全 文 :纹图谱数据进行分析,并且获得了详细、科学的结果。今后在我
国中药质量评价和控制体系不断发展和完善的过程中,这些方法
可以联合起来,建立起药物质量分析的平台,指导厂家生产出更
高品质的合格药品[15,16]。除此之外,本实验所建立的 HPLC 指
纹图谱提取了一段波长的色谱图,可以在一张谱图上得到该波长
范围内所有物质的最大吸收峰,获得了更为丰富的指纹信息。相
比单波长测定方法,该方法能够采集更多的信息,而相比多波长
测定方法,该方法能够更为方便地表征图谱,避免了多波长指纹
图谱融合技术[17]所造成的误差,是一种全面表征药物化学成分
的更有效手段。
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究[J].时珍国医国药,2010,21(9) :2353.
收稿日期:2014-03-24; 修订日期:2014-09-24
基金项目:吉林省教育厅“十二五”科学技术研究项目(吉教科合字
[2012]第 360 号)
作者简介:何晓燕(1972-) ,女(汉族) ,吉林通化人,通化师范学院生命科
学学院教授,硕士学位,主要从事长白山区药用植物的药效学研究工作.
暖木条荚蒾抗炎镇咳祛痰作用的实验研究
何晓燕,李 倩,周 颖,宋亭玮
(通化师范学院,吉林 通化 134002)
摘要:目的 研究暖木条荚蒾抗炎、镇咳祛痰作用。方法 采用二甲苯致小鼠耳肿胀实验、甲醛致小鼠足肿胀实验以及冰
醋酸致小鼠腹腔渗透实验来观察暖木条荚蒾茎枝水煎液的抗炎活性,采用氨水致咳法和小鼠酚红排泌法研究暖木条荚
蒾茎枝水煎液对小鼠的镇咳祛痰作用。结果 与生理盐水组比较,暖木条荚蒾茎枝水煎液高、中、低剂量组对小鼠的耳肿
胀、足肿胀以及腹腔毛细血管通透性均有一定的抑制作用,同时均可抑制氨水所致小鼠的咳嗽反应,使咳嗽次数减少、引
咳潜伏期延长,对小鼠气管痰液分泌具有明显的促进作用,使酚红排泌量增加,且量效关系成正比,其中高剂量组抑制作
用明显(P < 0. 01)。结论 暖木条荚蒾茎枝水煎液具有一定的抗炎镇咳祛痰作用。
关键词:暖木条荚蒾; 水煎液; 抗炎; 镇咳; 祛痰
DOI标识:doi:10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2015. 02. 020
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)02-0306-03
暖木条荚蒾 Viburnum burejaeticum Regel et Herder 为忍冬科
(Caprifoliaceae)荚蒾属(Viburnum)落叶灌木,别名修枝荚蒾,在
国内主要分布在黑龙江省、吉林省和辽宁省。据报道,荚蒾属植
物含有的化学成分类型较多,有二萜类、三萜类、环烯醚萜及其苷
类、黄酮类、木脂素等,黄酮类、烯醚萜及其苷类、酚类化合物以及
Visane型二萜是该属植物的特征化合物。Annelise等对 2 个哥伦
比亚荚蒾品种的酚类物质进行了研究[1],但国内对其植物化学
成分及生物活性的研究报道较少。我国荚蒾属植物资源虽然十
分丰富,但目前对其综合开发利用较少。在国内仅对荚蒾属鸡树
条荚蒾有所研究,鸡树条荚蒾叶、嫩枝均可入药,叶主治疮疥和皮
肤瘙痒等症;嫩枝主治风湿性关节炎、腰酸腿疼、跌打损伤等症;
枝叶具有收缩子宫,增强子宫的紧张度,治疗子宫出血的作用;果
实有止咳的功效,治疗慢性支气管炎、咳嗽痰喘疗效较好[2]。目
前对暖木条荚蒾的研究尚未见报道,因此本文通过二甲苯致小鼠
耳肿胀实验、甲醛致小鼠足肿胀实验以及冰醋酸致小鼠腹腔渗透
实验来观察暖木条荚蒾茎枝水煎液的抗炎活性,采用氨水致咳法
和酚红排泌法来研究暖木条荚蒾的镇咳、祛痰作用,以期为有效
扩繁和新药研发提供一定的实验依据。
1 材料与仪器
1. 1 实验动物 健康昆明种小鼠,体重为(20 ± 4)g,雌性,由长春
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医学实验动物中心提供,合格证号:scxk -(吉)2008 - 0001。
