全 文 ：高效液相色谱法测定一点红中槲皮素的含量
孟繁浩 , 陈秋晨 , 王　琳 , 刘　振 , 孙也之
(中国医科大学 药学院 , 辽宁 沈阳 110001)
　　摘　要:目的 建立高效液相色谱法测定一点红中槲皮素含量的方法。方法 用Hypersil BDS C18色谱柱(4.6 mm
×200 mm , 5 μm),流动相为甲醇-水-磷酸(55∶45∶0.4),检测波长为 370 nm。结果 槲皮素在 0.041 6～ 0.416 μg 的范
围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 8),平均加样回收率为102.3%, RSD 为1.18%(n =6)。结论 此法用于测
定一点红中槲皮素的含量快速 、简便 、准确 ,为评价一点红的内在质量提供了科学依据。
　　关键词:一点红;槲皮素;含量测定;高效液相色谱法
　　中图分类号:R927.2　　文献标识码:A　　文章编号:1005-1678(2007)06-0414-02
Determination of quercetin in Herba Emiliae by HPLC
MENG Fan-hao , CHEN Qiu-chen , WANG Lin , LIU Zhen , SUN Ye-zhi
(School of Pharmacy , China Medical University , Shenyang 110001 , China)
　　Abstract:Purpose The HPLC method was established for the determination of quercetin in Herba Emili-
ae.Methods The detection was performed on a Hypersil BDS C18 column(4.6 mm×200 mm ,5 μm)at the
UV wavelength of 370 nm.The mobile phase consisting of 0.4% phosphoric acid-methanol (55∶45)was
pumped at a flow rate of 1 mL/min.Results The calibration curve was linear in the range of 0.041 6-0.416
μg of quercetin(r=0.999 8).The average recovery was 102.3%,with RSD of 1.18%(n =6).Conclusion
The HPLC method is simple , rapid and accurate for the determination of quercetin in Herba Emiliae which can
be used for the quality control of Herba Emiliae.
Key words:Herba Emiliae;quercetin;determination;HPLC
收稿日期:2007-04-06;修回日期:2007-06-15
作者简介:孟繁浩(1965-),男 ,博士 , 教授 ,博导 ,主要从事药物
研究与开发工作 , E-mail:fhmeng@cmu.edu.cn。
　　一点红(Herba Emiliae)又名为叶下红 、羊蹄草 、
红背叶 、红叶草 、红花草 、红背果 、石青红等 ,为菊科
植物一点红(Emilia sonchifolia(L.)DC.)的全草 ,性
凉 ,味微苦 。具有清热解毒 ,消炎 ,利尿等功效 ,临床
上常用于上呼吸道感染 、口腔溃疡 、肺炎 、泌尿道感
染 、乳腺炎 、结膜炎 、疖肿疮疡 、皮肤湿疹等疾病的治
疗[ 1-2] 。一点红药材中主要含有黄酮类 、生物碱 、三
萜类 、酚类等化学成分 ,其中槲皮素等黄酮类化合物
具备广泛的药理活性 ,因此 ,可通过测定一点红中槲
皮素的含量判定一点红药材的质量[ 3] 。一点红中有
效成分的定量方法未见文献报道 ,本文采用高效液
相色谱法(HPLC)测定了一点红中槲皮素的含量 ,为
一点红药材的质量控制提供参考依据。
1　材　料
P230高效液相色谱仪(包括 DAD230二极管阵
列检测器 , Echrom2000 色谱工作站)、Hypersil BDS
C18色谱柱(4.6 mm×200 mm ,5 μm),大连依利特分
析仪器有限公司;高速万能粉碎机 ,天津市泰斯特仪
器有限公司 。
