全 文 ：·专　栏·
　·中药与天然药·
作者简介:王自军 ,男 ,讲师 ,工程硕士生　　TeL:13579451232　　E-mail:wangzijun1017@tom.com
微波技术提取并测定金钱草中总黄酮和多糖的含量
王自军 1, 2 ,代斌 2 ,王富民 1(1.天津大学化工学院 ,天津 300072;2.石河子大学化学化工学院 ,新疆石河子 832002)
摘要:目的　从金钱草中提取总黄酮和多糖 , 并测定其含量。方法　运用微波技术提取金钱草总黄酮和多糖 , 用比色法测定
总黄酮和多糖含量。结果　测得金钱草中总黄酮含量为 1.36%, 平均回收率为 100.4%, RSD为 1.56%(n=5);多糖含量为
8.46%,平均回收率为 101.6%, RSD为 1.23%(n=5)。结论　运用微波技术从金钱草中联合提取总黄酮和多糖 ,反应速度加
快 , 提高了提取效率。
关键词:微波技术;金钱草;总黄酮;多糖;提取;含量测定
中图分类号:R284.2　　　文献标识码:A　　　文章编号:1007-7693(2008)07-0621-02
MicrowaveTechniqueExtractionandDeterminationofTotalFlavonoidsandPolysaccharidesinLysimachia
ChristinaeHance
WANGZi-jun1, 2 , DAIBin1 , WANGFu-min2(1.SchoolofChemicalEngineeringandTechnologyofTianjinUniversity, Tianjin
300072, China;2.ColegeofChemistryandChemicalEngineering, ShiheziUniversity, Shihezi832002, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　ToextractanddeterminetotalflavonoidsandpolysaccharidesinLysimachiaChristinaeHance.METH-
ODS　TotalflavonoidsandpolysaccharidesinLysimachiaChristinaeHancewereextractedbymicrowavetechniqueanddeterminedby
colorimetry.RESULTS　TotalflavonoidsinLysimachiaChristinaeHancewas1.36%, andrecoveryratewas100.4%, RSDwas
1.56%(n=5);PolysaccharidesinLysimachiaChristinaeHancewas8.46%, andrecoveryratewas101.6%, RSDwas1.23%(n=
5).CONCLUSION　MicrowaveTechniqueisappliedtoextractingtotalflavonoidsandpolysaccharidesinLysimachiaChristinae
Hanceforthefirsttime.Thereactionspeedisfasterandtheresultissatisfactory.
KEYWORDS:MicrowaveTechnique;LysimachiaChristinaeHance;totalflavonoids;polysaccharide;extraction;determination
　　金钱草为报春花科珍珠菜属植物过路黄的新鲜或干燥
全草 [ 1] , 又名大金钱草 、对座草 、路边黄 、遍地黄等。 主要分
布于长江流域 ,北至陕西 , 南到贵州 、四川 、云南等省。其中
以四川为主产地。金钱草含有酚性成分 、黄酮类 、甙类 、鞣
质 、挥发油 、氨基酸 、胆碱 、甾醇 、氯化钾 、内脂类等成分。金
钱草味苦 , 酸 ,微寒。归肝 , 胆 , 肾 , 膀胱经。功能清热解毒 ,
利尿排石 , 活血散淤。用于肝 、胆结石 , 胆囊炎 , 黄疸性肝炎 ,
泌尿系结石 , 水肿 , 跌打损伤 , 毒蛇咬伤 , 及药物中毒;外用治
化脓性炎症 , 烧烫伤。相传四川百草堂验方抄本中有金钱草
