全 文 ：[ 基金项目] 河南省科技厅重点科技攻关项目(编号:062306100)　[ 作者简介] 李喜凤 ,女 ,教授 ,电话:0371-65575823 , E-mail:lxf 52@yeah.net
蒲公英药材高效液相色谱特征图谱研究
李喜凤 ,孟璐 ,陈随清　(河南中医学院药学院 , 河南 郑州 450008)
[ 摘要] 　目的:建立蒲公英药材高效液相色谱特征图谱。 方法:采用 HPLC 法 , 流动相为甲醇-0.015%的磷酸水 ,梯度洗脱 ,
流速1.0 mL·min-1 , 检测波长 323 nm。结果:以咖啡酸为参照峰 ,确定 9 个共有峰 , 建立了蒲公英药材 HPLC 特征图谱。结
论:所建立 HPLC 特征图谱具有较好的精密度和重复性 ,适用于蒲公英药材的质量控制。
[ 关键词] 　蒲公英;高效液相色谱法;特征图谱
[中图分类号] R927.2　　[ 文献标识码] A　　[文章编号] 1001-5213(2010)08-0643-03
Study on HPLC fingerprint of Herba Taraxaci
LI Xi-feng ,MENG Lu ,CHEN Sui-qing(Department of Pha rmacy , Henan Univ ersity of T raditional Chinese Medicine ,
Henan Zhengzhou 450008 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To establish the fing erprint o f He rba Taraxaci by H PLC.METHODS　Analy sis wa s perfo rmed by
RP- HPLC , w ith a mixture o f methy l alcoho l and 0.015% pho sphoric acid as mobile phase in g radient mode.Flow rate w as
1.0 mL·min-1 , wave length at 323 nm.RESULTS　Nine co-po ssessing peaks we re selected a s the fing erprint peaks of He rba
Tara xaci w ith caffeic acid as reffer ence , and the finge rprint o f Herba Tara xaci was e stablished by H PLC.CONCLUSION　This
me thod w ith good precision and reproducibility can be applied to the quality contr ol of H erba Tara xaci.
KEY WORDS:Taraxacum mongolicum ;H PLC;fing erprint
　　蒲公英系菊科植物蒲公英(Taraxacum mon-
golicum Hand.-Mazz.)、碱地蒲公英(Taraxacum
sinicum Kitag.)或同属数种植物的干燥全草[ 1] 。中
国药典 2005年版对蒲公英的质量控制仅局限于咖
啡酸单种成分的薄层鉴别及含量测定。目前关于蒲
公英药材 HPLC 特征图谱的研究报道还不多见 ,仅
晏媛等[ 2] 研究了蒲公英醋酸乙酯部位的 HPLC 特
征图谱定性分析 。本实验利用高效液相色谱法对河
南不同药店的 10批次蒲公英药材以及蒲公英对照
药材的甲醇提取液进行了分析和对比研究 ,利用特
征图谱相似度评价软件对其进行相似度评价 ,并以
咖啡酸为参照峰 ,计算各个共有特征峰的相对保留
时间和相对峰面积的 RSD值 ,建立了商品蒲公英药
材的 HPLC 特征图谱 ,为蒲公英药材质量标准的制
定奠定了基础。
1　材料
LC-10AD(日本岛津)高效液相色谱仪 , SPD
-10A 紫外检测器 , CTO -10A 柱温箱 , HW -200
色谱工作站;绿原酸对照品(批号 110753-200413)、
咖啡酸对照品(批号 110885-200102)均由中国药品
生物制品检定所提供;蒲公英对照药材(河南省药品
检验所 ,批号 121195-200401);甲醇为色谱纯;其他
试剂均为分析纯;水为纯化水;蒲公英药材购自河南
省不同药店 ,共 10批 ,经河南中医学院生药学科陈
随清教授鉴定为菊科植物蒲公英(Taraxacum mon-
