全 文 ：＊通讯作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｙａｎｇｃｄ＠ｇｓａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
收稿日期：２０１５－１０－１９；修回日期：２０１５－１２－０４
基金项目：国家自然科学基金（３１１６０１２２）；草业生态系统教育
部重点实验室（甘肃农业大学）开放课题项目（ＣＹｚｓ－２０１１０１１）
作者简介：崔月贞（１９９０－ ），女，甘肃天水人，主要从事植物病理
学的研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｓａｕｃｕｉｙｕｅｚｈｅｎ＠１２６．ｃｏｍ．
ＤＯＩ：１０．１６７４２／ｊ．ｚｇｃｄｘｂ．２０１６－０２－１６
矮生嵩草内生细菌２６４ＡＹ１的鉴定及其生物功能测定
崔月贞，姚玉玲，杨成德＊，薛　莉
（甘肃农业大学／甘肃省草业工程实验室／草业生态系统教育部重点实验室／中－美草地畜牧业
可持续发展研究中心，甘肃　兰州　７３００７０）
摘要：为了开发利用高寒草地优势牧草的内生细菌资源，对分离自矮生嵩草（Ｋｏｂｒｅｓｉａ　ｈｕｍｉｌｉｓ）叶片的内生细菌
２６４ＡＹ１进行了形态观察和１６ＳｒＤＮＡ序列鉴定，并测定了其生物功能。结果表明，菌株２６４ＡＹ１为革兰氏阳性菌，
菌体杆状，大小为１．６３７～４．１２８×０．６１４～１４．８６９μｍ，结合１６ＳｒＤＮＡ基因序列同源性分析，初步鉴定为枯草芽孢杆
菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｌｉｓ）。该菌对马铃薯炭疽病菌（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍｃｏｃｃｏｄｅｓ）、马铃薯坏疽病菌（Ｐｈｏｍａｆｏｖｅａｔａ）和马铃薯
枯萎病菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍａｖｅｎａｃｅｕｍ）的抑菌率分别为８１．１１％、７３．１％和６５．４６％，并且对菌丝具有致畸作用；在含有和
不含色氨酸的培养基上分泌ＩＡＡ的量分别为１６．０５ｍｇ／Ｌ和１０．７５ｍｇ／Ｌ；在Ｐｉｋｏｖａｓｋａｉａ培养液中的有效磷增量为
５．３４ｍｇ／Ｌ，且具有固氮能力。该结果表明矮生嵩草内生细菌２６４ＡＹ１有开发为药肥兼效的微生物制剂的潜力。
关键词：内生细菌；矮生嵩草；拮抗；鉴定
中图分类号：Ｓ８１２　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３－５０２１（２０１６）０２－００９８－０５
　　植物内生细菌作为最具防病潜力与应用价值的
一类生防菌，因其具有种类多、繁殖力高、生活周期
短及易于培养等特点［１］，有被研制为具有无毒无残
留，对人、畜及植物安全，不污染环境，抗药性小的微
生物制剂的潜力［２］。像芽胞杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、假单
胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、沙雷氏菌（Ｓｅｒｒａｔｉａ）和节杆菌
（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）等在控制植物真菌性病害和促生方
面都有突出作用［３］。矮生嵩草（Ｋｏｂｒｅｓｉａ　ｈｕｍｉｌｉｓ）
为莎草科多年生草本植物，是高寒草甸类的主要建
群种和优势种［４］，植株低矮，茎叶柔软，适口性好，再
生性强，耐践踏，粗蛋白质和脂肪含量高。天祝藏族
自治县属青藏高原、黄土高原和青藏高原的交汇地
带［５］。该地区海拔较高、气温较低、日照时数较长，
由于这种特殊的生境条件，使内生细菌具有耐低温
等特性［６］。目前对于高寒草地矮生嵩草内生细菌的
相关研究较少。本试验以天祝藏族自治县东祁连山
高寒草地矮生嵩草的一株内生细菌２６４ＡＹ１为研究
对象，测定其生物功能并通过形态学及１６ＳｒＤＮＡ
序列同源性分析对其进行鉴定，为明确高寒草地矮
生嵩草内生细菌生物功能和系统发育地位提供依
据，并为开发药肥兼效的微生物制剂提供菌种资源。
１　材料与方法
１．１　材料
１．１．１　菌种