治疗 “黄沙走疸”的记载 [ 2] , 迄今至少已有二百余年的应用
历史。近五十年 , 国内学者对金钱草的化学成分 、药理作用
及临床应用进行了大量研究 ,但对其提取方法的研究较少。
　　微波技术的应用 , 近年来得到很大发展。微波具有穿透
力强 、选择性高 、加热效率高等特点。 微波辐射(MWI)可以
大幅度提高提取速度 , 缩短提取时间 [ 3] 。微波技术应用于植
物细胞破壁 , 有效地提高了收率 [ 4] 。
　　本实验运用微波技术对金钱草中总黄酮和多糖进行联
合提取及含量测定 [ 5] , 为金钱草黄酮和多糖的研究和开发利
用奠定基础。
1　仪器与试药
　　UV-2401型分光光度计(日本岛津), MCL-3型连续微波
反应器(四川大学无线电系)。芦丁对照品购自中国药品生
物制品检定所 , (+)葡萄糖(105 ℃干燥恒重),苯酚 、浓硫酸
均为分析纯。金钱草购自石河子中药店 ,粉碎后备用。
2　金钱草中总黄酮和多糖的含量测定
2.1　样品溶液制备　取金钱草约 2 g, 精密称量 , 用滤纸包
好 , 置于索氏提取器中 , 用石油醚(60-90 ℃)水浴回流脱脂 2
次(每次 2h), 弃去石油醚提取液。金钱草挥干石油醚后 , 置
100mL烧瓶中 , 将此烧瓶放入 MCL-3型连续微波反应器中 ,
用 80%乙醇回流提取两次 , 调整功率 560, 500, 400, 350 W,
每次反应时间 20min,提尽黄酮。另用少量 80%乙醇多次洗
涤金钱草 , 并入提取液中 , 定量转移入 100 mL量瓶中 , 用
80%乙醇定容 , 摇匀 ,即得测总黄酮之金钱草样品液 。
　　将提尽黄酮后的金钱草置于 100 mL烧瓶中 , 放入 MCL
·621·中国现代应用药学杂志 2008年 7月第 25卷第 7期　　　　　　　　　　　　　　　ChinJMAP, 2008July, Vol.25No.7
DOI :10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2008.s1.003
-3型连续微波反应器中 , 用 80%乙醇回流提取 20 min, 调
整功率 560, 500, 400, 350W, 以除去单糖及一些甙类 , 弃去提
取液。金钱草挥干乙醇后 , 再放入 MCL-3型连续微波反应
器中 , 继续以水回流提取 2次(每次 20 min),调整功率 560,
500, 400, 350 W, 减压抽滤 , 合并滤液。水浴浓缩滤液后 , 用
蒸馏水定容至 250 mL, 即为测多糖的金钱草样品液。
2.2　总黄酮含量的测定
2.2.1　标准曲线制备
　　精密称取芦丁对照品 10mg, 置 25 mL量瓶中 , 加 80%乙
醇溶解 , 定容 ,精密吸取 0.0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0 mL, 分置
于 10mL量瓶中 ,加 5%亚硝酸钠 0.3 mL, 放置 6 min, 再加
10%硝酸铝 0.3 mL,放置 6 min,加 4%氢氧化钠 4 mL, 加水
至刻度 , 摇匀。进行全波长扫描 , 在 510 nm处均有最大吸
收。以 510 nm处测得的吸收度 A对浓度 C回归 ,得回归方
程:A=11.225C+0.002 7, r=0.999 1, 在 8 ～ 40μg· mL-1的
范围内 , 浓度与吸收度有良好的线性关系。
2.2.2　黄酮含量测定　分别将测总黄酮之各样品液定量稀
释 5倍后 , 再精密吸取各稀释液适量于 10 mL量瓶中 , 照标
准曲线制备项下方法操作 , 测定吸收度 , 由回归方程求出稀
释液中总黄酮浓度 , 然后计算百分含量 , 结果见表 1。
表 1　金钱草中总黄酮和多糖含量
Fig1　ThecontentoftotalflavonoidsandpolysaccharidesinLy-
simachiaChristinacHance
测定
次数
总黄酮
含量 /% x±s RSD/%
多糖
含量 /% x±s RSD/%
1 1.40 8.56
2 1.34 1.36±0.023 2.38 8.39 8.46±0.091 1.07
3 1.35 8.42
2.2.3　回收率试验　取已知总黄酮含量的供试品溶液 1.0
