全 文 ：黔产艾纳香黄酮抗氧自由基的研究
李琴山1，刘 洋2 (1．贵阳医学院检验系，贵州贵阳 550004;2．北京工业大学生命科学与生物工程系，北京 100029)
摘要 ［目的］研究黔产艾纳香黄酮对氧自由基的清除能力。［方法］以黔产艾纳香为研究对象，提取其黄酮;采用邻二氨菲 － Fe(Ⅱ)/
H2O2 体系产生羟自由基(·OH)，用联苯三酚法在碱性溶液中自氧化反应产生超氧阴离子自由基(O
2 －·)，并采用分光光度法测定黔产
艾纳香黄酮对 O2 －·和·OH的清除作用。［结果］高剂量组的黔产艾纳香黄酮对 O2 －·具有明显的清除及抑制作用，对·OH也有一定
的清除作用，清除率为(19． 82% ±0． 17%)。［结论］黔产艾纳香黄酮对 O2 －·具有明显清除及抑制作用，对·OH也有一定的清除作用。
关键词 艾纳香;分光光度法;超氧阴离子自由基
中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2013)19 －08449 －02
Study on Scavenging Action of Blumea flavanones on Oxygen Free Ｒadical
LI Qin-shan et al (Department of Laboratory of Guigang Medical University，Guiyang，Guizhou 550004)
Abstract ［Objective］To study the scavenging action of Blumea flavanones on oxygen free radical． ［Method］Auto-oxidation in alkalcsent
solution with the help of pyrogallol can produce O2 －· and the system of 1，10-phenathroline-Fe(Ⅱ)/H2O2 can generate ·OH． Spectropho-
tometry was used to observe the effects of Blumea flavanones upon O2 －· and ·OH in vitro． ［Ｒesult］High dosage Blumea flavanones has ob-
vious scavenging and inhibiting effect on O2 － ·，and can reduce the level of ·OH by (19． 82% － 0． 17%)． ［Conclusion］ Guizhou’s
Blumea flavanones could scavenge and inhibit O2 －· significantly and could scavenge ·OH as well．
Key words Blumea flavanones;Spectrophotometry;Superoxide anion radical
基金项目 贵州省中医药管理局基金 QZYY2010 － 2。
作者简介 李琴山(1976 －) ，男，贵州遵义人，副教授，博士，从事分子
遗传学研究，E-mail:qinshanli@ gmail． com。
收稿日期 2013-04-11
艾纳香(Blumea flavanones)为菊科艾纳香属(Blumea)植
物，苗药名档窝凯，其性味温辛，有温中活血和祛风除湿之功
效，可用于治疗淤血阻滞、寒湿泻痢和高血压等病症。现代药
理学研究发现，黄酮类物质是艾纳香主成分之一，具有降压和
抗凝血等功效。因此，富含黄酮类物质的艾纳香对O2 －·和
·OH清除率及其抗氧化活性的研究受到国内外学者的广泛关
注，并且这些研究亦将为艾纳香的临床开发和应用提供理论依
据［1 －6］。笔者对黔产艾纳香黄酮对氧自由基清除能力进行研
究，以期为艾纳香的进一步开发利用提供依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。黔产艾纳香，购自遵义市药材公司，经鉴
定为 Blumea Flavanones的干燥全草。
1． 1． 2 主要仪器。721 紫外 －分光光度计，购自上海光电
研究所。
1． 1． 3 主要试剂。连苯三酚、过氧化氢、硫酸亚铁铰、磷酸
氢钾、邻二氮菲、磷酸二氢钾及氢氧化钠均为国产分析纯，
市售。
1． 2 方法
1． 2． 1 艾纳香黄酮的制备［7］。精密称取 10． 000 g 艾纳香
药材粗粉，加入 100 ml乙醇，冷浸 24 h，滤过，加热回流 1 h，
抽滤，滤液加适量的水使含醇量为 70%后，在分液漏斗中加
石油醚 70 ℃萃取除去叶绿素，浓缩至浓度为 1 g /ml;取浓缩
液 1． 0 ml加水稀释至5 ml，于1 000 r /min离心5 min，上清液
用 0． 45 mm 微孔滤膜过滤，滤液作为供试品(浓度为 2． 0
g /L) ，分别取供试品用水稀释使其含艾纳香黄酮量分别为
50、100和 200 mg /ml。
1． 2． 2 O2 －·的生成及清除率的测定。利用 O2 －·清除剂
可使连苯三酚自氧化产物在 322 nm波长处吸收峰受到抑制
的特点，进行光化学法测定，可间接测得 O2 －·生成及 O2 －·
的清除率。试验方法如下［8］:在总容积 9 ml浓度 50 mmol /L
的 PBS(pH8． 34)溶液、浓度 0． 2 mmol /L 连苯三酚，温度 25