供试内生细菌２６４ＡＹ１，分离自天祝藏族自治
县东祁连山高寒草地的矮生嵩草叶片。三种供试病
原真菌为马铃薯坏疽病菌（Ｐｈｏｍａｆｏｖｅａｔａ）、马铃薯
枯萎病菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ａｖｅｎａｃｅｕｍ）和马铃薯炭疽病
菌（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉ　ｃｈｕｍｃｏｃｃｏｄｅｓ）。以上所有菌株均由
甘肃农业大学草地生物多样性实验室保存。
１．１．２培养基
牛肉膏蛋白胨培养基（ＮＡ）；马铃薯葡萄糖培
养基（ＰＤＡ）；Ｋｉｎｇ氏培养基；阿须贝无氮培养基；
Ｐｉｋｏｖａｓｋａｉａ培养基（ＰＫＯ）和蒙金娜培养基，配制方
法参考文献［７］。
１．２　试验方法
１．２．１　鉴定
形态特征观察：将２６４ＡＹ１划线接种于ＮＡ平
板，３次重复，２８℃恒温培养，３ｄ后对其进行革兰氏
染色并观察单菌落形态，在显微镜下观察菌体形态
特征并测量大小。
１６ＳｒＤＮＡ序列分析：按上海生工提供的试剂
盒提取２６４ＡＹ１的ＤＮＡ基因组，用１％琼脂糖凝胶
电泳检测，对条带清晰的ＤＮＡ提取物进行ＰＣＲ扩
增［８］，将ＰＣＲ扩增产物送至上海生工测序，所测序
列导入ＧｅｎＢａｎｋ数据库中，并进行ＢＬＡＳＴ同源性
对比，选取相似性较高的菌株序列，采用 Ｃｌｕｓｔａｌ
—８９—
第３８卷　第２期
Ｖｏｌ．３８　Ｎｏ．２
　　　　　　　　　
中　国　草　地　学　报
Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｇｒａｓｓｌａｎｄ
　　　　　　　　　
２０１６年３月
Ｍａｒ．２０１６
（１．８）和 Ｍｅｇａ（４．０）软件构建系统发育树，确定
２６４ＡＹ１的系统发育学地位。
１．２．２　生物功能测定
抑菌能力测定：以马铃薯炭疽病菌、马铃薯枯萎
病菌及马铃薯坏疽病菌为指示菌，采用平板对峙法
对２６４ＡＹ１进行拮抗能力测定。抑菌率（％）＝（对
照菌落直径－受抑制菌落直径）／（对照菌落直径－
０．６）×１００％。具体步骤参见文献［９］。
分泌吲哚乙酸（ＩＡＡ）能力测定：采用Ｓａｌｋｏｗｓｋｉ
比色法对菌株２６４ＡＹ１进行分泌ＩＡＡ能力的定性
和定量测定，采用纯３－ＩＡＡ制作标准曲线。具体步
骤参见文献［９］。
溶磷能力测定：根据溶磷圈直径与菌落直径的
比值即Ｄ／ｄ值定性确定溶磷能力。将２６４ＡＹ１分
别点接于ＰＫＯ和蒙金娜培养基平板上，Ｄ／ｄ＞１，
则该菌有溶磷能力，且比值越大，溶磷能力越强；
Ｄ／ｄ＝１，则该菌无溶磷能力。将２６４ＡＹ１接种于
ＰＫＯ和蒙金娜培养液中，取上清液用钼锑抗比色法
测定有效磷增量［１０］，并测定培养液的ｐＨ值。
固氮能力测定：将２６４ＡＹ１在 ＮＢ培养液中培
养２４ｈ，取菌悬液１００μＬ和２００μＬ分别接种于阿须
贝无氮平板培养基和培养液，且分别接种无菌水为
对照，３次重复，２８℃温度培养７ｄ，观察其生长状况，
平板上有菌落，且培养液变浑浊者即为阳性［１１］，连
续培养３代后若仍为阳性，则表明该菌株具有较稳
定的固氮能力。
２　结果与分析
２．１　鉴定
２．１．１　形态观察
内生细菌２６４ＡＹ１在 ＮＡ平板上２８℃恒温培
养３ｄ，菌落大小３ｍｍ左右，近圆形，边缘不整齐，菌
落平展，乳白色，不透明，无光泽（图１－Ａ）。革兰氏
染色呈阳性且有芽孢（图１－Ｂ），菌体呈杆状，大小为
（１．６３７～４．１２８）μｍ×（０．６１４～１４．８６９）μｍ。
２．１．２　１６ＳｒＤＮＡ序列分析
提取２６４ＡＹ１的ＤＮＡ经ＰＣＲ扩增后电泳检
测得到一条约１５００ｂｐ的片段。经测序其１６ＳｒＤ－
ＮＡ基因组有１４５９个ｂｐ，将其基因序列导入Ｇｅｎ－
Ｂａｎｋ数据库中，获得登陆号为 ＫＦ８３６５４１．１，经
ＢＬＡＳＴ相似性比对，２６４ＡＹ１和Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｌｉｓ
（ＨＭ７４４７０９）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｘａｒｑｕｉｅｎｓｉｓ（ＧＵ５６８１９６）
及Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｍａｌａｃｉｔｅｎｓｉｓ（ＤＱ９９３６７２）的相似性达