1. 2 实验药品与试剂 二甲苯,批号 20060106,沈阳市新西试剂
厂提供;冰醋酸,批号 20120303,天津市科密欧化学试剂有限公
司提供;甲醛,批号 20110809,沈阳市新西试剂厂提供;地塞米
松,批号 H41020330,河南润弘制药股份有限公司提供。苯酚红,
批号 880716,军事医学科学院提供;碳酸氢钠,批号 20110705 ,天
津博迪化工股份有限公司提供;氨水,批号 110801001,沈阳市新
东试剂厂提供;咳必清,批号 20130111,丹东医创药业有限责任
公司提供;氯化钠,批号 20120716,天津博迪化工股份有限公司
提供。
1. 3 实验仪器 电热鼓风烘干箱,型号 DGF30,南京实验仪器厂
提供;高速万能粉碎机,型号 FW100,北京中兴伟业仪器有限公
司提供;精密电子天平,型号 JA2003 SHP07003,上海恒平科学仪
器有限公司提供;可见分光光度计,型号 H723,上海第三分析仪
器厂提供。可调控温电热套,型号 ZDHW,北京中兴伟业仪器有
限公司提供;台式高速离心机,型号 TGL - 16G,湖南星科学仪器
有限公司提供。
2 方法
2. 1 暖木条荚蒾茎枝水煎液的制备 暖木条荚蒾采自吉林省通
化县并经鉴定,将暖木条荚蒾的茎枝在 60 ℃烘干箱中进行烘干,
用电子天平称量 200 g 的暖木条荚蒾茎枝用粉碎机粉碎成粉末
状,把 200 g的暖木条荚蒾茎枝的粉末泡在 2 000 ml水中,浸泡 2
h后放在可控温的电热套中加热,加热 1h,边加热边搅拌,1 h 后
取出滤液,把剩余残渣加入与第一次相同量的水,继续加热 1 h,
过滤取滤液.将两烧杯中的滤液混在一起,进行熬制,使滤液熬成
膏状为止[3]。把暖木条荚蒾膏加入 200 ml 水(即 1 ml 含生药 1
g)。把制成的水煎液放冰箱中冷藏待用。
2. 2 小鼠耳肿胀实验 取 50 只小鼠随机分成 5 组,即暖木条荚
蒾茎枝水煎液高剂量组、中剂量组、低剂量组,生理盐水组,地塞
米松组,每组 10 只小鼠.暖木条荚蒾茎枝水煎液高、中、低剂量组
的灌胃给药剂量分别为 20,15,10 g /kg(干药材重 /体重) ,每天按
0. 2 ml /10g给药,生理盐水组灌胃给予等体积的生理盐水,地塞
米松组给药剂量是 0. 0036g /kg,每天按 0. 2 ml /10 g灌胃给药,连
续灌胃 7 d。于末次给药 1 h后,将 0. 05 ml二甲苯均匀的涂抹于
各组小鼠的右耳的两面,小鼠的左耳不涂作为对照,致炎 1h 后,
脱颈椎处死,沿着小鼠耳廓剪下小鼠的两耳,折叠在一起,剪下相
同大小的圆形,分别称重,以左右耳的重量之差即为肿胀度[4,5]。
肿胀度 =肿胀耳重量 -对照耳重量
肿胀抑制率(%)=(对照组平均肿胀率 -给药组平均肿胀
率)/对照组平均肿胀率 × 100%
2. 3 小鼠足肿胀实验 取 50 只小鼠,实验分组、实验给药剂量如
同“2. 2”连续灌胃 7d后,于末次给药 1h后,每只小鼠的右后足跖
皮下注射 1%的甲醛致炎,左后足不注射,作为与右后足作对照,
1h后沿踝关节剪下左右两足,称其重量,肿胀度就是左右足的重
量之差[6,7]。
肿胀度 =肿胀足重量 -对照足重量
肿胀抑制率(%)=(对照组平均肿胀率 -给药组平均肿胀
率)/对照组平均肿胀率 × 100%
2. 4 小鼠腹腔渗透实验 取 50 只小鼠,实验分组、实验给药剂量
如同“2. 2”。连续灌胃 7 d,末次给药 1. 5 h 后尾静脉注射 5%伊
文思蓝生理盐水溶液 0. 1 ml /10g,10 min后腹腔注射 7%冰醋酸
0. 1 ml /10g,20 min后脱颈椎处死小鼠,每只小鼠腹腔注射生理
盐水 5ml轻揉腹部 3 min,从腹腔中取腹腔冲洗液 3 ml(如有血液
污染,弃去不用) ,1 500 r /min 离心 15 min 后取上清液,再用
H723 -可见分光光度计,于波长 590 nm处测吸光值[8,9]。
2. 5 小鼠镇咳实验 取小鼠 50 只随机分为 5 组,每组 10 只。即
生理盐水组、咳必清组、暖木条荚蒾茎枝水煎液低、中、高剂量组.
