全 文 ：鸡树条荚蒾叶绿原酸的最佳提取工艺研究
孟鑫，胥莉莉，王磊，邹海曼，李彦冰
(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)
摘 要:目的:确定鸡树条荚蒾叶中绿原酸的最佳提取工艺。方法:采用不同方法和条件提取鸡树条荚
蒾树叶中的绿原酸，利用高效液相色谱法对提取到的绿原酸含量进行测定分析。结果:由测得的数据显
示，鸡树条荚蒾叶中绿原酸最佳提取工艺为 A2B2C2。结论:提取鸡树条荚蒾树叶中绿原酸的最佳条件
是:加入 10 倍量的 50%乙醇回流 2 次，每次回流 1h。
关键词:鸡树条荚蒾;提取工艺;绿原酸;含量测定
中图分类号:R28 文献标识码:A 文章编号:1002 － 2406(2012)03 － 0057 － 02
基金项目:黑龙江省中医药管理局项目(ZH04Z11)
作者简介:孟鑫(1982 －) ，男，助教，硕士，主要从事中药新药研究工作。
通讯作者:李彦冰(1955 －) ，男，教授，硕士研究生导师，主要从事中药
新药研究工作。
收稿日期:2011 － 10 － 25
修回日期:2011 － 11 － 20
鸡树条荚蒾(Vibumum sargentii Koehne)为忍冬科
(Caprifoliaceae)荚蒾属(Viburnum)植物，又名天目琼
花［1］、鸡树条，为落叶灌木，主要分布于我国北方多个
省份［2］。鸡树条荚蒾的叶、嫩枝、果实均可入药。叶
外用主治疮疖、疥癣、皮肤瘙痒［3］;嫩枝主治风湿性关
节炎、腰酸腿痛、跌打损伤;果实有止咳的功用，主治
急、慢性气管炎、咳嗽［4］。鸡树条荚蒾味甘、苦、平，入
肺、肝、脾、肾四经，具有通经活络、祛风除湿、健脾消
食、消肿、驱虫、镇咳祛痰等作用［5］，其天然资源极为
丰富，且蕴含量大［6］。目前，鸡树条荚蒾常作园林用
途，在民间作“鸡树条”药用。有关资料报道鸡树条的
枝叶具有收缩子宫，增强子宫的紧张度，有治疗子宫出
血的作用［7］。为了开发利用鸡树条荚蒾这一潜在的
民间药用植物资源，本文研究了鸡树条荚蒾叶中绿原
酸的最佳提取工艺，为鸡树条荚蒾叶的化学成分资源
开发提供科学依据。
1 实验
1． 1 实验材料
鸡树条荚蒾叶子(于 2010 年采自黑龙江省尚志市
帽儿山镇，经黑龙江中医药大学药学院李彦冰教授鉴
定为鸡树条荚蒾 Vibumum sargentii Koehne 的叶子) ;
绿原酸 (753 － 8701，中国药品生物制品检定所) ;
SK250LH超声波清洗器(上海树立仪器仪表有限公
司) ;E2120813 色谱柱(大连依利特公司) ;AL204 电子
天平(梅特勒 －托利多仪器有限公司)。
1． 2 绿原酸含量测定
1． 2． 1 色谱条件 Hypersil C18色谱柱(填料粒径为
5um) ，流动相为甲醇 －水 0. 4%磷酸缓冲液体积比为
22. 78，流速为 0. 8ml /min，柱温 30℃，检测波长为
327nm，进样量为 10ul。
1． 2． 2 绿原酸对照品溶液的制备 精确称取绿原酸
标准品 20mg，加入 50ml的容量瓶中，用 50%的甲醇溶
液超声溶解并定容至刻度，摇匀得 40ug /ml 的标准品
溶液。其 HPLC结果如图 1。
图 1 绿原酸标准品 HPLC谱图
1． 2． 3 绿原酸标准曲线的绘制 设置进样量分别为
2，10，15，20，25，35，50ul。高效液相色谱仪自动进样，
记录色谱图及峰面积值。以峰面积—进样浓度做回归
分析，做得标准曲线见图 2。
1． 2． 4 精密度试验 取同一份供试品溶液，重复进样
5 次，测得绿原酸峰面积为 5. 541 9，5. 504 5，5. 577 2，
5. 574 6，5. 724 5，计算 RSD(%)为 0. 50(n = 5) ，系统
精确性良好。
1． 2． 5 重复性试验 准确称取 5. 0g鸡树条荚蒾树叶