９９％；按Ｎ－Ｊ发构建系统发育树（图２），２６４ＡＹ１与
Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｌｉｓ（ＨＭ７４４７０９）处于同一进化分支，
即亲缘关系最近，而其形态特征基本一致。因此，初
步鉴定２６４ＡＹ１为枯草芽孢杆菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）。
图１　２６４ＡＹ１的单菌落（Ａ）和革兰氏染色（Ｂ）
Ｆｉｇ．１　Ａ　ｓｉｎｇｌｅ　ｃｏｌｏｎｙ（Ａ）ａｎｄ　ｇｒａｍ　ｓｔａｉｎｉｎｇ（Ｂ）ｏｆ　２６４ＡＹ１
图２　２６４ＡＹ１的１６ＳｒＤＮＡ系统发育树
Ｆｉｇ．２　１６ＳｒＤＮＡ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｔｒｅｅ　ｏｆ　２６４ＡＹ１
２．２　生物功能测定
２．２．１　抑菌能力测定
菌株２６４ＡＹ１对马铃薯炭疽病菌、马铃薯坏疽
病菌及马铃薯枯萎病菌具有较好的抑制作用
（图３），根据抑菌率计算公式，其抑菌率分别为
８１．１１％、７３．１％和６５．４６％。
病原真菌菌落边缘的菌丝生长缓慢，镜检发现
菌落 边 缘 的 菌 丝 中 间 或 者 顶 端 膨 大 呈 泡 状
（图４－Ａ），横隔增多，生长端分支增多（图４－Ｂ），扭
曲、缠 绕、增 粗 （图４－Ｃ），有 明 显 的 畸 形，说 明
２６４ＸＹ１使病原真菌的菌丝发生了明显畸形变化，
从而抑制病原菌菌丝的正常生长。
２．１．２　分泌吲哚乙酸（ＩＡＡ）能力测定
含有和不含色氨酸的培养液培养２６４ＡＹ１，菌悬液
加比色液后均能变红（图５），说明２６４ＡＹ１有分泌ＩＡＡ
的能力。标准曲线 ＰＣ：ｙ＝０．０４２ｘ－０．０５１（Ｒ２＝
０．９８９）；Ｓ２：ｙ＝０．００９ｘ＋０．７１９（Ｒ２＝０．９１４）。菌株
２６４ＡＹ１分泌ＩＡＡ的量在含有色氨酸的条件下为
１６．０５ｍｇ／Ｌ，在不含色氨酸的条件下为１０．７５ｍｇ／Ｌ。
２．１．３　固氮能力测定
２６４ＡＹ１能在阿须贝无氮培养基上形成明显的
—９９—
崔月贞　姚玉玲　杨成德等　　　矮生嵩草内生细菌２６４ＡＹ１的鉴定及其生物功能测定
书Ａ：马铃薯炭疽病原菌对照和处理；Ｂ：马铃薯坏疽病原菌对照和处理；Ｃ：马铃薯枯萎病原菌对照和处理；下同
Ａ：Ｎｏｒｍａｌ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｏｆ　Ｃ．ｃｏｃｃｏｄｅｓ；Ｂ：Ｎｏｒｍａｌ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｏｆ　Ｐ．ｆｏｖｅａｔａ；
Ｃ：Ｎｏｒｍａｌ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｏｆ　Ｆ．ａｖｅｎａｃｅｕｍ；ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ａｓ　ｂｅｌｏｗ
图３　２６４ＡＹ１对三种病原真菌的抑制作用
Ｆｉｇ．３　Ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　２６４ＡＹ１ｆｏｒ　３ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｆｕｎｇｕｓ　ｐａｔｈｏｇｅｎｓ
图４　２６４ＡＹ１对３种病原真菌菌丝的影响
Ｆｉｇ．４　Ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　２６４ＡＹ１ａｇａｉｎｓｔ　ｆｏｒ　３ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｈｙｐｈｏａｅ　ｏｆ　ｆｕｎｇｕｓ　ｐａｔｈｏｇｅｎｓ
图５　２６４ＡＹ１的比色反应
Ｆｉｇ．５　２６４ＡＹ１ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ　ｒｅａｃｔｉｏｎ
菌落，且使试管内培养液变浑浊，经过３代连续培养
后仍能形成菌落并使培养液变浑浊，说明２６４ＡＹ１
具有较稳定的固氮能力。
２．１．４　溶磷能力测定
定性测定结果表明，２６４ＡＹ１在ＰＫＯ培养基和
蒙金娜培养基上Ｄ／ｄ值分别为１．１４和１．１３（图６），
说明２６４ＡＹ１具有溶磷能力。绘制磷溶液标准曲