依据中药药理研究方法学[4]计算,咳必清组小鼠按 10 ml /kg 给
药质量浓度为 0. 5 × 10 -2 g /kg,每 24 h 灌胃给予咳必清 1 次;生
理盐水组、各给药组给药剂量如同“2. 2”,连续灌胃 7 d。于末次
给药 30 min后,取直径 1 cm瓶盖,内垫两层滤纸扣于 1 000 ml广
口瓶下,吸取 28%氨水 0. 5 ml注射于瓶盖内滤纸上,扣 1 min,迅
速取出瓶盖,将小鼠扣于广口瓶下,观察和记录 2 min 内咳嗽次
数和咳嗽潜伏期(首次开始咳嗽的时间) ,并观察各给药组与生
理盐水组之间镇咳作用的差异[10,11]。
2. 6 小鼠祛痰实验 实验分组、给药剂量同“2. 5”,末次给药 30
min后,腹腔注射 0. 5%酚红 20 ml /kg,注射酚红 30 min 后,脱颈
椎处死小鼠,仰卧位固定于蛙板上并分离气管,剥离气管周围组
织,剪下自甲状软骨下至气管分支处的一段气管,放入盛有 2 ml
生理盐水的试管中,再加 0. 1ml 5% NaHCO3 溶液,1 000 r /min离
心 30min,取上清液,用可见分光光度计于波长 546 nm 处测光吸
收值[12,13]。
2. 7 数据统计 采用 SPSS数据处理软件,各组数据结果以 珋x ± s
表示,组间比较用 t检验。
3 结果
3. 1 对小鼠一般特征的影响 各实验组小鼠状态无明显差别,均
生活正常,无精神萎靡或死亡,给药组稍显活泼。饮食量与饮水
量稳定,各组体重增长速度无明显差异。
3. 2 暖木条荚蒾茎枝水煎液对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响 见
表 1。
表 1 暖木条荚蒾茎枝水煎液对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(珋x ±
s)
组别 给药剂量 / g·kg -1 肿胀度 /mg 抑制率 /%
生理盐水组 - 21. 8 ± 0. 78 -
地塞米松组 0. 0036 5. 5 ± 0. 57** 74. 7
暖木条荚蒾低剂量组 10 21. 3 ± 4. 6 2. 3
暖木条荚蒾中剂量组 15 13. 5 ± 1. 949* 38. 0
暖木条荚蒾高剂量组 20 6. 8 ± 2. 4** 68. 8
与生理盐水比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01;n = 10
实验结果表明:与生理盐水组比较,暖木条荚蒾茎枝水煎液
高、中、低剂量组均能抑制小鼠耳肿胀,并随着浓度的增加作用也
增强,其中暖木条荚蒾茎枝水煎液高剂量组差异极显著
(P < 0. 01) ,中剂量组差异显著(P < 0. 05) ,低剂量组差异不显著
(P > 0. 05) ,因此中可以得出暖木条荚蒾茎枝水煎液高剂量组抑
制作用最好。
3. 3 暖木条荚蒾茎枝水煎液对甲醛致小鼠足肿胀的影响 见
表 2。
表 2 暖木条荚蒾茎枝水煎液对甲醛致小鼠足肿胀度的影响(珋x ±
s)
组别 给药剂量 / g·kg -1 肿胀度 /mg 抑制率 /%
生理盐水组 - 94. 2 ± 3. 7 -
地塞米松组 0. 0036 21. 8 ± 3. 0** 76. 8
暖木条荚蒾低剂量组 10 74 ± 1. 09 21. 4
暖木条荚蒾中剂量组 15 51. 5 ± 10. 7* 45. 3
暖木条荚蒾高剂量组 20 49. 8 ± 7. 8** 47. 1
与生理盐水比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01;n = 10
实验结果表明:与生理盐水组比较,暖木条荚蒾茎枝水煎液
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高、中、低剂量组均能抑制小鼠足肿胀,并随着浓度的增加作用也
增强,其中暖木条荚蒾茎枝水煎液高剂量组差异极显著
(P < 0. 01) ,中剂量组差异显著(P < 0. 05) ,低剂量组无显著性差
异(P > 0. 05) ,因此暖木条荚蒾茎枝水煎液高剂量组抑制作用最
好(见表 2)。
3. 4 暖木条荚蒾茎枝水煎液对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响
见表 3。
表 3 暖木条荚蒾茎枝水煎液对冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响
(珋x ± s)
组别 给药剂量 / g·kg -1 光吸收值
生理盐水组 - 0. 307 ± 0. 046
地塞米松组 0. 0036 0. 084 ± 0. 02**