5 份，分别加入 10 倍量的 50%乙醇溶液，加热回流 2
次，每次 1h，提取液定容至 250ml，用微孔滤膜过滤，用
高效液相色谱法进行绿原酸含量测定，得到峰面积分
·75·
2012 年第 29 卷第 3 期
Vol. 29，No. 3，2012
中 医 药 信 息
Information on Traditional Chinese Medicine

图 2 绿原酸标准曲线
别 为:36. 439 3，36. 012 4，36. 244 2，35. 923 4，
35. 879 6，计算 RSD(%)为 0. 62。检测样品重复
性好。
1． 2． 6 稳定性试验 取同一份供试品溶液分别在制
备 0，1，2，4，6，8 h。测定峰面积为:23. 535 3，23. 016
4，23. 297 0，22. 840 8，23. 396 5，23. 104 8，计算 RSD
(%)为 1. 43%。表明溶液在 8h内相对稳定。
1． 2． 7 回收率试验 取已知含量的供试品溶液，精确
量取 1mL，共 5 份，分别置 10mL 量瓶中，各分别取绿
原酸对照品 3mL，精密称定加入，加甲醇至刻度，摇匀，
过滤后测定绿原酸含量，计算加样回收率(%)为
99. 31，98. 79，98. 68，98. 73，98. 13，RSD(%)为 0. 71，
符合要求。
1． 3 鸡树条荚蒾树叶中绿原酸的提取
采摘鸡树条荚蒾树叶，晾干，粉碎(20 目) ，备用。
1． 3． 1 提取方法的确定 准确称取鸡树条荚蒾树叶
5. 0g，分别使用水超声，水回流，50%乙醇超声，50%乙
醇回流的方法，加入 10 倍量的溶剂，提取 2 次，每次
1h。将提取液定容至 250ml，使用微孔滤膜过滤后使
用高效液相色谱方法测其中绿原酸的含量。其结果见
表 1。
表 1 四种提取方式得到绿原酸的峰面积
提取方法 水超声 水回流 乙醇超声 乙醇回流
峰面积 3． 518 9 8． 557 2 10． 562 2 36． 439 3
1． 3． 2 提取用乙醇的确定 准确称取 5． 0g 鸡树条荚
蒾树叶，分别使用 30%、40%、50%、60%、70%的乙醇
10 倍量回流提取 2 次，每次 1 h。将提取液定容至
250ml，用微孔滤膜过滤，使用高效液相色谱仪进行绿
原酸含量测定，得结果见表 2。
表 2 不同浓度的乙醇回流得到绿原酸的峰面积
乙醇浓度(%) 30 40 50 60 70
峰面积 25． 582 2 33． 309 9 36． 439 3 26． 846 1 28． 505 7
1． 4 绿原酸提取工艺优化 采用正交试验优化绿原
酸提取工艺。准确称取鸡树条荚蒾树叶 5. 0g，置于
500ml圆底烧瓶中，分别按 L9(3
4)正交试验设计(表
3)进行回流提取。合并提取液，定容至 250ml容量瓶，
摇匀，采用高效液相色谱法测定绿原酸含量。
表 3 试验因素水平表
水平
乙醇浓度 A
(%)
加溶剂量 B
(倍)
回流时间 C
(小时)
回流次数 D
(次)
1 45 8 0． 5 2
2 50 10 1 2
3 55 12 1． 5 2
2 结果与分析
2． 1 鸡树条荚蒾树叶中绿原酸以水超声法提取时绿
原酸含量为 0. 593 2mg，提取率为 0. 012%;以水回流
法提取时绿原酸含量为 5. 068 5mg，提取率为
0. 101%;以醇超声法提取时绿原酸含量为6. 849 4mg，
提取率为 0. 137%;以醇回流提取时绿原酸含量为
29. 835 0mg，提取率为 0. 597%。由此可见，乙醇回流
为佳。
2． 2 鸡树条荚蒾叶中绿原酸提取正交试验结果见表
4、表 5、表 6。由表 6 分析可知，A、B、C 三因素均对实
验结果有显著性影响，即加醇量、乙醇浓度、提取时间
均能明显的影响荚蒾叶中绿原酸的提取。从表 5 直观
分析，各因素水平的优劣顺序分别是:A2 ＞ A3 ＞ A1，