线，其结果为ｙ＝０．２６４７ｘ＋０．２０１（Ｒ２＝０．９６６９）。
在ＰＫＯ 培养液中菌株２６４ＡＹ１的有效磷增量为
５．３４ｍｇ／Ｌ，表明２６４ＡＹ１具有良好的溶解无机磷
作用。ｐＨ值测定结果显示，蒙金娜培养液和ＰＫＯ
培养液的ｐＨ值分别为５．５５和５．６９，较对照分别降
低０．５８和１．１６。
３　讨论
据报道，在各种农作物和果树中发现的内生细
图６　菌株２６４ＡＹ１在蒙金娜（Ａ）和ＰＫＯ（Ｂ）上的溶磷圈
Ｆｉｇ．６　Ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ－ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇ　ｈａｌｏ　ｏｆ　２６４ＡＹ１ｏｎ
Ｍｏｎｇｉｎａ（Ａ）ａｎｄ　ＰＫＯ（Ｂ）ｍｅｄｉｕｍ
菌已经超过１３０多种，其中芽孢杆菌属、假单孢菌
属、以及土壤杆菌属为最常见的属［１２］，本试验中高
寒草地矮生嵩草内生细菌２６４ＡＹ１为枯草芽孢杆
菌。近年来，针对植物内生细菌的生物防治［１３］和生
物肥料功能的研究是内生细菌研究的重点方向。本
试验发现２６４ＡＹ１对马铃薯炭疽病菌的抑制率可高
达８１．１１％，对马铃薯坏疽病菌的抑制率为７３．１％，
该结果高于王涵琦等［１４］筛选的拮抗菌株ＺＨＡ１０对
炭疽病病原菌抑制率（７６．６３％）及畅涛等［１５］筛选的
生防 菌 ＺＡ１ 对 马 铃 薯 坏 疽 病 菌 的 抑 制 率
（７１．８３％），另外该菌株对马铃薯枯萎病也具有一定
抑制效果，抑制率为６５．４６％。因此２６４ＡＹ１具有
一菌多防的潜力。生防细菌在生长过程中分泌多种
具有拮抗活性的物质，包括抗生素类、酶类等，能对
—００１—
中国草地学报　２０１６年　第３８卷　第２期
病原菌的菌丝生长产生抑制作用或能使细胞壁出现
降解的现象［１６］，菌株２６４ＡＹ１能产生哪种抑菌物质
以及作用机理还有待进一步研究。
内生细菌除了可控制病害，还可促进植物生长。
具报道，有固氮、解磷、产生植物激素和分泌抗生素
等能力或至少具有其中之一能力的细菌均能促进植
物生长［１７］。本研究发现２６４ＡＹ１具有解无机磷的
作用，有效磷增量为５．３４ｍｇ／Ｌ，且２６４ＡＹ１具有固
氮能力；另外，２６４ＡＹ１具有分泌ＩＡＡ能力，在含和
不含色氨酸的培养液中分泌ＩＡＡ量分别为１６．０５
ｍｇ／Ｌ和 １０．７５ ｍｇ／Ｌ，高于矮生嵩草内生细菌
２６３ＡＧ５［１８］，说明２６４ＡＹ１在促生方面具有更好的
利用潜力。加入色氨酸后菌株２６４ＡＹ１分泌ＩＡＡ
的量明显增加，说明外源色氨酸对其分泌ＩＡＡ的能
力有促进作用。不同ｐＨ、碳源、氮源、维生素源等
对ＩＡＡ的产生有明显影响，特别是维生素Ｂ６和烟
酸可显著增加细菌代谢中ＩＡＡ的产量［１９］。因此，
可进一步研究如何提高该菌分泌ＩＡＡ的能力，使其
在生产应用中发挥更好的促生作用。
４　结论
矮生嵩草内生细菌２６４ＡＹ１有开发为药肥兼效
的微生物制剂的潜力，这为开发利用微生物农药或
肥料提供菌种资源、进一步为高寒草地内生菌的研
究及其建立功能内生菌资源库奠定了基础。
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Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ　ｖｉｖｉｐａｒｕｍｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａ　Ｚ５ａｎｄ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａ－
ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃａｐａｃｉｔｙ　ｔｏ　ｓｅｃｒｅｔｅ　ＩＡＡ　ａｎｄ　ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ　ｃａｐａｃｉｔｙ
ｔｏｗａｒｄｓ　ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ　ｆｕｎｇｉ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｐｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅ　Ｓｉｎｉｃａ，
