全 文 ：　　收稿日期:2009-11-17;修回日期:2010-01-22
作者简介:王国英(1983-), 女 ,蒙古族 , 内蒙古医学院 2007级在读硕士研究生。
通讯作者:薛培凤 ,教授 , 医学博士 , 硕士研究生导师 , E-mail:xpfdc@vip.sina.com内蒙古医学院药学院 , 010059
紫外可见分光光度法测定蒙药蓝盆花中总黄酮的含量
王国英 , 　薛培凤＊ , 　高汝燕 , 　乌　静
(内蒙古医学院 药学院 , 内蒙古 呼和浩特 010059)
　　摘　要:目的:建立蒙药蓝盆花中总黄酮的含量测定方法。方法:采用紫外可见分光光度法测定 , 检测波长
为 510nm。结果:芦丁在浓度 16.448 ～ 57.568μg/mL范围内呈良好线性关系 , 回归方程 Y=89.981X+0.4305,
(r=0.9994), 加样回收率为 99.01%, RSD=1.97%。结论:该方法简便 、灵敏 、准确 , 可用于蒙药蓝盆花中总黄
酮的含量测定。
关键词:蓝盆花;总黄酮;紫外可见分光光度法
中图分类号:R291.2　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1004-2113(2010)02-0219-04
DETERMINATIONOFTOTALFLAVONOIDS
OFSCABIOSATSCHILLIENSISGRUNNING
BYUV-VISIBLESPECTROPHOTOMETRY
WANGGuo-ying, 　XUEPei-feng, 　GaoRu-yan, 　etal.
(DepartmentofPharmacy, InnerMongoliaMedicalColege, Hohhot010059 China)
　　Abstract:Objective:ToestablishthedeterminationmethodfortotalflavonoidsinScabiosatschil-
iensisGrunning.Methods:UsingUV-visiblespectrophotometricdeterminationwiththedetection
wavelengthof510nm.Results:Samplesofthetotalconcentrationofflavonoids16.448 ～ 57.568μg/mL
withinlinearrelationshipwasfound.TheregressionequationwasY=89.981X+0.4305 (r=
0.9994).Theaveragerecoveryforrutinwas99.01% (RSD=1.97%).Conclusion:Themethodis
simple, sensitive, accurateandcanbeusedfortotaldeterminationofflavonoidsinScabiosatschilien-
sisGrunning.
Keywords:ScabiosatschiliensisGrunning;flavonoids;UV-visiblespectrophotometry
　　蒙药蓝盆花(又称蒙古山萝卜花)来源于川
续断科植物窄叶蓝盆花 ScabiosacomosaFisch.Ex
Roem.etSchult和华北蓝盆花 Scabiosatschiliensis
Grunning的干燥花序 ,蒙药名为陶森 -陶日莫 ,主
产于内蒙古 、黑龙江 、吉林 、辽宁 、河北等省
区 [ 1 ～ 3] 。 《中华人民共和国卫生部药品标准 》(蒙
药分册)中规定两者均作为正品药用 。蒙医在临
床上用以清热 、清 “协日 ”, 主要用于治疗肺热 、
肝热 、咽喉热 [ 4] ,肝火头痛 、发烧 、肺热咳嗽 、黄疸
等病 [ 5] 。
蓝盆花中主要含有黄酮类化合物 ,现代药理研
究证明其总黄酮具有抗炎 、解热 、抗氧化 、对肾缺血
再灌注损伤的保护作用 、镇静 、舒张外周血管 、降低
血压 、免疫 、胰脂肪酶抑制作用等功能 [ 6, 7] 。故总
