全 文 ：9 9 1 4年 第 6 期
中 山大 学 学 报 论 丛
SUP P LE M E N T T() TH E J O U RN A L
O F SUN A E S YTN N V I UE S RI T YN o
.
6 19 9 4
艾纳香素对护肝及血小板聚集的作用
许实波 胡
(中山 大学
莹 林永成 杨志邦 `
生命科学学院药理室 , 化学系 )
摘 要 从菊科植物艾纳香 (B lu m e 。 aB als m ife r a ) 分离得新化学物 5 , 3 , , : 一三轻基 一 7 一甲氧
基二氢黄酮 ,简称艾纳香素 ( lB u m ae ir n lB u) , l u 对扑热息痛 、醋酸泼尼松所致的肝损伤有保
护作用 ,使血清转氨酶和丙二醛水平 一 F降 , 扑热息痛中毒死亡率有减少作用 , B lu 在体外对花
生四稀酸 , 5 一轻色胺及肾上腺素诱导大鼠及 人血小板聚集反应 , 有明显的促进作用 , 几具 量
效关系 , 1 . 26 拌m ol I/ _ 为最适剂量 .
关键词 艾纳香素 (B I u ) , 肝损伤 ,扑热息痛 , 血小板聚集
1 实验材料
1
.
1 试验样品与试剂
艾纳香素 Bl u 由中山大学化学系天然有机研究室提供 ;醋酸泼尼松由广东制药 [ 业
公司华南制药厂生产 ;扑热息痛 ( A A P ) 由广东制药工业公司石歧药厂生产 ; 联苯双酚
( B D D ) 由浙江温岭制药厂生产 ; 花生四烯酸 ( A A ) : 南京生物化学制药厂 ; 盐酸肾 上腺 素
( A d r )
: 广州明兴制药厂 ; 5 一经色胺 ( 5一 H T )和硫代 巴比妥酸 ( T B A ) , is g m a 公司产品 ; 测
谷丙转氨酶 ( S G P T )的试剂盒 ,重庆东方生化试剂厂产品 . 其余试剂及药品均由广州市
药品批发公司购得 .
1
.
2 实验动物
N I H 小鼠及 S D 系大 鼠由本研究室实验动物养殖场提供 , 人血由本校生物系健康学
生捐献 ,本校医院化验室采血提供 .
方法及结果
lB u 对扑热息痛 ( A A )P 肝脏毒性的保护作用
取 4 组 N IH 小鼠 ,体重 19 士 29 , 每组 8 只 , 分成空白对照组 , 联苯双酚组 , lB u ( I ) ,
汕头大学生物学系 1 993 届毕业实习生
第 6 期 许实波等 : 艾纳香素对护肝及血小板聚集的作用 49
BI u( 万 ) , b
.
1
.
d
.
x ds 二 空白对照组每只 P . O 生理盐水和 DM S O . 联苯双酷组 ( BD D )每
只 P . ( ) 4 n lg / k g , B l u ( I ) P . 0 4m g / k g ; B zu ( , ) P . 0 Zm g / k g ;未次 p . o 试验样品后 ,
全部鼠 P . 0 A A P 5 50 m g k/ g ,结果 见表 1 .
表 1 lB u 对 A A P 肝脏毒性保护作用
T a b
·
1 E f f
。 。 t 〔 ) f B l , , p r e t r e a tnt e n t o n a e e t a m in o p h e n in d u e e d m o r t a l i t y
组 别 动物数 (只 ) 牛卜热
』息痛
( n , g /k g )
剂量 (m g /k g ) 死亡动物数 (只 ) 死亡率 ( % ) 存活率 (写 )
nj19曰
空白对照组
( M S
一卜I )M晰 ) )
联笨双酉旨组
l于Iu ( I )纲
}二l u ( I )全}1
5 5 0
5 5 0
5 5 0
5 5 0
3 7
.
5 6 2
,
5
. 书 .
1 2
.
5 8 7
.
5
资 件 份
2 5 7 5
钾 , .
, 了二 吕 ; 与空 白对照组比较 : * * 、 尸 < 0 . 01
结果表明 , P . 0 4 m g k/ 9 lB u 的存活率比 P . 0 4m g k/ g 联苯双醋组的小鼠存活率高 ,
同时与空白对照组相 比 , .P 0 lB u 有显著的差异 ,提示 lB u 有明显降低小鼠扑热息痛中毒
的死亡率 .
2
.
