全（1978-），男，安徽合肥人，副主任中药师，博士，研究方向 ：中药药理与质量控制。
Protective Effect of Ethanol Extract of Paris Ployphylla on Mice Model
with Concanavalin A-Induced Acute Immunological Liver Injury
HONG Yan1，HAN Yanquan2，GUI Jie1，JIANG Hui2
（1.Anhui College of Traditional Chinese Medicine，Hefei 230031，Anhui，China ；2.The First Affiliated
Hospital，Anhui College of Traditional Chinese Medicine，Grade 3 Laboratory of Traditional Chinese
Medicine Preparation，State Administration of Traditional Chinese Medicine，Hefei 230031，Anhui，China）
Abstract ：Objective ：To observe the protective effect of ethanol extract of Paris Ployphylla on the
mice model with Concanavalin A-induced acute immunological liver injury. Methods ：Mice were randomly
divided into six groups ：control group，model group，bifendate（0.15 g·kg-1），ethanol extract of Paris
Ployphylla treatment low（1.3 g·kg-1），medium（2.6 g·kg-1）and high（3.9 g·kg-1）groups. The
acute immunological liver injury models were induced by injection of Concanavalin A from tail vein. The
ALT，AST contents in serum，the activities of MDA，SOD and GSH-Px in the liver tissue were detected.
Hepatic tissues stained with hematoxylin and eosin（HE）were prepared for histological analysis on liver
injury. Results ：Ethanol extract of Paris Ployphylla could reduce the ALT，AST and MDA contents（P<0.05
or P<0.01），and increase the SOD and GSH-Px activities in liver homogenate（P<0.05 or P<0.01）.
Meanwhile，the pathological injury of hepatic tissues was alleviated. Conclusions ：Ethanol extract of Paris
Ployphylla showed significant protective effect on acute immunological liver injury in mice.
Key words ：ethanol extract of Paris Ployphylla ；concanavalin A ；acute immunological liver injury
DOI：10.13194/j.jlunivtcm.2013.05.33.hongy.069
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辽 宁 中 医 药 大 学 学 报 1 5 卷
库房提供。参照《中华人民共和国药典》2010版记
载的高效液相色谱法，对其有效成分进行了测定，本
品含重楼皂苷Ⅰ和Ⅱ总量为0.83%，符合药典质量
要求 ；重楼醇提物为本实验室自制，得率为12.51%，
