全 文 ：兵团博士基金( 2001 年度) 03 项目
新疆党参总黄酮与多糖的微波提取及其含量分析
李 艳1 孙 萍1 刘 霞2 谢建新2
( 1.石河子大学师范学院, 832003,新疆石河子; 2. 石河子大学医学院, 832002, 新疆石河子
/ /第一作者女, 1967 年生,副教授)
摘 要: 目的:从新疆党参中提取总黄酮、多糖, 并测定其含量。方法: 运用微波技术提取新疆党参总黄
酮、多糖, 用比色法测定总黄酮、多糖含量。结果: 测得新疆党参中总黄酮含量 0. 192% , 平均回收率为
99. 63% , RSD= 1. 37% ( n= 6) ;多糖含量 51. 791% , 平均回收率为 97. 96% , RSD= 1. 44% ( n= 3)。结论:首
次运用微波技术从新疆党参中提取总黄酮、多糖, 反应速度加快,收率提高。
关 键 词: 微波技术; 新疆党参; 总黄酮; 多糖; 含量测定
中图分类号: R931. 4 文献标识码: A 文章编号: 1009 - 5276( 2004) 07 - 1222 - 02
新疆党参 Codonop sis clematidea ( schrenk ) Clar ke 为
桔梗科党参属多年生草本植物, 药用根,其性甘、平,补脾
胃, 益气血,生津止渴, 是重要的传统补益中药,民间用于
治疗功能性子宫出血、体虚无力、胃下垂、风湿性心脏病
等112。据报道, 新疆党参含 12 种生命必需微量元素; 含
37种挥发油122,含糖类、皂甙、生物碱等112。新疆党参在
全疆均有分布, 且储量丰富,为了进一步开发利用这一资
源, 我们运用微波技术从新疆党参中提取总黄酮132、多
糖142并测定其含量15、62, 为正确评价新疆党参的药材质
量提供依据。
1 仪器 试剂及样品
UV - 2401 型分光光度计(日本岛津) ; MCL - 3 型
连续微波反应器(四川大学无线电系) ; R - 201 旋转蒸发
器(上海申胜生物技术有限公司) ; 索氏提取器。
对照品芦丁购自中国药品生物制品检定所。其余试
剂均为分析纯。
新疆党参: 采自新疆天山,经石河子大学药学院生药
教研室成玉怀副教授鉴定为新疆党参 Codonops is
clematidea ( schr enk ) Clar ke 。秋季挖取, 洗净, 阴干, 粉
碎后过 65 目筛,细粉于烘箱中 60bC 干燥 4h 待用。
2 新疆党参中总黄酮 多糖含量测定
样品溶液制备 取党参样粉约 2g , 精密称定, 置索
氏提取器中, 用石油醚 ( 60~ 90 e ) 水浴回流脱脂 2 次
(每次 2 h)。残渣挥干溶剂后, 置 100ml烧瓶中, 将此烧
瓶放入 MCL - 3 型连续微波反应器中,用 85%乙醇回流
提取, 调整功率 400W ,反应时间 20min。减压抽滤,另用
少量 85% 乙醇多次洗涤残渣, 并入提取液, 并转入 100
ml容量瓶中,用 85%乙醇定容, 摇匀,即得测总黄酮的新
疆党参样品液。
将提尽黄酮后的党参残渣置 100ml烧瓶中, 放入
MCL - 3 型连续微波反应器, 用 80% 乙醇回流提取
20min,调整功率 400W, 以除去单糖及一些甙类。党参
残渣挥干乙醇后, 再放入 MCL - 3 型连续微波反应器
中, 继续以水回流提取 3 次 (每次 20min) , 调整功率
560W。合并提取液, 减压浓缩后, 用蒸馏水定容至 250
ml, 即为测多糖的新疆党参样品液。
总黄酮含量测定 标准曲线的制定: 精密称取120bC
干燥恒重的芦丁标准品 10mg, 加 85%乙醇溶解, 定容至
50ml容量瓶中, 摇匀,制成浓度为 0. 2mg /ml的标准品溶
液。分别取标准品溶液 0. 0, 0. 2, 0. 5, 1. 0, 2. 0, 3. 0, 4. 0
ml于 10ml容量瓶中, 加 5%亚硝酸钠 0. 4ml, 放置 6min
后,加 10%硝酸铝 0. 4ml, 放置 6min, 再加 4%的氢氧化
钠 4ml,加水至刻度, 摇匀,放置 15min, 进行全波长扫描,
在 510nm 处均有最大吸收。以测定结果计算得直线方
程C= 79. 23A - 0. 459, r= 0. 9981。在40~ 800Lg /ml的
范围内,浓度与吸收度有良好的线性关系。
样品含量测定:精密吸取供试品溶液 1. 0ml, 置 10ml
容量瓶中,按标准曲线的制定项下相同的方法显色测定。
通过标准曲线, 计算出样品总黄酮的含量为 0. 192% ( n
= 3)。
回收率试验:取已知总黄酮含量的供试品溶液0. 5ml
于 10ml容量瓶中, 再加入 0. 2mg /ml的标准品溶液0. 5
ml,依法测定, 结果平均回收率为 99. 63% , RSD= 1. 37%
( n= 6)。
稳定性试验:按样品测定方法操作,测定同一供试液
在不同时间吸收度。结果表明,吸收度值在 5~ 45min 内
基本不变。因此测定应控制在 45min 内完成。
多糖含量测定 标准曲线制定: 精确称取干燥恒重
的葡萄糖 25. 2mg, 加适量水溶解, 转移至 250ml 容量瓶
中,加水至刻度, 摇匀,配成浓度为 100. 8Lg /ml标准葡萄
糖溶液。精确量取葡萄糖标准溶液 0. 1, 0. 2, 0. 3, 0. 4,
0. 5, 0. 6, 0. 7ml置干燥试管中, 分别加水使成 1. 0ml, 再
分别加入 5% 苯酚溶液 1. 6ml, 摇匀, 然后加浓 H2SO4
7. 0ml, 充分摇匀,室温放置 25min,同时做一空白。进行
全波长扫描,在 490nm 处均有最大吸收。以测定结果绘
制标准曲线,回归方程: A= 0. 05654C+ 5. 47 @ 10 -4 , r=
0. 9998。在 10~ 70Lg /ml的范围内, 浓度与吸收度有良
好的线性关系。
换算因素测定: 精确称取 60 e 干燥恒重的党参多糖
(自制) 20mg,水溶解后定容到 100ml容量瓶中, 摇匀,做为
多糖储备液。精确量取多糖储备液 0. 2ml,加水至 1ml,按测
定标准曲线同样的方法测其吸光度值。 (下转第 1225页)
第 22卷 第 7期
2 0 0 4 年 7 月
中 医 药 学 刊
CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol. 22 No. 7
Jul . 2 0 0 4
中医药
1222
学刊
DOI：10.13193/j.archtcm.2004.07.67.liy.036
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1288
Effect of Naoluoxintong on apoptosis and eNOS、iNOS in cerebral
ischemic reperfusive injury model rats