2 lB
u 对扑热息痛所致肝损伤的影响
取 4 0 只 N l J 小鼠 , 分成 5 组 , 每组 8 只 , 体重 19 士 29 , 分成正常组 ,空白对照组 ,联苯
双醋组 , 川 u( I )组和 lB 。 ( 贾 )组 , b . 1. d . \ sd . , P . 0 给样品 ,第 9 次给药后 ,除正常组外 ,
个部 P . ( ) 扑热息痛 4帕 m g厂k g ,饥饿 1h6 后 , 再给最后 1 次样品 , 于 h1 后 , 从小鼠眼眶取
血 分离血清 , 用赖氏法 [ ` {测 S G P T . 然后断头处死 ,称肝重 , 制备肝匀浆 ,用 T B A 法测丙
二醛 ( M D A ) , 肝匀浆制法 : 先将肝脏取下迅速称重 ,置玻璃组织匀浆器中 , 用生理盐水制
备 ] %肝匀浆 ; 取 l %肝匀浆 0 . 6 1川 , 加入 0 . 3m l 20 %三氯醋酸 ,沉淀蛋 白质 , 混匀静置室
温下 艺n l i , 1 , 加入 0 . 1: , 、 。 l / x少 IJC x Z: n ! 和 l %硫代巴 比妥酸 一m l 混匀 ; 于 x o o ℃沸水水浴
1 5 ;丁l i n , 矛令却加 4 . Om l 正 T`醇振摇 3 0 0 O r / 。 l i n 离心 I s m i , 1 , 最后取上清液 4 m l , 在 5 3 2 n m
波长下比色测定 , 结果见表 2 .
表 2 l3I u 对扑热息痛所致肝损伤后对 S G P T 和 M D A 的影响
T
: 、卜 . 三 F f fe e t o f 正二l u o ; 一 、 e r : z n z (奋玉) T a n d ii v o r M l) A i n m ie e i : z j u r e d b y a e e t a m in o p h e n
组 别 动物数
( 只 )
扑热息痛 剂量
( n l g / k g ) ( m g / k g )
肝重
(只 )
M D A
( O D )
0
.
1 0 3士 0 . 0 1 8十 +
0
.
0 6 4土 0 . 0 2 3 ` ’ `
0
.
( ) 8 1士 0 . 0 1 4一
0
.
0 7 0土 0 . 0 1 9一
0
.
0 7 9士 0 . 0 1 8 “ `
八曰0自口
一
0
J
4
二络月汁任空白对照组
正常组
联笨双西旨组
I左1、 1 L l )组
l、 I L! ( 皿 )组
.] 2 5士 .() 1 1
1
.
2 8士 0 . 1 8
1
.
2 7士 ( ) . 1 4
1
.
2 3士 0 . l j
1
.
2 4士 ( ) . 1 5
SG P T
(产g )
5 5
.
1 3士 1 0 . 26
3 6
.
5 0 士 9 . 2 6 . ` ’
3 9
.
8 8生 1 1 . 3 8 ”
3 8
.
8 8士 8 . 4 3 ’ ` ’
4 1
.
0 0士 1 2 . 0 9 侧 朴
与空白组相比 : 书 、 * P < 0 l() 、 产了 。 . 0 5 ; 与正常组相比 : + + 尸 < 0 . 01 , 一一尸> 0 . 05
中山大学学报论丛 1 9 9 4年
结果表 明 , lB u 能显著降低由扑热息痛升高的 S G P T 和 M D A 水平 , 且与空白组相
比 ,有显著的差异 .
2
.
3 lB u 对醋酸泼尼松肝损伤所致 SG P T 的影响
取 50 只小鼠 , 体重 19 士 29 ,分 5 组 、 分成正常组 、 空白对照组 、 联苯双醋组 、 lB u 门 )
和 lB u ( 卫 )组 , P . O 给样品 b . 1. d . 只 d4 . , 于实验第 3天上午和第 4 天下午除正常组外 ,全
部 P 、 0 6 0 0m g k/ g 醋酸泼尼松 2 次 ,末次给样品后 1 h6 从小鼠眼眶取血 , 分离血清 , 用赖
氏法测 S G P T (见表 3) . 结果表 明 , lB u 能降低由醋酸泼尼松引起的 S G P T 升高 ,且降至
正常水平 .
表 3 lB u 对醋酸泼尼松肝损伤后 S G P T 的影响
T a b
.