golicum Hand.Mazz.)的全草 ,样品来源 、编号见
表 1。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 　色谱柱为 AichromBond-AQ 柱
(250 mm×4.6 mm ,5 μm);流动相为甲醇-0.015%
磷酸水 ,梯度洗脱 ,梯度洗脱程序及平衡色谱柱程序
见表 2和表 3 ,流速:1.0 mL·min-1 ;检测波长:323
nm;柱温:35 ℃;进样量:5 μL 。在此条件下 10 批
次蒲公英药材中可检定出 9 个共有峰 ,其中 2号峰
为绿原酸 ,3号峰为咖啡酸 。样品色谱图见图 1 。
2.2　供试品溶液的制备　取蒲公英药材粉末 0.5
g ,精密称定 ,精密加入 10 mL 甲醇 ,精密称定重量 ,
超声 30 min ,放至室温 ,用甲醇补足失重 ,摇匀 ,过
滤 ,取续滤液 ,用0.45 μm 的微孔滤膜滤过 ,得供试
品溶液。
2.3　对照品溶液的制备　精密称取绿原酸对照品
和咖啡酸对照品适量 ,加甲醇溶解 ,分别制成 1 mL
含绿原酸 78 μg 、咖啡酸 66 μg 的溶液 ,作为对照品
溶液 。
2.4　方法学考察
2.4.1　精密度试验　称取蒲公英P4号样品粉末
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表 1　蒲公英(T.mongolicum Hand.-Mazz.)样品来源及编号
Tab 1　The source and number of the sample s o f T .mongolicum Hand.-Mazz
编号 样品来源 性状特征
P1 洛阳康达药房 皱缩卷曲的团块 ,根呈圆锥状 ,长 5 ～ 7 cm ,叶多皱缩 , 绿褐色 ,先端尖 ,边缘浅裂 ,花茎 1 ～ 5条 ,头状花序 ,花
冠黄褐色 ,瘦果。气微 ,味微苦。
P2 东升医药商店 散在单棵 ,根圆锥状 ,长 3 ～ 7 cm ,叶多皱缩 ,暗绿色 ,先端尖 ,边缘浅裂 ,花茎 2 ～ 5条 ,头状花序总苞片多层 ,
花冠黄褐色 ,瘦果。气微,味微苦。
P3 新乡佐今明药
房
皱缩卷曲的团块 ,根圆锥状 ,长 4 ～ 6 cm ,叶多皱缩 ,绿褐色 ,先端尖 ,边缘浅裂 ,花茎 1 ～ 4条 ,头状花序 ,花冠
黄褐色 ,瘦果。气微 ,味微苦。
P4 张仲景大药房 皱缩卷曲的团块 ,根圆锥状 ,长 3 ～ 7 cm ,叶多皱缩 ,绿褐色 ,先端尖 ,边缘浅裂 ,花茎 2 ～ 5条 ,头状花序 ,花冠
暗黄色 ,瘦果。气微 ,味微苦。
P5 本草国药馆 散在单棵 ,根圆锥状,长 2 ～ 7 cm ,叶多皱缩 ,绿褐色 ,先端尖 ,边缘浅裂 ,花茎 1 ～ 3条 ,头状花序 ,花冠黄褐色 ,
瘦果。气微 ,味微苦。
P6 周口药房 皱缩卷曲的团块 ,根圆锥状 ,长 3 ～ 6 cm ,叶多皱缩 ,绿褐色 ,先端尖 ,边缘浅裂 ,花茎 1 ～ 5条 ,头状花序 ,花冠
暗黄色 ,瘦果。气微 ,味微苦。
P7 康丰医药商店 散在单棵 ,根圆锥状,长 3 ～ 6 cm ,叶多皱缩 ,绿褐色 ,先端尖 ,边缘浅裂 ,花茎 1 ～ 6条 ,头状花序 ,花冠黄褐色 ,
瘦果。气微 ,味微苦。
P8 仲景堂大药房 皱缩卷曲的团块 ,根圆锥状 ,长 5 ～ 7 cm ,叶多皱缩 ,绿褐色 ,先端尖 ,边缘浅裂 ,花茎 1 ～ 5条 ,头状花序 ,花冠
黄褐色 ,瘦果。气微 ,味微苦。
P9 复春堂药店 散在单棵 ,根圆锥状,长 2 ～ 6 cm ,叶多皱缩 ,绿褐色 ,先端尖 ,边缘浅裂 ,花茎 2 ～ 5条 ,头状花序 ,花冠黄褐色 ,
瘦果。气微 ,味微苦。
P10 经纬国药房 皱缩卷曲的团块 ,根圆锥状 ,褐色 ,长 3 ～ 7 cm ,叶多皱缩 ,暗绿色 ,先端尖 ,边缘浅裂 ,花茎 1 ～ 5条 ,头状花序 ,
花冠暗黄色 ,瘦果。气微,味微苦。
表 2　梯度洗脱程序
Tab 2　The procedure of g radient elution
时间/min 甲醇(A)/ % 0.015%磷酸水溶液(B)/ %
0.01 20 80
20 20 80
40 30 70
90 75 25
表 3　平衡色谱柱程序
Tab 3　The procedure of balancing chromatog ram colum n
时间/min 流动相 A/ % 流动相 B/ %
0 75 25
5 20 80
25 20 80
图 1　蒲公英药材样品色谱图
Fig 1　The chromatog ram chart of the samples of T.mongo licum