批号 ：20120118。联苯双酯（BP），批号 ：10070203，
北京协和药厂 ；刀豆蛋白A（ConA），购自Sigma公
司。丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移
酶（AST）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）
和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒均购自南
京建成生物工程研究所。
1.2 动物 清洁级昆明种小鼠共60只，雌雄各半，
体重18~22 g。由安徽医科大学实验动物中心提供，
动物合格证号为皖医实动准字第02号。
1.3 仪器 Aglient8253紫外分光光度计（美国安捷
伦公司）；80-2离心沉淀器（上海手术器械厂）；电热
恒温干燥箱（北京医疗设备厂）；恒温水浴锅（上海
实验仪器总厂）。
2 方 法
2.1 模型制备[3] 昆明种小鼠随机分为正常组、
模型组、联苯双酯组（0.15 g·kg-1）、重楼醇提物低
（1.3 g·kg-1）、中（2.6 g·kg-1）和高（3.9 g·kg-1）剂
量组，每组10只，各组动物每日灌胃给药1次，正常
组、模型组均灌胃等容量蒸馏水（0.2 mL·10g-1），
共给药14 d。末次灌胃给药后1 h，正常组小鼠尾静
脉注射PBS缓冲液0.3 mL，其余各组小鼠均一次性
按15 mg·kg-1体重尾静脉注射ConA，ConA以0.9%
的生理盐水稀释，浓度为1 mg·mL-1。造模给药后
8 h，摘眼球取血。
2.2 血清ALT、AST含量测定 常规制备血清标本，
按照试剂盒说明书测定ALT、AST含量。
2.3 肝组织匀浆 MDA、SOD、GSH-Px 含量测定
取肝左叶相同部位，常规制备肝组织匀浆，蛋白定
量采用考马斯亮蓝法，按照试剂盒说明书测定SOD、
MDA、GSH-Px含量。
2.4 肝组织病理学检查 取肝右叶相同部位，放入
10%甲醛溶液中固定，常规HE染色，光镜下观察组
织病理学变化。
2.5 统计学处理
采用 SPSS13.0 统计软件进行统计处理，数据以
（x—±s）表示，组间比较采用方差分析，P<0.05有统
计学意义。
3 结 果
3.1 重楼醇提物对小鼠血清ALT、AST含量的影
响 与正常组比较，模型组小鼠血清ALT、AST含量
明显升高（P<0.01）；重楼醇提物各剂量组和联苯双
酯组均能显著降低小鼠血清中ALT、AST水平，重
楼醇提物小剂量组与模型组比较无统计学意义，重
楼醇提物中、高剂量组与模型组比较有显著性差异
（P<0.05 或P<0.01）。提示重楼醇提物对免疫性肝损
伤小鼠具有保护作用，结果见表1。
3.2 重楼醇提物对小鼠肝组织MDA、SOD、GSH-Px的
影响 与正常组比较，模型组小鼠肝组织MDA水平
显著升高，SOD、GSH-Px 水平均显著下降 ；与模型
组比较，重楼醇提物低、中、高剂量组均能降低免疫
性肝损伤小鼠 MDA 水平，升高 SOD、GSH-Px 水平。
其中重楼醇提物小剂量组与模型组比较无统计学意
义，重楼醇提物中、大剂量组与模型组比较有显著性
差异（P<0.05或P<0.01）。表明重楼醇提物通过提高
机体抗脂质过氧化能力对免疫性肝损伤小鼠起保护
作用。结果见表2。
表1 对小鼠血清 ALT、AST 活性的影响（n=10，x—±s）
组别 剂量（g/kg） ALT（U/L） AST（U/L）
正常组 - 53.23±16.87** 44.94±11.75**
模型组 - 103.58±34.21 96.24±22.73
联苯双酯组 0.15 67.20±11.30** 54.29±13.85**
重楼醇提物（低）组 1.3 85.48±22.66 71.80±46.84
重楼醇提物（中）组 2.6 76.87±25.48* 61.61±21.14**
重楼醇提物（高）组 3.9 69.82±11.49* 57.68±15.33**
注 ：模型对照组比较 *P<0.05，**P<0.01。
表2　重楼醇提物和水提物对小鼠肝组织SOD、
MDA及GSH-Px水平的影响（n=10，x—±s）
组别 剂量（g/kg）
SOD
（U/mL）
MDA
（nmol/mL）
GSH-Px
（U/mg）
正常组 - 462.68±36.73** 13.48±4.76** 224.49±8.25**
模型组 - 290.74±62.05 21.69±7.33 169.80±28.51