一点红(批号 2006001 、2006002 、2006003),市售 ,
经本校药用植物教研室陈再兴老师鉴定均为一点红
Herba Emiliae;槲皮素对照品(批号 100081-200406),
中国药品生物制品检定所。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱为 Hypersil BDS C18色谱柱(4.6 mm×200
mm ,5 μm),流动相为甲醇-水-磷酸(55∶45∶0.4);检
测波长为370 nm ,流速 1 mL/min ,柱温 25℃,进样量
20μL。
2.2　对照品溶液的制备
精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素对照
品 10.4 mg ,加甲醇定容至 100 mL ,作为对照品储备
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液。取储备液 1 mL ,加甲醇稀释至 10 mL ,得到 10.4
μg/mL的对照品溶液 。
2.3　供试品溶液的制备
取一点红药材粗粉 1.0 g ,精密称定 ,置圆底烧
瓶中 ,加入 50%甲醇 20 mL 和盐酸 1 mL ,密塞 , 称
重 ,加热回流 2 h ,放冷 ,用 50%甲醇补足减失的重
量 ,摇匀 ,滤过 ,精密量取续滤液5 mL ,置10 mL量瓶
中 ,加 50%甲醇至刻度 , 摇匀 , 用微孔滤膜 (0.45
μm)滤过 。取续滤液作为供试品溶液 。
2.4　系统适用性实验
分别取对照品溶液 、供试品溶液各 20 μL 注入
液相色谱仪 , 结果见图 1。槲皮素峰理论板数为
15 000 ,供试品溶液色谱图中槲皮素峰与相邻杂质
峰的分离度大于 1.5 。
图 1　一点红中槲皮素含量测定 HPLC图
Fig 1　HPLC chromatograms of quercetin in Herba Emiliae
2.5　线性关系
分别精密吸取对照品储备液 0.2 ,0.4 ,0.8 , 1.0 ,
1.2 ,1.6 ,2.0 mL ,置 10 mL量瓶中 ,加 50%甲醇至刻
度 ,摇匀。分别精密吸取 20μL ,注入液相色谱仪 ,记
录色谱图。以槲皮素峰面积为纵坐标(Y),进样量
为横坐标(X), 绘制标准曲线 , 得回归方程:Y =
40 711 X -970.7 , r =0.999 8。结果表明槲皮素在
0.041 6 ～ 0.416 μg范围内与峰面积成良好线性关系。
2.6　稳定性和精密度
取供试品溶液于 0 ,2 , 4 ,8 ,12 h分别进行测定 ,
结果 RSD 为0.88%(n=5),结果表明本系统稳定性
较好。取对照品溶液连续进样 5次进行测定 ,结果
RSD 为 0.62%(n =5),表明日内精密度良好 。取同
一份对照品溶液于 0 ,1 , 2 , 3 d测定 ,结果测得峰面
积 RSD 为 1.21%(n=4),表明日间精密度良好 。
2.7　重现性试验
取同一批号的一点红 5 份 ,按 2.3项制备供试
品溶液 , 进行测定 ,测得槲皮素的峰面积 RSD 为
1.50%(n =5),表明该方法重现性良好。
2.8　回收率试验
精密称取已知含量的一点红(批号 2006001)5
份 ,分别加入槲皮素对照品适量 ,按 2.3项制备供试
品溶液 ,测定含量 ,结果测得平均回收率为 102.3%;
RSD 为 1.18%。
2.9　药材中槲皮素含量测定
分别取一 点红药材 3 批 (批 号 2006001 、
2006002 、2006003),按 2.3 项制备供试品溶液 ,测定
含量 ,结果测得槲皮素含量分别为:0.417 0 ,0.280 5
和 0.594 2 mg/g 。
3　讨　论
文献报道槲皮素的检测波长为 360 nm[ 4] 、254
nm[ 5] 、368 nm[6]和 371 nm[ 7] ,本文利用 DAD二极管阵
列检测器对槲皮素对照品进行全波长扫描 ,结果最大
吸收峰为370.2 nm ,故选择 370 nm 为检测波长 。
考察了不同比例的甲醇-水作为流动相 ,最后确
定流动相为甲醇-水-磷酸(55∶45∶0.4),柱温 25℃,
流速1 mL/min ,在此条件下槲皮素分离度良好。
本实验以槲皮素为含量测定指标 , 采用 HPLC
测定了一点红中槲皮素的含量 ,方法准确可靠 ,结果
满意 ,为一点红药材的质量控制提供参考依据。
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