mL于 10 mL量瓶中 ,再加入 0.2 mg· mL-1的芦丁对照品溶
液 0.5 mL, 依法测定 , 结果平均回收率为 100.4%, RSD=
1.56%(n=5)。
2.2.4 　稳定性试验 按样品测定方法操作 , 测定同一供
试液在不同时间吸收度。结果表明 , 吸收度值在 5 ～ 45 min
内基本不变 , 因此测定应控制在 40 min内完成。
2.3 多糖含量测定
2.3.1 标准曲线制备 精密量取 100.0 μg· mL-1标准葡
萄糖溶液 0.1、0.2、 0.3、0.4、0.5、0.6、 0.7 mL置于干燥试管
中 , 分别加水使成 1.0 mL, 再分别加入 5%苯酚溶液 1.6mL,
摇匀 , 然后加浓硫酸 7.0mL, 充分摇匀 ,室温放置 25 min, 在
490nm处测定其最大吸收度 , 同时做一空白。结果浓度在
10.05～ 75.56 μg· mL-1范围内呈线形关系 , 实验数据做回
归处理得回归方程:A=0.069 1C+0.003, r=0.999 0。
2.3.2 换算因素测定 金钱草粉碎后 ,称取 100g,置于 500
mL烧瓶中 ,将此烧瓶放入 MCL-3型连续微波反应器中 ,依
次用 250 mL石油醚(60 ～ 90 ℃)、乙醚和 80%乙醇回流提取
两次 , 调整功率 560, 500, 400, 350 W,反应时间 20 min。减压
抽滤 , 残渣挥干溶剂后 ,再放入 MCL-3型连续微波反应器
中 , 调整功率 630, 600, 560, 450 W,继续以水回流提取两次 ,
每次 20min。减压过滤 ,合并滤液。将滤液减压浓缩至一半
体积 , 加入适量活性炭 , 脱色两次 , 过滤 , 滤液加 5倍量 95%
乙醇 , 放置过夜 ,抽滤后的沉淀以 100 mL水溶解重复醇沉一
次。过滤 , 残渣用乙醚 、无水乙醇反复洗涤 , 60 ℃干燥 , 即得
金钱草多糖。精确称取 60 ℃干燥恒重的金钱草多糖 20.00
mg,水溶解后定容到 100 mL量瓶中 , 摇匀 ,做为多糖储备液。
精确量取多糖储备液 0.2 mL, 加水至 1mL,按测定标准曲线
同样的方法测其吸收度 。按下式计算换算因素:f=W· C-1
· D-1式中:W为多糖重量(μg), C为多糖液中葡萄糖的浓
度(μg· mL-1), D为多糖的稀释因素。测得 f=0.914。
2.3.3 多糖含量测定 精确吸取样品液 1mL,按标准曲线
制备项下方法测定其吸收度值 , 按下式计算多糖含量 , 多糖
含量 =C· D· f· W-1 ×100(C为样品溶液的葡萄糖的质
量 , D为样品溶液的稀释倍数 , f为换算因素), 结果见表 1。
2.3.4 回收率测定 精密称取金钱草适量 ,加入精制金钱
草多糖适量 , 按样品液制备和多糖含量测定方法操作 , 测得
多糖平均回收率为 101.6%, RSD=1.23%(n=5)。
2.3.5 稳定性试验 用硫酸-苯酚法测定同一样品液在不
同时间的吸收度 ,吸收度值在 48 h内基本不变。
3 讨论
　　黄酮类化合物具有降脂、抗血栓 、抗氧化 、降糖等多种生
理活性 [ 6] 。多糖广泛存在于自然界 , 是多种中草药的有效成
分之一 ,具有多种生物活性 ,是理想的免疫增强剂。它能提高
机体免疫系统的功能 , 而对正常细胞没有毒副作用 , 在抗肿
瘤 、抗病毒 、抗衰老等药物研究中 , 多糖类药物的研制已成为
当今世界新药的发展方向之一 [ 7] 。我们运用微波技术从金钱
草中提取出金钱草总黄酮和多糖 , 并对其含量(总黄酮为
1.36%,多糖为 8.46%)进行了测定 ,反应时间缩短 ,金钱草黄
酮和多糖的结构组成和生理活性有待进一步研究和探讨。
参考文献
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广东科技出版社;化学工业出版社 , 1995, 646.
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收稿日期:2007-02-09
·622· ChinJMAP, 2008July, Vol.25 No.7　　　　　　　　　　　　　　　中国现代应用药学杂志 2008年 7月第 25卷第 7期