3 E f fe e t o f B !u o n s e r u n l G P T in m i e e in j u r e d b y P r e d n id o x、 e
组 别 动物数 (只 ) 剂量 ( m g /k/ g ) 醋酸发尼松 (m g / k g ) S (二P T ( 拼g )
空白对照组
联苯双酷组
正常组
B l u ( l )组
B l u ( I )组
6 0
`
2 5 士 1 0 . 9 4 -
3 3
、
8 7士 1 () . 2 0 `
3 3 1 1士 1 5 . 3 0 ’
3 3
.
5 0士 1 6 . 2 0 ’
3 5
.
5 6士 1 8 . 4 C
门以ō0ǎ曰é八10自ǎ卜丹灼-产nēh
任=9一月咔
牙士 S D ; 与空白组比较 : , 二 P 灯。 . 0 1 ; 与正常组比较 : + + < 0 . 01 , -一尸> 0 . 05
结果表明 ,联苯双醋组 , lB u( I ) , lB u( l )组的 S G P T 水平与空白对照组相比 , 差异显
著 ,而与正常组相比较无差异 ,提示 lB u 能降低 由醋酸泼尼松引起的 SG P T 升高 ,且达到
正常水平 .
2
.
4 lB u 对花生四烯酸 ( A A )诱导血小板聚集作用
按文献叫方法 ,取 S D 系大鼠 ,体重 2 20 士 2馆 摘眼球取血 ,在 已用 1%的硅油甲苯硅
化好的试管内加入 3 . 8%的拘檬 酸钠作抗 凝剂 ( 血与抗 凝剂 的比例 为 1 : 9) . 然后 以
s o o r / n i i n 离心 sm i n ,制得富含血小板血浆的 P R P .取 P R P 2 0 0拼l 于比浊管 , 加入 2 0拼l 的
溶剂或等体积的 lB u 液 ; 另外以 3 0 0 o r / m in 离心 l o m i n ,制备贫含血小板血浆 ( P P )P ; 在
B S 6 3 4 型血小板聚集仪的 比色槽内 , 3 7 C 温育 4m i n , 加入 A A ( 2 只 l o 3m m ) 2 0胖l ,观察 、 记
录 l o m in 内血小板聚集仪数滚 . 川 。 的溶液分成 4 个剂量组 。 . 3 1 5拜m ol / L ; .0 63 拜m ol I/ J ;
1
.
26 胖m ol / L ; 2
.
5 2产m o l / L ,按下式计算促进率
促进率 〔% )~ 给样品组聚集 一对照组聚集又寸照组聚集 火 1 0 0%
结果见表 .4
结果表明 : 在 .0 3 1 5拼m ol / L 和 .2 5 2拼m ol / L Z 个浓度时 , lB u 抑制 A A 诱导的血小板
聚集 , 只有在 1 . 2 6拜m ol / L 才促进血小板聚集且效果最强 . 说明 lB u 对血 小板聚集的影
响是剂量依刺性的 . 超过一定剂量 ( lB u 4 组 ) 便出现抑制效应 .
第 6期 许实波等。艾纳香素对护肝及血小板来集的作用
表 4l Bu对A A 诱导的大鼠血小振体外粱集的形响 -
a Tb 4
.
E fe fet
o
f Bl uon rotp l 妞t el et a 既r e, t ion idn讹 e d by A r赶 e h id o n ic ac 记了飞厂-瘾飞蕊瑟了扁稿赢茹护- 霭赢亩
,`汽力左占O甘:é八J勺口九匕鸽洲U一56
对照组
B l u l 组
B l u Z组
B l u 3组
B lu 4组
维生素 K 。 组
25
.
3 2土 4 . 口7 -
2 4, 72 士 .7 30
_
39
. 幼士 .5 97二草
6 8泊 2士 13 , 38 菜羊幸
2 3
.