２０１０，１９（２）：６１－６８．
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Ｙａｎｇ　Ｃｈｅｎｇｄｅ，Ｌｉ　Ｚｈｅｎｄｏｎｇ，Ｃｈｅｎ　Ｘｉｕｒｏｎｇ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉ－
ｃａｔｉｏｎ，ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ａｎｄ　ｎｉｔｒｏｇｅｎ　ｆｉｘａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｎｄｏｐｈｙｔ－
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—１０１—
崔月贞　姚玉玲　杨成德等　　　矮生嵩草内生细菌２６４ＡＹ１的鉴定及其生物功能测定
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Ｃｈａｎｇ　Ｔａｏ，Ｗａｎｇ　Ｈａｎｑｉ，Ｙａｎｇ　Ｃｈｅｎｇｄｅ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ａｎｄ
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ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｆｒｏｍ　Ｋｏｂｒｅｓｉａ　ｈｕｍｉｌｉｓ　ａｎｄ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｏｆ　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇ，ＩＡＡ　ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ　Ａ－
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Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ
Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉａ　２６４ＡＹ１ｆｒｏｍＫｏｂｒｅｓｉａ　ｈｕｍｉｌｉｓ
ＣＵＩ　Ｙｕｅ－ｚｈｅｎ，ＹＡＯ　Ｙｕ－ｌｉｎｇ，ＹＡＮＧ　Ｃｈｅｎｇ－ｄｅ，ＸＵＥ　Ｌｉ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｐｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｇａｎｓｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ／Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｇｒａｓｓｌａｎｄ
Ｅｃｏｓｙｓｔｅｍ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ／Ｐｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｇａｎｓｕ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，
Ｓｉｎｏ－Ｕ．Ｓ．Ｃｅｎｔｅｒｓ　ｆｏｒ　Ｇｒａｚｉｎｇｌａｎｄ　Ｅｃｏｓｙｓｔｅｍ　Ｓｕｓｔａｉｎａｂｉｌｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ　７３００７０，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ　ｅｘｐｌｏｉｔ　ａｎｄ　ｕｔｉｌｉｚｅ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ｆｒｏｍ　ａｌｐｉｎｅ　ｇｒａｓｓｌａｎｄ，ｔｈｅ　ｓｔｒａｉｎ