·219·内蒙古医学院学报　2010年 4月　第 32卷　第 2期DOI :10.16343/j.cnki.issn.2095-512x.2010.02.002
黄酮含量高低与蓝盆花的功效具有直接的关系。
因此 ,选择总黄酮作为含量测定的指标。以芦丁为
对照品 ,以亚硝酸钠 -硝酸铝 -氢氧化钠为显色
剂 ,采用分光光度法进行含量测定 ,此法简便 、快
捷 ,回收率在 98% ～ 101%。
1　材料与方法
1.1　材料
蓝盆花药材于 2008-07购于内蒙古药材公
司 ,经内蒙古医学院药学院庞秀生老师鉴定为川续
断科植物华北蓝盆花 ScabiosatschiliensisGrunning
的干燥花序;芦丁对照品 , 批号 100080 -200306
(中国药品生物制品鉴定所);其余试剂均为分析
纯 。
752N紫外可见分光光度计(上海精密科学仪
器有限公司);DZKW-D-2电热恒温不锈钢水浴
锅(北京市永光明医疗仪器厂);AL-204电子天
平(上海);AS3120超声清洗机(江苏);RE-52c
旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)。
1.2　方法
1.2.1　对照品溶液　称取经 105℃干燥至恒重的
芦丁对照品 10.28mg,精密称定 ,置 50mL容量瓶
中 ,用适量的 70%乙醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,
即得(每 1mL中含芦丁 0.2056mg)。
1.2.2　供试液的制备　取本品粗粉(粉碎 ,过 40
目筛)约 1g,精密称定 ,置碘量瓶中 ,加 70%乙醇
20mL,超声提取 0.5h,过滤 ,洗净药渣 ,减压回收溶
剂 ,残渣用 70%乙醇溶解并定容于 25mL容量瓶
中 ,再精密吸取 0.5mL,置 25mL量瓶中 ,加 70%乙
醇稀释至刻度 ,摇匀 ,即得 。
1.2.3　测定波长的选择　分别取芦丁对照品溶液
和蓝盆花样品溶液 ,显色后 ,在 200 ～ 700nm波长
范围进行光谱扫描 ,上述两种溶液在波长 510nm
处均有吸收 ,且吸收峰较平稳 ,故选择 510nm波长
作为测定波长。
1.2.4　显色方法的优化　通过正交试验对显色方
法进行了优化。精密量取 0.5mL对照品溶液置于
25mL容量瓶中 ,按 L9 (34)正交设计表的组合 ,以
5%亚硝酸钠和 10%硝酸铝体积(各加相同体积)
(A),氢氧化钠浓度(B),氢氧化钠体积 (C)作为
考察因素 ,在 510nm波长处进行吸光度测定。实
验数据见表 1、2。
1.2.5　提取方法的选择　将干燥的蓝盆花药材 ,
粉碎后过 40目筛 ,制成实验中所用的蓝盆花药材
粗粉。称取蓝盆花药材粗粉约 1.0g,三份 ,精密称
定 ,分别按下述三种方法提取:(1)超声提取法:加
60%乙醇 25mL,超声提取 1h;(2)热回流提取法:
加 60%乙醇 25mL, 75℃水浴回流提取 2h;(3)脱脂
后回流提取法:将药材在索氏提取器中经石油醚脱
脂至无色 , 药渣挥尽石油醚后 , 加入 60%乙醇
25mL, 75℃水浴回流 2h。
分别过滤 ,精密量取续滤液 0.5mL,置 25mL
容量瓶中 ,按 1.2.4中优选出的方法进行显色后测
定吸光度值 ,实验数据见表 3。
表 1　显色方法因素水平
Tab.1　FactorsandLevels
水平 因　　素A(mL) B(%) C(mL) D(空白)
1 0.3 1 1 1
2 0.5 4 4 2
3 1.0 10 10 3
表 2　显色方法正交试验结果
Tab.2　L9(3×4)orthogonaldesiglandresults
试验号 因　　素A B C D 吸光度(A)
1 1 1 1 1 0.200
2 1 2 2 2 0.415
3 1 3 3 3 0.405
4 2 1 2 3 0.364
5 2 2 3 1 0.428
6 2 3 1 2 0.394
7 3 1 3 2 0.445
8 3 2 1 3 0.266
9 3 3 2 1 0.493