0 7士 1 . 71
2 5
. 。之士否, 2 4
315.63哪2溺.0012
左一 10 , 牙士 S D 关 关 尸< O、 0 6 , 共 关 二 P < 0 , G l v s e o n tr o l ;
十 + P < Q , 0 5 . + + + 尸< 0 . 0 1 v s vi t K 。
.2 5 lB u 对 5一H T 诱导的人血小板体外聚集的影响 一 _ -
方法同 2 , 4 , 5 一 H T 以 N S 配成 3火功弓 m二 ol L/ , 甩一次性塑料注射器朽m l )抽取人
羚嚣…戳翼黔翼愁愁黔巍蜀署观察 10 m in 以内血小板聚一集情况 , 实验结果见表 .5 一 , 一 一
表 5 lB u 对 5 一H T 诱导人血小板体外聚某的影响 」
T
a b 5 E f允 c t o f B l u on h u m a n p 4a t e l o t a韶 r铭 a t io n i n d u c e d by s 一H T
组 别 剂量尔mo l/ L) 血小板聚集 ( % ) 促进率 ( % )
对照组 -一 18 . 13 士 4 、 2 3 一一
B lu l 组 .0 31 5 7 . 卯士 2 . 23 ` 下 ` 一砚 .0 0 卜 `
lB
u
Z 组 。· “ 「 36 .0 。士 12 · 7与车车 骆 , 勿
lB u 3组 1 .2 6 53 ` 21 士 8 、 6 4 土二草 1 93 .4 9
B lu 4 组 一 .2 52 24沼 O士石. 93 ` 36 . 79
_ 维牛春界卑 _ M 〔 婴卫 i生1毛型 ` .兰些` 一二一
、 芳 尸 < 0 . 0 5 , 、 、 * 尸 < .0 口1 v s 。 。 m 了ol ; 十一 + 尸 < 0 . 0 5 , 十 + + 尸 < .0 0 1 vs vi t K ,
结果表明 , lB u 对 5一 H T 诱导的血小板聚集反应 , 在 .1 2 6产n斗o l/ L 浓度 ,效应最佳 ,译
明 B lu 对 5 一畔 诱导的血小板聚集的影响呈剂量依赖性 , 1 · 2印 tn ol / L 为最适剂母 超过
一定剂量 ( B lu 4 组 ) 出现抑制效应 · .
.2 6 lB u
· 对 A dr 诱导的人血小板聚集性影响 _ . -
方法同 .2 4 , 肾上腺素由 19 / L 的盐酸肾上腺素稀释成 1 0 m l, 每管加入 10川钓 A dr .
作诱导剂 , .3 8 %的构檬酸钠作抗凝剂 ; P R P, P P P的制法同上 , 观察 10 m in ,结果见表 .6
结果表 明 . 在 0 .3 1 .51 0 01 I/ J 组 , 尚未达到作用 , 出现抑制作用 , 在 。 , 6 3乒仍ol L/ ,
1 2 6拜m ol L/ 剂量组对血小板有较明显的促进作用 , 而以 1 , 2印血ol / L 组达到最佳效应 ,
当剂量加大 ,在 2 . 5 2拼m ol I/ J 时 , 虽对 A d : 诱导的人血小板聚集亦呈促进作用 ,但促进率
中山大学学报论丛 1 9 9 4 年
明显减小 ,提示 lB u 液对肾上腺素的诱导人血小板聚集作用 ,具量效关系 , 以 1 . 2 6户m o l / L
组为最适剂量 .
表 6 lB u 对 A d r 诱导的人血小板聚集的影响
T a b
·
6 E f fe e t o f B lu o n h u m a n p l a t e l e t a g g r e g a t 一o n in d u e e d b y A d r e n o n i n e
组 别 剂量年m ol /L ) 血小板聚集 (% ) 促进率 (% )
对照组 一 23 .9 。士 6 . 72 一
lB
u l 组 0 . 315 7 1 . 9 1士 1 4 . 2 5早二竿 2 0 0 · 8 7
B lu Z组 0 . 鸽 . 35 . 01 土 10 . 6 7羊土工 46 . 4 9
lB
u 3组 1 . 26 6 6 . 8 6士 8 . 0 4二二二 1 79 .7 5
lB u 4 组 2 . 52 34 . 92 士 12 . 8 8二二二 46 . 1
维生素 K 3组 1 . 26 9 6 . 9 6士 1 6 . 82 “ ` · 3 0 5 . 6 9
关 二 尸 < 0 . 0 5 , , , , 尸 < 0 . 0 1 v s e o n t r o l , 十 + P < 0 . 0 5 , 十 卡丰 P < 0 . 0 1 v s v z t K :
3 讨 论
3
.
1 lB u 对肝损伤的保护作用
扑热息痛致肝损伤是由于其活性中间产物生成量过多 , 肝内 G s H 被耗竭 , 使扑热息
痛与肝细胞大分子如蛋白质进行共价结合造成肝坏死川 . 同时实验证明:4[ , 扑热息痛 引
起的肝损伤与脂质过氧化有关 , 使 S G P T 升高 , G SH 下降 , M D A 升高 , 而 lB u 能使 S G P T
下降 M D A 至正常水平 , 、所以具抗肝中毒作用 .
lB
u 有抗过氧化作用 , 从而降低 M D A 水平 . 从 lB u 的结构看 , 它较之琉基化合物
R S H 更易从 3个苯环上的分经基上传递 H 原子 , 从而清除自由基 , 达到抗过氧化作用 ;
醋酸泼尼松弓!起 SG P T 升高的机理 , 系诱导肝转氨酶蛋 白质的生物合成增加的结果匕5· 7二.