暖木条荚蒾低剂量组 10 0. 199 ± 0. 066
暖木条荚蒾中剂量组 15 0. 1035 ± 0. 024**
暖木条荚蒾高剂量组 20 0. 0965 ± 0. 033**
与生理盐水比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01;n = 10
实验结果表明,与生理盐水组比较,暖木条荚蒾茎枝水煎液
高、中、低剂量组均能抑制小鼠腹腔毛细血管通透性,并随着浓度
的增加作用也增强,其中暖木条荚蒾茎枝水煎液高、中剂量组差
异极显著(P < 0. 01) ,但高剂量组比中剂量组效果更好,低剂量
组差异不显著(P > 0. 05) ,因此暖木条荚蒾茎枝水煎液高剂量组
作用效果最好。
3. 5 暖木条荚蒾茎枝水煎液对小鼠的镇咳作用 见表 4。实验
结果表明:与生理盐水组比较,暖木条荚蒾水煎液低、中、高剂量
均可以延长因氨水所致小鼠的咳嗽潜伏期,同时可以减少咳嗽次
数,有随给药浓度升高药效升高趋势.其中,对咳嗽潜伏期来说高
剂量组差异极显著(P < 0. 01) ,中剂量差异显著(P < 0. 05).对咳
嗽次数来说,高剂量和中剂量均差异极显著(P < 0. 01)。
表 4 暖木条荚蒾水煎液的镇咳作用(珋x ± s)
组别 给药剂量 / g·kg -1 潜伏期 / s 咳嗽次数
生理盐水组 - 20. 4 ± 1. 12 66. 2 ± 1. 35
咳必清组 0. 5 × 10 -2 46. 0 ± 1. 29** 18. 7 ± 0. 98**
低剂量组 10 31. 6 ± 1. 11 59. 0 ± 1. 19
中剂量组 15 34. 8 ± 1. 12* 37. 5 ± 1. 17**
高剂量组 20 41. 8 ± 1. 31** 30. 2 ± 1. 09**
与生理盐水组比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01;n = 10
3. 6 暖木条荚蒾茎枝水煎液对小鼠的祛痰作用 见表 5。实验
结果表明:与生理盐水组比较,暖木条荚蒾水煎液低、中、高剂量
均可以增加小鼠呼吸道的酚红排泌量,并且暖木条荚蒾水煎液有
随给药浓度升高药效升高趋势,其中高剂量组差异极显著
(P < 0. 01) ,中剂量组差异显著(P < 0. 05)。
表 5 暖木条荚蒾水煎液的祛痰作用(珋x ± s)
组别 给药剂量 / g·kg -1 光吸收值
生理盐水组 - 0. 009 ± 0. 259
咳必清组 0. 5 × 10 -2 0. 054 ± 0. 051**
低剂量组 10 0. 016 ± 0. 027
中剂量组 15 0. 024 ± 0. 039*
高剂量组 20 0. 051 ± 0. 047**
与生理盐水组比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01;n = 10
4 讨论
多种原因会引起炎症,基本的病理变化包括变质,增生。炎
症的早期表现主要是毛细血管扩张,通透性增加,还有渗出和水
肿;炎症产生的中期多是血小板黏附以及白细胞游走为特点,后
期是纤维组织增生,肉芽屏障形成等特点。本次试验通过耳肿胀
实验、足肿胀实验、腹腔渗透实验来研究暖木条荚蒾茎枝的抗炎
效果。结果表明,暖木条荚蒾水煎液对二甲苯引起的小鼠耳廓肿
胀,甲醛引起的小鼠足肿胀和冰醋酸致毛细血管通透性增强均一
定的抑制效果,并且抑制效果与其给药剂量成正比,其中高剂量
组抑制炎症的效果最佳,低剂量组的抑制炎症的效果就很小。综
上所述暖木条荚蒾有一定的抗炎效果,作用机理与其增加毛细血
管通透性,和减少渗出有关,也可能与其抗组织胺作用有关系,这
方面还有待进一步研究。
咳嗽、痰多、气喘是呼吸道感染、急慢性支气管炎等疾病的常
见症状,严重地影响人们的身体健康及工作[13]。咳嗽是喉 -气
管 -支气管系统对机械或化学刺激所引起的一种正常生理反应,
在动物身上,咳嗽可由机械、化学刺激和电刺激气管黏膜、迷走神
经而产生,其中以化学和机械刺激最接近正常生理情况。本实验
采用氨水致小鼠咳嗽法研究暖木条荚蒾的镇咳作用,结果表明暖
木条荚蒾茎枝水煎液能减少小鼠咳嗽次数,并延长引咳潜伏期,
该药可保护支气管黏膜免受刺激,达到镇咳效果。痰是由气管和
支气管的腺体和杯状细胞所分泌,本实验采用酚红排泌法研究
暖木条荚蒾的祛痰作用。暖木条荚蒾茎枝水煎液能增加小鼠气
管内酚红排泌量,该药可增强气管和支气管腺体和杯状细胞的分
泌功能,使分泌量增加,从而达到祛痰作用。暖木条荚蒾具有较
好的止咳、祛痰作用,其作用机制和药用成分还有待于进一步研
究。
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