B2 ＞ B1 ＞ B3，C2 ＞ C3 ＞ C1。从而得出最佳提取工艺
为 A2B2C2，即提取次数 2 次、加 50%乙醇、加醇量为
10 倍、提取时间为 1h。
表 4 正交试验表及结果
试验号 A B C D 绿原酸含量(mg) 提取率(%)
1 1 1 1 1 15． 864 7 0． 317
2 1 2 2 2 20． 584 2 0． 412
3 1 3 3 3 15． 776 5 0． 316
4 2 1 2 3 25． 468 4 0． 509
5 2 2 3 1 29． 835 0 0． 597
6 2 3 1 2 22． 803 6 0． 456
7 3 1 3 2 25． 219 2 0． 504
8 3 2 1 1 16． 266 6 0． 325
9 3 3 2 3 18． 372 9 0． 367
表 5 正交试验结果分析
Mean Std． Error
95% Confidence Interval
Lower Bound Upper Bound
A乙醇浓度
1 17． 605 ． 219 17． 173 18． 038
2 25． 990 ． 181 25． 633 26． 346
3 20． 471 ． 208 20． 060 20． 881
B加入溶剂量
1 22． 404 ． 197 22． 015 22． 793
2 22． 426 ． 199 22． 034 22． 818
3 19． 236 ． 212 18． 818 19． 654
C回流时间
1 18． 563 ． 216 18． 137 18． 990
2 24． 129 ． 192 23． 750 24． 507
3 21． 374 ． 200 20． 980 21． 768
·85·
中 医 药 信 息
Information on Traditional Chinese Medicine
2012 年第 29 卷第 3 期
Vol. 29，No. 3，2012

表 6 主体间效应的检验
源 Ⅲ型平方和 df 均方 F Sig
校正模型 4 083． 053a 6 680． 509 269． 641 ． 000
截距 83 667． 685 1 83 667． 685 33 151． 995 ． 000
A 2 396． 731 2 1 198． 366 474． 833 ． 000
B 391． 673 2 195． 837 77． 597 ． 000
C 935． 033 2 467． 517 185． 246 ． 000
误差 464． 372 184 2． 524
总计 99 429． 366 191
校正的总计 4 547． 425 190
2． 3 HPLC检测方法由线性关系考察得回归方程
Y = 28. 145X + 2. 581 1，R2 = 0. 999 6。绿原酸在
0. 08 ～ 2. 00ug范围内线性关系良好，精密度、重现性、
稳定性、加样回收率试验 RSD 值分别为 0. 50%、
0. 62%、1. 43%、0. 71%。所以 HPLC 检测方法适用于
绿原酸的含量测定，且具有精确、高效、专一等特点。
绿原酸对照品和鸡树条荚蒾叶样品中绿原酸 HPLC 图
谱见图 1、图 2。
图 3 鸡树条荚蒾叶中绿原酸 HPLC图谱
3 结论
由表 1 可知，水超声法提取到的绿原酸含量非常
少，水回流法与乙醇超声法提取到的绿原酸含量接近，
乙醇回流法提取到的绿原酸最多。这可能是由于绿原
酸结构中含有多个羟基基团连接在苯环上，在乙醇溶
液中溶解度较大，所以用乙醇作为提取溶剂更好。
由表 5 中的分析结果得知，回流时间长反而使提
取到的绿原酸含量下降，这可能是因为绿原酸由奎尼
酸和咖啡酸缩合而成，为极性有机酸，不太稳定［8 － 10］。
且绿原酸的邻二酚羟基结构不稳定，高温加热易氧化
分解，因此，高温及长时间加热可利于绿原酸提取［11］。
目前有关鸡树条荚蒾叶中绿原酸提取的研究资料