２６４ＡＹ１ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｌｅａｆ　ｏｆ　Ｋｏｂｒｅｓｉａ　ｈｕｍｉｌｉｓ　ｗａｓ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ａｎｄ　１６ＳｒＤ－
ＮＡ　ｇｅｎｅｓ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ．Ｔｈｅ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ｍｅａｓｕｒｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｃｅｌｓ　ｏｆ　２６４ＡＹ１
ｗａｓ　ｒｏｄｓ－ｓｈａｐｅｄ，１．６３７～４．１２８×０．６１４～１４．８６９μｍ，ｇｒａｍ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ．Ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　１６ＳｒＤＮＡ　ｇｅｎｅｓ，ｔｈｅ
ｓｔｒａｉｎ　ｗａｓ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ａｓ　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｌｉｓ　ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙ．Ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｒａｔｅｓ　ｗｅｒｅ　８１．１１％，７３．１％ａｎｄ　６５．
４６％ｏｆ　２６４ＡＹ１ｆｏｒ　Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ　ｃｏｃｃｏｄｅｓ，Ｐｈｏｍａ　ｆｏｖｅａｔａ　ａｎｄ　Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ａｖｅｎａｃｅｕｍ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｎｄ
２６４ＡＹ１ｗａｓ　ａｂｌｅ　ｔｏ　ｍａｋｅ　ｈｙｐｈａ　ｄｅｆｏｒｍｅｄ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＩＡＡ　ｓｅｃｒｅｔｅｄ　ｂｙ　２６４ＡＹ１ｗａｓ　１６．０５ｍｇ／
Ｌ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｋｉｎｇ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗｉｔｈ　Ｔｒｐ，ａｎｄ　１０．７５ｍｇ／Ｌ　ｗｉｔｈｏｕｔ　Ｔｒｐ．Ｔｈｅ　ｉｎｃｒｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ａｖａｉｌａｂｌｅ　Ｐ　ｉｎ　Ｐｉｋｏｖａｓｋａｉａ
ｃｕｌｔｕｒｅ　ｆｌｕｉｄ　ｗａｓ　５．３４ｍｇ／Ｌ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｔｒａｉｎ　２６４ＡＹ１ｐｏｓｓｅｓｓｅｄ　ｔｈｅ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｔｏ　ｆｉｘ　ｎｉｔｒｏｇｅｎ．Ｓｏ　ｔｈｅ　ｓｔｒａｉｎ
２６４ＡＹ１ｈａｓ　ｔｈｅ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ａ　ｄｕａｌ　ｐｕｒｐｏｓｅ　ｆｏｒ　ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ－ｆｅｒｔｉｌｉｚｅｒ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａ；Ｋｏｂｒｅｓｉａ　ｈｕｍｉｌｉｓ；Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ　ａｂｉｌｉｔｙ；Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
（责任编辑　李　平）
—２０１—
中国草地学报　２０１６年　第３８卷　第２期