Hand.-Mazz
0.5 g ,制备供试品溶液 ,连续进样 5次 ,测定 HPLC图
谱 ,以咖啡酸为参照峰 ,计算相对保留时间及相对峰面
积 ,各共有峰相对保留时间的 RSD为0.32%～ 1.25%,
各共有峰相对峰面积的RSD为1.82%～ 2.91。
2.4.2　重复性试验　称取蒲公英 P4号样品粉末
0.5 g ,制备供试品溶液 ,平行操作 5份 ,测定 HPLC
图谱 ,以咖啡酸为参照峰 ,计算相对保留时间及相对
峰面积 ,各共有峰相对保留时间的 RSD为0 .07%～
1.62%,各共有峰相对峰面积的 RSD 为 1.17 %～
2.93%。
2.4.3　稳定性试验 　称取蒲公英 P4 号样品粉末
0.5 g ,制备供试品溶液 ,分别在 0 ,2 ,4 ,6 ,8 ,10 , 24 h
进样 ,测定 HPLC图谱 ,以咖啡酸为参照峰 ,计算相
对保留时间及相对峰面积 ,各共有峰相对保留时间
的 RSD为0.28 %～ 1.42 %,各共有峰相对峰面积的
RSD为1.80 %～ 2.97%。
2.5　蒲公英 HPLC 特征图谱的建立
2.5.1　河南不同药店的商品蒲公英药材 HPLC 特
征图谱　对不同药店的 10批次蒲公英药材进行测
定 ,蒲公英各成分的色谱峰在 90 min 内洗脱完全 ,
见图 2。分析比较 10批次蒲公英样品的色谱图 ,并
以蒲公英对照药材为参照图谱 ,得到 10批次样品的
相似度 ,见表 4 。
表 4　蒲公英药材样品的相似度
Tab 4 　The similarity of the samples o f T .mongolicum
H and.-Mazz
编号 相似度 编号 相似度 编号 相似度
1 0.987 9 5 0.946 2 9 0.984 4
2 0.976 4 6 0.984 3 10 0.995 8
3 0.975 7 7 0.980 0 11 1.000 0
4 0.942 7 8 0.990 9
2.5.2　蒲公英共有峰指定　根据《中药注射剂指纹
图谱研究的技术要求(暂行)》 ,指定 9个共有峰 ,并
以 3号峰咖啡酸作为参照峰 ,其保留时间作为 1 ,计
算各共有峰的相对保留时间的 RSD 为 0.34%～
1.67%,见表 5。其峰面积作为 1 ,计算各共有峰的
·644· 中国医院药学杂志 2010年第 30卷第 8期 Chin H osp Pharm J , 2010 Apr , Vol 30 , No.08
相对峰面积的 RSD为1.70 %～ 2.91 %,见表 6。
表 5　蒲公英药材 9个共有特征峰的相对保留时间
Tab 5　The relative reserving time o f the nine mutual peaks
of T.mongolicum Hand.-Mazz
编号 共有峰峰号
1 2 3 4 5 6 7 8 9
　1 0.403 0.776 1.000 1.712 1.933 1.978 2.025 2.609 2.768
　2 0.406 0.776 1.000 1.716 1.943 1.988 2.029 2.615 2.776
　3 0.394 0.774 1.000 1.708 1.933 1.978 2.033 2.624 2.781
　4 0.409 0.774 1.000 1.717 1.939 1.984 2.026 2.608 2.765
　5 0.393 0.774 1.000 1.696 1.919 1.964 2.024 2.580 2.765
　6 0.410 0.776 1.000 1.729 1.953 1.997 2.034 2.621 2.784
　7 0.406 0.779 1.000 1.721 1.945 1.991 2.032 2.616 2.779
　8 0.412 0.781 1.000 1.708 1.931 1.975 2.004 2.575 2.732
　9 0.411 0.780 1.000 1.728 1.952 1.997 2.029 2.612 2.775
　10 0.409 0.779 1.000 1.724 1.950 1.995 2.031 2.614 2.776
RSD
/ % 1.67 0.34 0.00 0.60 0.56 0.55 0.43 0.63 0.54
表 6　蒲公英药材 9个共有特征峰的相对峰面积
Tab 6　The relative area o f the nine mutual peaks o f T .