提示 lB u 能抑制肝转氨酶蛋白质的生物合成的增加 , 从而达到护肝 目的 ,
3
.
2 lB u 对血小板聚集的影响
生理性止血是比较复杂的机制 , 大体包括 3 个时相 : 血管相 、 细胞相 、 血浆相 · 而
作者在前期实验中〔6〕 , 已从血浆相方面初步研究 lB u 使复钙时间缩短 , 使凝血酶原时间缩
短 , 说明 lB u 促凝血作用可能是作用于组织中凝血活性酶形成的外源系统 , 及由其促进纤
维蛋白形成的一系列凝血因子组成 . 本实验从细胞相探讨对血小板聚集的影响而引致的
促凝血作用 , 以 A A , 5一H T 及 A d r 3 种诱导剂 , 各有产生的诱导聚集从不同的途经产生 .
其中 A dr , 不同于 A A 和 5 , H T , 直接产生血小板聚集反应 , 不依赖细胞外 A D P 或其它
血小板刺激物的存在 . 发现在体外 , lB u 对 A A , 5一 H T , A d : 诱导的血小板聚集有明显促
进作用 .
第 6 期 许实波等 : 艾纳香素对护肝及血小板聚集的作用 53
参 考 文 献
李仪奎等 . 中药药理实验方法学 . 上海 : 上海科学技术出版社出版 , 19 9 1 . 203
徐叔云等主编 . 药理实验方法学 , 第一版 . 北京 : 人民卫生出版社 , ’ 19 82 . 8 41
刘耕陶等 . 五味子对扑热息痛肝脏毒性的保护作用 . 药学学报 , 1 987 , 2 ( 9) : 65 0~ “ 4
谢京儿等 . 药物性肝损伤机制与脂质过氧化 . 中国药理学通报 , 1 9 90 , 6 (1 )
刘耕陶等 . 蕊柠对小鼠实验性肝损伤的保护作用 中国药理学报 , 19 89 , 10 ( 1 ) : “ 一 8
许实波等 . 中山大学学报 (自然科学版 ) , 1 9 9 0 , 29 (增刊 ) : 1 12
许实波等 . 艾纳香素对实验性肝损伤的保护作用 · 中国药理学报 , 19 9 3 , 14 (4 ) : 376 ~ 378
S t u d y o n P r o t e e t i o n o f B l u m e a t i n a g a in s t
E x P e r im e n t a l L i v e r In i u
r y a n d
A g g r e g a t i o n o f P l a t e l e t
X u S h i bo
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H u Y i n L i n oY
n g c h e n g Y a n g Z h i ba n g
A b s t r a e t B l u xn e a t in ( 5
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3 ,
,
5
一
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一
7
一
m e t h o x y d i ly d r o
一
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5 a n e w e o m p o u n d
i s o l
a t e d f : o二 B l u m e a B o l s a m u f e r a . B l u Zm g /k g , a n d 4m g / k g , P . 0 . s i g n if i e a n t l y p r o -
r e e t m l e e f r o m li
v e r i n iu r y i n d u e e d b y P a r a e e t a m o a n d P r e d n is o l o n e
.
T h e s e r u m t r a n
-
、 a r: 一i n a 、 e a n d
,
m a l o n d ia ld e h y d e (M D A ) l e v e l s w e r e r e d u e e d b y B l u m e a t i n
.
B l u e o u l d d e
-
。 r o a s o m o r t a li t y In r l i e e b y p a r a e e t a m o l
.
O n t h e o t h e r h a n d
,
B l u e o u ld s i g n i f i e a n t l y p r o
-
m o t e r a t a n d h u rn a n p l a t e l e t a g g r e g a r i o n i n d u e e d b y a r a e h id o n i e a e id ( A A )
,
5
一
h y d o
-
t y p t a m i e e a n d e p in e p !飞r ; , 1 0
.
I t 15 d o s e
一
d e p e n d e n t
·
1
·
2 6 拼m o l / L 15 t h e a p p r o p i a t e d o s e .
K e , w o r d s b l u m e a t i n
, e x p e r im e n t a l l i v e r i n j u r y
, a g g r e g a t i o n o f p l a t e l e t
, a e -
e t a m in o p h e n
S。 。 t io n 。〕 f P h a r m a e ( ) l o g y , S e h o o l o f I i fe S e io n e e s
.
Zh o
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U
n iv e r s i t y
’