℃，加入一定量艾纳香黄酮提取物，测得反应开始后第 10 s
的 A322值(以相同浓度艾纳香黄酮作对比，消除试样本身在
322 nm处的吸收)。另取试剂同上，不加艾纳香黄酮以作对
照，测反应开始后第 10 s的 A322值。清除率按式(1)计算:
O2 －·清除率(%)=(A空 － A样)/A空 ×100 (1)
1． 2． 3 O2 －·的生成及抑制率的测定。反应体系同上，用动
态方法测定 O2 －·生成的反应初速率 V0(A /min)，反应启动后
每 30 s测定相应 A322值，至 4． 5 min止。将所得 A322值与时间 T
(min)进行回归分析，其斜率为 V0。抑制率按式(2)计算:
O2 －·抑制率(%)=(V0空 － V0样)/V0空 ×100 (2)
1． 2． 4 ·OH的生成及清除率的测定。试验方法如下 ［9］:
在浓度 9． 75 mmol /L的 FeSO4、浓度 0． 75 mmol /L 的邻二氮
菲、浓度 150 μmol /L的 PBS(pH7． 34)体系中，加浓度0． 01%
的 H2O2(损)或不加 H2O2(未损) ，于 37 ℃作用 60 min，分别
测定 λ536nm的 A值，得 A损与 A未损。然后在浓度 0． 75 mmol /L
邻二氮菲、浓度 9． 75 mmol /L FeSO4、浓度 150 μmol /L PBS
(pH 7． 34)体系中，加浓度 0． 01%的 H2O2，再加入一定量的
艾纳香黄酮;以同浓度艾纳香黄酮作参比，测定 A536即得 A样;
·OH清除率按式(3)计算:
·OH清除率(%)=(A样 － A损)/(A未损 － A损)×100 (3)
1． 2． 5 统计学方法。所有数据均用 SPSS13进行统计分析，
用 χ ± s表示，采用方差分析、线性相关和回归分析。
2 结果与分析
2． 1 艾纳香黄酮对O2 －·的清除作用 连苯三酚自氧化过
程中 O2 －·和有色中间产物在 322 nm处有特征性吸收，因此
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2013，41(19):8449 － 8450 责任编辑 石金友 责任校对 卢瑶
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2013.19.109
根据 A322值的变化可观察艾纳香对 O
2 －·的清除作用。试验
发现加入艾纳香黄酮后，A322减少(见表 1) ，表明艾纳香黄酮
对 O2 －·具有清除作用，对连苯三酚自氧化过程有抑制
作用。
表 1 艾纳香黄酮对 O2 －·的清除作用
组别 A322 O2 －·清除率∥%
空白组 0． 615 ±0． 052 0
艾纳香低剂量组 0． 607 ±0． 032 2． 57a
艾纳香中剂量组 0． 593 ±0． 027 3． 89a
艾纳香高剂量组 0． 561 ±0． 016 10． 28b
注:与空白组比较，a指差异不显著，b指差异显著。
2． 2 艾纳香黄酮对O2 －·生成的抑制作用 用动态方法测
定反应初速率 V0(A /min) ，其回归相关系数在 0． 992 5 ～
0． 999 0。加艾纳香黄酮后 O2 －·生成速率 V0 明显减小(见
表 2) ，表明艾纳香黄酮能明显抑制 O2 －·的生成。
表 2 艾纳香黄酮对 O2 －·生成的抑制作用
组别 V0∥A/min O2 －·清除率∥%
空白组 0． 327 ±0． 022 0
艾纳香低剂量组 0． 319 ±0． 016 1． 6a
艾纳香中剂量组 0． 275 ±0． 013 12． 5b
艾纳香高剂量组 0． 224 ±0． 007 27． 1b
注:与空白组比较，a指差异不显著，b指差异显著。
2． 3 艾纳香黄酮对·OH的清除作用 根据试验方法测定
对照组(损)、空白组(未损)和艾纳香高剂量组的 V563值，观
察高剂量艾纳香黄酮对·OH的清除作用。结果表明，对照
组(损)的 V563值为(0． 256 3 ±0． 023 0) ，空白组(未损)的 V563
值为(0． 708 9 ± 0． 062 0) ，艾纳香高剂量组的 V563值为
(0． 346 2 ±0． 024 0) ，与对照组差异明显。计算得艾纳香高
剂量组对·OH的清除率为(19． 82% ±0． 17%)。
3 讨论
自由基又称游离基，是指化合物的分子在光热等外界条
件下，共价键发生均裂而形成的具有不成对电子的原子或基
团。研究表明，自由基从产生到衰亡的过程就是电子转移的
过程。在生命体系中，电子的转移是一种最基本的运动，而
氧的得电子能力很强。因此，生物体内许多化学反映都与氧
有关。科学家们发现损害人体健康的自由基几乎都与那些
活性较强的含氧物质有关，他们把与这些物质相结合的自由
基叫作活性氧自由基。活性氧自由基对人体的损害实际上
是一种氧化过程。因此，要降低自由基的损害，就要从抗氧
化做起，从而对衰老、动脉粥样硬化、脑的缺血再灌注损伤进
行保护［10 －12］。试验通过体外产生氧自由基系统，体外氧自
由基的清除作用试验证明，艾纳香黄酮可明显的清除及抑制
O2 －·的产生，对·OH也有一定的清除作用，说明艾纳香黄
酮是通过对自由基(特别是羟自由基)的清除作用以达到抗
氧化的作用，为黔产艾纳香的临床应用及贵州中药的开发利
用提供了依据。
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