mongolicum Hand.-Mazz
编号 共有峰峰号
1 2 3 4 5 6 7 8 9
　1 2.344 0.237 1.000 5.334 0.060 0.163 0.660 0.194 0.531
　2 2.330 0.234 1.000 5.320 0.062 0.165 0.625 0.201 0.535
　3 2.315 0.240 1.000 5.291 0.061 0.164 0.645 0.192 0.540
　4 2.447 0.216 1.000 5.315 0.059 0.168 0.669 0.184 0.525
　5 2.306 0.232 1.000 5.176 0.064 0.171 0.607 0.189 0.550
　6 2.412 0.236 1.000 5.286 0.061 0.156 0.646 0.191 0.538
　7 2.353 0.239 1.000 5.653 0.063 0.161 0.643 0.188 0.546
　8 2.457 0.235 1.000 5.262 0.062 0.167 0.653 0.197 0.527
　9 2.263 0.234 1.000 5.327 0.060 0.164 0.649 0.193 0.522
　10 2.402 0.238 1.000 5.223 0.062 0.170 0.651 0.187 0.539
RSD
/% 2.71 2.91 0.00 2.40 2.45 2.69 2.72 2.61 1.70
3　讨论
本实验所采用的色谱条件能将蒲公英中各成分
有效分离 ,全程分析时间 90 min ,用相似度评价软
件及共有特征峰的标定对其进行系统的分析 ,结果
表明 ,10批次样品相似度均大于0 .9 ,各共有峰的相
对保留时间和相对峰面积的 RSD也均小于 3%,符
合特征图谱要求[ 3] ,该特征图谱为蒲公英药材质量
标准的制定奠定了基础 。
对中药蒲公英的提取溶剂 、提取方法 、提取溶剂
量及色谱条件进行系统的研究 ,建立了优化的提取
和色谱分离分析方法。
本实验对 250 ～ 340 nm 波长进行了考察 ,发现
在 323 nm 处 ,图谱基线平稳 ,色谱峰数目多且分离
效果好 ,且指标性成分绿原酸和咖啡酸的响应值较
高 ,与文献报道中绿原酸与咖啡酸在 323 nm 处有
最大吸收相一致 ,故选择 323 nm为测定波长 。
图谱中 4号峰峰面积较大 ,但其所占共有峰的总
面积的比例小于 70%,说明除去此峰 ,其余 8个共有
峰相似度也较高 ,进一步验证了相似度计算的可行
性 ,同时结合共有模式的标定对其进行系统的分析 ,
消除了系统误差 ,能更好地控制蒲公英的质量 。
建立了河南商品蒲公英的标准特征图谱 ,得到
9个比较稳定的共有特征峰 。以咖啡酸为参照峰 ,
其保留时间记为 1 ,峰面积记为 1。 9个色谱峰的平
均相对保留时间依次为0.405 ,0.777 , 1.000 ,1.716 ,
1.940 ,1 .985 ,2.027 ,2 .607 ,2.770 ,平均相对峰面积
依次为 2 .363 , 0.234 , 1.000 , 5.319 , 0.061 , 0.165 ,
0.645 ,0 .192 ,0.535。
参考文献:
[ 1] 　中国药典.一部[ S] .2005:244-245.
[ 2] 　晏媛 ,许重远 ,刘世霆 ,等.蒲公英的乙酸乙酯部位 HPLC指纹
图谱定性分析和咖啡酸的定量测定[ J] .华西药学杂志 , 2004 ,
19(5):344-347.
[ 3] 　国家药典委员会.中药注射剂指纹图谱实验研究技术指南(试
行).2002年 4月 27日(国家药典委员会网站).
[收稿日期] 2009-04-13
[ 基金项目] 河南省杰出人才项目(编号:084200510017), 河南省重大公益科研项目(编号:081100912500)　[ 作者简介] 李艳英 ,女 ,硕士 , 电
话:15001367050 , E-mai l:yanyanyin gying5566@163.com　[ 通讯作者] 白雁 ,女 ,教授, 博士生导师 ,电话:0371-65962967 , E-mail:w hi te yan @
h otm ail.com
近红外光谱法测定一清颗粒模拟样品中黄芩苷的含量
李艳英1 ,白雁1 ,龚海燕1 ,樊克锋2 ,李雯霞1 　(1.河南中医学院 , 河南 郑州 450008;2.郑州牧业高等专科学校 , 河南 郑
州 450011)
[ 摘要] 　目的:利用近红外光谱法对一清颗粒模拟样品中黄芩苷的含量进行快速测定。 方法:以 2005 年版药典所规定的
HPLC 方法所测定的样品中黄芩苷含量作为基准值 ,采用近红外结合偏最小二乘法建立样品模型。结果:黄芩苷的 PLS 定量
校正模型 ,相关系数 R 为0.998 3 ,校正均方差(RMSEC)为0.035 6 ,交叉验证集预测 RESEP为0.085 5。结论:对黄芩苷含量
预测结果较好 ,且该方法不需要对样品进行复杂繁琐的前处理 , 分析速度快 , 结果准确 ,为中药生产过程的在线 、无损定量分
析提供参考。
[ 关键词] 　近红外光谱法;定量分析;自制一清颗粒;黄芩苷
·645·中国医院药学杂志 2010年第 30卷第 8期 Chin H osp Pharm J , 2010 Ap r , Vol 30 , No.08