Abstract: Obj ective: To investigate the effects of Naoluoxintong on apoptosis and endothelial nitric o xide synthase ( eNOS)
、inducible nitric oxide synthase( iNOS) , in local cerebral ischemic reperfusive model rats of Qi deficiency and Blood stasis.
Methods: Qi deficiency and blood stasis model is made by means of combined facto rs of hunger, tiredness and high fat diet.
The middle cerebral arteries ( MCA ) of rats were occluded for 2 hours and reperfused fo r 1, 3 day s. Apoptosis was detected by
teminal deoxynucleo tidyl transferase - mediated dUTP nick end - labeling( TUNEL ) . eNOS and iNOS expression was de-
tected by immunohistochemistry method. Results : In the Naoluoxintong groups, the apoptotic cells were significantly de-
creased ( P < 0. 01) , eNOS protein expression w as significantly increased. ( P < 0. 01) , iNOS protein expression w as signifi-
cantly decreased. Conclusion: Nao luoxintong can prevent apoptosis in local cerebral ischemic reperfusive model rats due to the
enhanced expression of eNOS and decreased expression o f iNOS.
Key words: Naoluoxintong; cerebral ischemia reperfusion; apoptosis; nitric oxide synthase
(上接第 1222 页) 按下式计算换算因素: f= W /CD。式
中: W为多糖重量(Lg ) , C 为多糖液中葡萄糖的浓度(Lg /
ml) , D为多糖的稀释倍数。测得 f= 1. 84。
样品含量测定: 精密吸取新疆党参样品液 1ml,定量
稀释 10倍后, 再精密吸取稀释液 1ml, 按测定标准曲线
同样方法测其吸光度值 , 按下式计算多糖含量: 多糖含
量%= CDf /W @ 100。计算多糖含量为 51. 791% ( n =
3)。
稳定性试验: 用硫酸 - 苯酚法测定同一样品液在不
同时间吸收度, 吸收度值至少在 48 h 内不变。
回收率测定: 精密称取党参样粉适量,加入精制党参
多糖适量, 按样品液制备和多糖含量测定方法操作,测得
多糖平均回收率为 98. 81% , RSD= 1. 17% ( n= 6)。
表 1 新疆党参中总黄酮与多糖含量( % )
测定次数
多 糖 总黄酮
含量% ŠX ? S RSD% 含量% ŠX ? S RSD%
1 51. 827
2 51. 755
3 51. 791
51. 791 ? 0. 008 0. 07
0. 188
0. 197
0. 192
0. 192 ? 0. 045 2. 36
3 讨 论
微波技术应用于植物细胞破壁,大大地加快了反应
速度,有效地提高了收率。我们首次运用微波技术从新
疆党参中提取出黄酮和多糖,并对其含量进行了测定,反
应时间缩短了 12 倍, 多糖含量由传统方法172的 50. 01%
提高到 51. 791%。黄酮含量为 0. 192% 。新疆党参多糖
和黄酮的结构组成和生理活性有待进一步研究。
参考文献
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Microwave Technique Extraction and Content Determination of chromocor
and polysaccharide in Codonopsis clematidea ( schrenk) Clarke
Abstract: Objective: The ex traction and content determination of chromocor and polysaccharide in Codonop sis clematidea
( schrenk ) Clarke Methods: M icrowave Technique Applied in chromocor and poly saccharide of Codonops is clematidea
( schrenk) Clarke were obtained, content determination with colorime try。Results: The chromoco r content of Codonopsis
clematidea ( schrenk) Clarke is 0. 192% , recovery rate is 99. 63% , The poly saccharide content of Codonop sis clematidea
( schrenk) Clarke is 51. 791% , recovery rate is 97. 96% . Conclusion: M icrow ave Technique Applied in The chromocor and
polysaccharide of Codonopsis clematidea ( schrenk) Clarke has been obtained for the first time.
Key w ords: M icrowave Technique; Codonopsis clematidea ( schrenk) Clarke; chromocor; polysaccharide; content de-
termination
第 7 期 李 净等:脑络欣通对脑缺血模型鼠神经细胞凋亡及 eNOS、iNOS 蛋白表达的影响
中医药
1225
学刊