K
1 0.340 0.336 0.287 0.374
K2 0.395 0.370 0.424 0.418
K3 0.401 0.431 0.426 0.345
R 0.061 0.095 0.139 0.073
1.2.6　正交实验法优选总黄酮的超声提取工艺　
本实验选定乙醇浓度(%)、乙醇体积 (mL)、提取
时间(h)、提取次数(次)作为考察因素 ,每个因素
各取 3个水平 ,应用 L9(34)正交表安排实验 。试
验数据见表 4、5。
·220· ActaAcadMedNeiMongol　Apr.2010　Vol.32　 No.2
表 3　提取方法选择
Tab.3　Choicesofextractionmethod
提取方法 吸光度 含量(%) 平均含量(%)
超声提取 0.386 4.38
0.388 4.40 4.40
0.388 4.40
回流提取 0.336 3.81
0.340 3.85 3.84
0.341 3.87
脱脂回流提取 0.396 4.50
0.397 4.51 4.51
0.399 4.53
表 4　超声提取工艺因素水平
Tab.4　Thefactorsandlevelsofultrasonicextraction
水平 因　　素A(%) B(mL) C(h) D(次)
1 50 20 0.5 1
2 60 40 1.0 2
3 70 60 1.5 3
表 5　超声提取工艺正交试验结果
Tab.5　TheL9(3×4)orthogonalresultsofultrasonicextraction
试验号 因　　素A B C D
吸光度
(A)
黄酮含量
(%)
1 1 1 1 1 0.400 4.55
2 1 2 2 2 0.325 3.71
3 1 3 3 3 0.304 3.53
4 2 1 3 2 0.361 4.15
5 2 2 1 3 0.364 4.13
6 2 3 2 1 0.374 4.29
7 3 1 3 2 0.357 4.06
8 3 2 1 3 0.385 4.39
9 3 3 2 1 0.388 4.39
K1 0.343 0.373 0.386 0.384
K2 0.366 0.358 0.358 0.352
K3 0.377 0.355 0.342 0.350
R 0.034 0.018 0.044 0.034
1.2.7　标准曲线的制备 　精密吸取对照品溶液
2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0 mL置 25mL容量瓶中 ,
制成一系列标准溶液 。分别加 5%亚硝酸钠 1mL,
摇匀 ,静置 6min,再加 10%硝酸铝 1mL,摇匀 ,静置
6min,再加 10%氢氧化钠试液 4.0mL,用 70%乙醇
稀释至刻度 ,摇匀 ,静置 15min后 , 在 510nm波长
处测定吸收度。实验数据附图 ,以吸收度对溶液浓
度进行回归分析 , 回归方程为 Y=89.981X+
0.4305 , (r=0.9994),结果表明 ,芦丁在 16.448 ～
57.568μg/mL范围内与吸光度呈良好线性关系。
表 6　总黄酮标准曲线试验数据
Tab.6　Thecriterioncurveofflavones
实验
序号
对照品浓度
(μg/mL)
测得吸收
度值 回归方程 相关系数
1 16.448 0.181
2 24.672 0.262
3 32.896 0.365
4 41.120 0.454
5 49.344 0.543
6 57.568 0.634
Y=89.981X+0.4305r=0.9994
1.2.8　测定法　精密量取供试品溶液 0.5mL,置
25mL量瓶中 ,按【标准曲的线制备】项下的方法 ,
自 “加 5%亚硝酸钠 1.0mL”起 ,依法测定吸收度 ,
从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的含量
(μg/ml),计算 ,即得 。
1.2.9　精密度试验 　取同一供试品溶液 , 在
510nm处重复测定吸收度 , 结果显示 , RSD=