联苯双酯组 0.15 377.52±95.39* 14.17±5.01* 209.49±16.80**
重楼醇提物（低）组 1.3 346.65±56.39* 15.71±5.68 171.10±20.73
重楼醇提物（中）组 2.6 386.39±90.92* 15.52±4.47* 198.84±19.18*
重楼醇提物（高）组 3.9 402.31±95.84** 13.78±3.97** 209.29±17.93**
注 ：模型对照组比较 *P<0.05，**P<0.01。
3.3 重楼醇提物对小鼠肝组织病理学的影响 正常
组肝小叶完整，结构清晰。肝细胞索排列整齐，汇管
区无炎细胞浸润 ；模型组小鼠肝小叶结构破坏，炎
性细胞浸润，肝细胞出现大片嗜酸性变 ；重楼醇提
物各剂量组可明显减轻肝脏炎症细胞浸润和坏死程
度，结果见图1。

A.正常组 B.模型组

C.联苯双酯组 D.重楼醇提物（低）组

E.重楼醇提物（中）组 F.重楼醇提物（高）组
图1 重楼醇提物对免疫性肝损伤小鼠
肝组织的HE 染色（200×）
4 讨 论
自身免疫性肝病、病毒性肝炎等所致的肝损
害，均与T淋巴细胞的活化密切相关[4]。ConA是
一种植物凝集素，可诱导淋巴细胞和巨噬细胞的
33
1 5 卷 辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
细胞毒作用。与人类的急性肝炎发病机理非常相
似，用刀豆蛋白A（ConA）诱导的小鼠急性肝损伤
模型具有制作简便快捷、有剂量依赖性和肝脏特
异性等特点，是一种理想的免疫性肝损伤动物模
型[5]。
由于ConA诱导的小鼠急性肝损伤模型具有
剂量依赖性，选用剂量从0.15~30 mg·kg-1不等，
肝损害随药物剂量加大而加重。为此，本课题组
在预实验阶段对ConA用量进行了摸索。结果显
示剂量达30 mg·kg-1时，8 h内有半数以上小鼠死
亡，而剂量太低模型小鼠肝脏病理改变又不明显，
故最终将剂量选为15 mg·kg-1。肝组织HE染色
显示，模型组小鼠肝小叶结构破坏，炎性细胞浸
润，肝细胞出现大片嗜酸性变，表明免疫性肝损伤
模型复制成功。
肝脏是人体的“化工厂”，含有丰富的酶类。当
肝组织发生损伤时，酶即从细胞内逸出进入血液，血
清中 ALT、AST水平将明显升高，是肝损伤的重要标
志[5-6]。实验结果显示重楼醇提物各剂量组均能显
著降低肝损伤小鼠血清AST、ALT水平。同时可明
显减轻肝脏炎症细胞浸润和坏死程度，提示重楼醇
提物对免疫性肝损伤小鼠具有一定的保护作用，保
肝降酶效果明显。
氧自由基是生物体氧化-还原反应的代谢
产物，正常情况下，其生成和清除维持平衡，平衡
破坏都会造成机体损害[6]。在免疫性肝损伤过
程中，肝细胞内产生的大量氧自由基作用于细胞
膜脂质，进行脂质过氧化的链锁反应。在这过程
中，SOD可以清除细胞内的自由基，是反映肝损伤
程度的重要指标之一。本组实验表明，与模型组
比较，重楼醇提物各剂量组可显著提高SOD水平
（P<0.05或P<0.01），增强机体抗氧化能力。脂质
过氧化在免疫性肝损伤的发生发展过程中起重要
作用[7]，MDA是脂质过氧化的最终产物，其MDA
是脂质过氧化反应过程中的稳定产物，具有很强
的生物毒性，可严重破坏细胞膜结构，导致细胞肿
胀、坏死，其含量多少可反映肝细胞受氧自由基攻
击后损伤的程度[8]。本实验中重楼醇提物中、高剂
量组MDA明显低于模型组（P<0.05或P<0.01），说
明重楼醇提物可降低免疫性肝损伤的脂质过氧化
物含量。GSH-Px 是机体内广泛存在的一种重要
的过氧化物分解的酶，它在细胞内能清除有害的
过氧化物代谢产物，阻断脂质过氧化反应，从而起
到保护细胞膜结构和功能完整的作用[8]。本实验
中重楼醇提物中、高剂量组可明显提高模型小鼠
肝组织的GSH-Px活性（P<0.05或P<0.01），说明重
楼醇提物可提高免疫性肝损伤小鼠的过氧化物分
解酶的含量，达到其保肝降酶作用。
综上所述，重楼醇提物通过加速氧自由基的清
除，提高机体抗脂质过氧化能力，对免疫性肝损伤小
鼠起到保护作用。◆
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在学校党委的直接领导下，在辽宁省教育厅及上级主管部门的关怀下，在编辑部全体同志的共同努力下，
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