鲜见报道，本实验为鸡树条荚蒾的开发利用提供了科
学依据。
参考文献:
［1］ 冉先德．中华药海下卷［M］．哈尔滨:哈尔滨出版社，1998:946．
［2］ 祝之友．荚莲属植物资源调查及开发利用［J］．基层杂志，1999，13
(1) :24．
［3］ 《全国中草药汇编》编写组． 全国中草药汇编［M］． 北京:人民卫
生出版社，1994:428 － 429．
［4］ 中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志(第 72 卷) ［M］．
北京:科学技术出版社，1988．
［5］ 江苏新医学院． 中药大辞典［M］． 上海:上海科学技术出版社，
1977．
［6］ 祝之友．荚莲的临床应用与本草学研究［J］．时珍国药研究，1997，
8(1) :4．
［7］ 朱有昌．东北药用植物［M］． 哈尔滨:黑龙江科技出版社，1989:
1064．
［8］ Nichiforescu． Distribution of o － dihudroxyphenots of the type in arti-
choke leaces and their variation as a function of temperature［J］． Ann
pharm F． 1996，24(2) :127．
［9］ 张丹． HPLC测定盘银花、茜陈及其 10 种中成药中绿原酸的含量
［J］．药物分析杂志，1996，16(2) :83．
［10］ 郭磊，刘君． 双黄连口服液中绿原酸含量测定方法的改进研究
［J］．中医药学报，2010，38(2) :115 － 117．
［11］ 戚向阳．杜仲叶中绿原酸的提取分离研究［J］． 中草药，1998，29
(111) :741 － 742．
HPLC法测定痛可舒水丸中丹参酮ⅡA含量
陈惠铮，王秀霞
(黑龙江中医药大学附属第一医院，黑龙江 哈尔滨 150040)
摘 要:建立痛可舒水丸中丹参酮ⅡA 含量测定方法。采用高效液相色谱法，色谱柱:依利特 C18
(150mm ×4. 6mm，5μm) ;流动相:甲醇 －水(80∶ 20) ;检测波长:270nm;柱温:室温;流速:1. 0ml /min。
结果:丹参酮ⅡA在 0. 02 ～ 0. 16μg范围内呈良好线性关系(r = 0. 999 9，n = 5) ，平均回收率为 98. 25%，
RSD =1. 53%。结论:本方法操作简便、灵敏度高、准确性和重现性好，可作为痛可舒水丸中丹参酮Ⅱ －
A质量控制方法。
关键词:痛可舒水丸;高效液相色谱;丹参酮ⅡA;含量测定
中图分类号:R28 文献标识码:A 文章编号:1002 － 2406(2012)03 － 0059 － 02
作者简介:陈惠铮(1971 －)，女，副主任药师，主要研究方向:中药制剂检验。
通讯作者:王秀霞(1939 －) ，女，主任医师，教授，博士研究生导师，主要
方向:中医妇科。
收稿日期:2011 － 11 － 03
修回日期:2011 － 12 － 10
痛可舒水丸为黑龙江中医药大学附属第一医院制
剂室生产，由丹参、延胡索等 7 味中药组成，是用于治
疗子宫内膜异位症(EM)的纯中药制剂。痛可舒拟方
人王秀霞教授认为，EM 的根本病机为“瘀血阻滞，或
兼有寒凝气滞”，并提出“活血化瘀、温经理气”的治疗
大法。痛可舒水丸的处方即是王老根据“活血化瘀”
为主的“琥珀散”这一经典方加减而成的。临床应用
已 10 余年，取得了很好疗效。为了控制制剂的质量，
本实验选择该制剂中君药丹参的主要有效成分丹参酮
ⅡA作为指标性成分，参照 2010 版《中华人民共和国
药典》中丹参含量测定项下方法，进行含量测定及方
·95·
2012 年第 29 卷第 3 期
Vol. 29，No. 3，2012
中 医 药 信 息
Information on Traditional Chinese Medicine