0.97%(n=5),表明该方法精密度良好。
1.2.10　重复性试验　取样品 5份 ,每份取样量约
1g,精密称定 ,分别按【测定法】项下操作测定含量 ,
结果平均含量为 4.17%, RSD=0.51%(n=5),表明
该方法重复性良好。
1.2.11　稳定性考察　取同一供试品溶液按【测
定法】操作 , 分别于 0、 10、 20、 30、 40、 50、 60、70、
·221·内蒙古医学院学报　2010年 4月　第 32卷　第 2期
80min测定吸收度 , RSD=1.77%,结果表明 ,黄酮
类化合物显色后 ,稳定时间比较短 ,在 80min之内
测定时 ,稳定性较好。
1.2.12　加样回收试验　取已知含量的供试品粉
末 , 5份 ,各约 0.5g,分别精密加入经 105℃干燥至
恒重的芦丁对照品适量 ,按【供试品溶液的制备方
法】项下方法操作 ,制备供试品溶液 , 精密吸取
0.5mL,置 25mL量瓶中 , 照【标准曲线的制备】项
下的方法 ,自 “加 5%亚硝酸钠 1mL”起 ,依法测定
吸收度 ,从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁含量
(μg/mL),计算回收率 ,实验数据见表 7,结果平均
回收率为 99.01%, RSD=1.97%。
表 7　加样回收测定结果
Tab.7　Theresultofrecoveryratetest
序号 样品量(g)
对照品量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%) RSD(%)
1 0.500 21.09 101.80
2 0.500 21.06 100.90
3 0.500 21.04 98.53
4 0.501 21.04 98.12
5 0.501 21.06 100.55
99.01 1.97
1.2.13　样品含量测定　取 2批不同批号的蓝盆
花药材 ,按【供试品溶液的制备方法】项下方法操
作 ,制备供试品溶液 ,精密吸取 0.5mL,置 25mL量
瓶中 ,按【测定法】项下的方法操作并测定吸光度 ,
计算含量 ,测定结果见表 8,两批蓝盆花中总黄酮
含量均在 4.0%以上 。
表 8　不同批号样品的测定结果
Tab.8　Theresultofdifferentsample
批号 称样量(g)含量(%)均含量(%) RSD(%)
1.005 4.09
200807 1.001 4.06 4.08 0.35
1.001 4.08
1.004 4.19
200903 1.004 4.14 4.17 0.63
1.006 4.18
2　讨论
　　文献报道总黄酮含量测定多用亚硝酸钠 -硝
酸铝 -氢氧化钠系统显色[ 8, 9] ,但 3种溶剂浓度和
加入量各有不同 ,因此我们通过正交试验对显色方
法进行了优化。结果表明 A3B3C2为最优的试验
条件 ,即在供试液中先加 5%亚硝酸钠 1mL,摇匀 ,
静置 6min,再加 10%硝酸铝 1mL,摇匀 ,静置 6min,
再加 10%氢氧化钠试液 4.0mL,定容 ,摇匀 ,静置
15min后 ,测定吸光度。
我们通过对提取方法进行考察 ,结果表明 ,超
声提取和脱脂后回流提取方法比回流提取效率高 ,
考虑到脱脂回流方法较为繁琐 ,且脱脂回流得出总
黄酮含量与超声提取得出的含量相差不大 ,而超声
提取方法简便 、易行 ,因此采用了超声提取方法 。
我们通过正交试验对超声提取方法工艺进行了优
化 ,得出 A3B1C1D1为最优的试验条件 ,即加入乙
醇浓度为 70%,乙醇的体积为 20mL,提取时间为
0.5h,提取次数为 1次。
方法学考察表明 , 采用紫外分光光度法测定
蓝盆花中的总黄酮含量 ,方法准确 、简单 、快捷 ,易
于普及 ,可以作为制定质量标准的参考。
参考文献
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(责任编辑:程立新)
·222· ActaAcadMedNeiMongol　Apr.2010　Vol.32　 No.2