全 文 ：10 Susan T． Harbison and Amita Sehgal． Quantitative Genetic Analysis of
Sleep in Drosophila melanogaster． Genetics，2008;178∶ 2341 ～ 2360
11 许光辉．基于基因芯片技术的刺五加改善果蝇睡眠作用的机制研究．
黑龙江中医药大学博士学位论文，2010
12 韩春霞，李廷利，郭冷秋．刺五加根水提液对大鼠睡眠时相的影响．中
药药理与临床，2007;23(5)∶ 148 ～ 149
Effects of Acanthopanax senticosus on sleep and gene expression profiles of sleep-deprivated drosophila
Xu Guanghui1，2，Li Tingli2
(1 Xiamen Medical Research Institute，Xiamen 361008;
2 Heilongjiang University of Traditional Chinese Medicine，Harbin 150040 )
Objective:To study the effects of Acanthopanax senticosus on sleep and gene expression profiles of sleep-deprivated drosophila． Meth-
ods:Under the standard conditions of costant temperature，humidity，automatically controlled lighting，an infrared drosophila activity monitor
system(DAMS)was used to monitor the sleeping data of drosophila，and the dose-effect and time-effect of Acanthopanax senticosus on impro-
ving sleep was studied in 7-day-old drosophila;then，effects of Acanthopanax senticosus on gene expression profiles of sleep-deprivated dro-
sophila were studied by the microarray technology． Results:1% drug medium for dose，≥3days for delivery time is best for improving sleep
of drsophila;Acanthopanax senticosus(concentration of 1%，administration 4 days)can changed expression of 685 genes in the head of fly，
188 genes were up-regulated，and 497 genes were down-regulated． Conclusions:Acanthopanax senticosus can improving sleep of drosophila，
and the mechasisms involved in the process of the immune response and multicellular organism．
Key words Acanthopanax senticosus(刺五加) ;drosophila;sleep deprivation;microarray
秦岭柴胡抗大鼠肝纤维化的研究
*
刘阿萍1，景万燕2，李 敏1＊＊
(1陕西中医学院药学院，咸阳 712046;2榆林市横山县卫生局，横山 719200)
摘 要 目的:观察秦岭柴胡水煎液对复合因素所致大鼠肝纤维化的作用。方法:制备四氯化碳、酒精以及高脂饲料等复合因
素所致肝纤维化模型，将 24 只大鼠，随机分为:秦岭柴胡水煎液组，肝纤维化模型组，空白对照组。给药组连续 7 天灌胃秦岭柴胡水
煎液(5． 6g /kg) ，观察秦岭柴胡水煎液对肝纤维化大鼠血清中谷草转氨酶(AST)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原
(Ⅳ-C)的影响，探讨秦岭柴胡抗肝纤维化效应。结果:秦岭柴胡水煎液(5． 6g /kg)能抑制实验性肝纤维化大鼠血清中 AST、HA、PC
Ⅲ、Ⅳ-C水平的升高。结论:秦岭柴胡水煎液对实验性肝纤维化有一定的治疗作用。
关键词 秦岭柴胡;水煎液;肝纤维化
肝纤维化是慢性肝炎发展为肝硬化的必经病理过程，是肝
癌的重要病因，肝纤维化在尚未发展成肝硬化前通常是可逆性
病变，因此阻止肝纤维化的形成与发展对防治肝硬化，肝癌的
发病具有重要意义［1］。已知柴胡药材及小柴胡汤等含柴胡中
药制剂，在临床上具有确切抗肝纤维化疗效，其有效成份为柴
胡皂苷和贝加灵等［2］。秦岭柴胡(Bupleurum longicayle wall． es
DC． var． giradii wolff)又名金柴胡，为伞形科柴胡属植物，生于海
拔 2800 ～ 3000 米山坡丛中，主产于秦岭太白山，光头山一带，其
味苦，微辛，性凉，有发表祛风，清心火，清肝利胆，通经等功效，
可用于治疗肝气不舒，黄疸、感冒、虚劳骨蒸等病症［3］，临床也
用于多种肝病的治疗。本实验结合秦岭柴胡清肝利胆，疏泄肝
之气机作用，观察秦岭柴胡水煎液对肝纤维化大鼠一般情况及
肝功能指标的影响，研究该药在治疗肝病方面的疗效并探讨其
可能作用机理，为临床治疗本病提供新的思路，以期为开发治疗
肝病的新药提供合理的依据。
1 材料和方法
1． 1 试验药物 秦岭柴胡(B． longicayle wall． es DC． var． giradii
wolff)于 2011 年 10 月采自陕西省太白县咀头镇，经陕西中医学
院药学院王西芳教授鉴定为秦岭柴胡，按 11． 2g /10ml的生药量
制成水煎剂。
1． 2 动物 雄性 SD 大鼠( (200 ± 5 g)24 只，体重 195 ～
221 中药药理与临床 2012;28(5)
* 基金项目:陕西省中管局课题(zy06) ;陕西省教育厅项目(12JK1016) ＊＊通讯作者
DOI:10.13412/j.cnki.zyyl.2012.05.040
205g，，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，合格证号:
SCXK(陕)2007-001。将大鼠置于鼠笼内饲养，自然采光，实验
前大鼠适应环境 3 天，自由摄食与饮水，无不良反应，进食、饮水
和活动正常者纳入实验。
1． 3 试剂 胆固醇;10%水合氯醛;4%多聚甲醛:天津市科
密欧化学试剂有限公司;CCl4，乙醇:分析纯:天津市天力化学试
剂有限公司;试剂盒:透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型
胶原(Ⅳ-C) :南京建成生物工程研究所。
1． 4 方法 大鼠 24 只，随机分为 3 组，即秦岭柴胡水煎液组，
肝纤维化模型组，空白对照组。雄性 SD大鼠，体重 195 ～ 205g。
动物适应性喂养 3d天后，取空白对照组正常饲养，其余组按造
模开始饮 10% 乙醇，饲喂高脂饲料，一周后皮下注射 40% CCl4
橄榄油溶液 5 ml /kg，以后根据大鼠体重变化情况，每周两次
(周三、周六)皮下注射 40% CCl4溶液 3 ml /kg，连续 3 周。即成
肝纤维化模型。之后按大鼠体重将 A 组以 0． 5ml /100g 体积剂
量的秦岭柴胡水煎液灌胃。B组和 C组均以同上剂量蒸馏水灌
胃，所有组每天灌胃一次，连续 7 天。各组大鼠末次给药后禁食
12 小时，经腹主静脉取血，低温离心分离血清，按照试剂盒说明
书检测 AST、HA、PCⅢ、Ⅳ-C。
2 结果
2． 1 对肝纤维化大鼠肝功能的影响 由表 1 可见，与空白对
照组相比，模型组 PC-Ⅲ、IV-C和透明质酸 HA的含量均有明显
的上升(P ＜ 0． 05) ，表明肝纤维化模型建成。经过秦岭柴胡水
煎液 5． 6g /kg 灌胃治疗后，秦岭柴胡组大鼠血清内 PC-Ⅲ、IV-C
和 HA含量均有下降(P ＜ 0． 05) ，并具有显著性差异。
表 1 秦岭柴胡水煎液对肝纤维化大鼠肝功能的影响(珋x ± s)
组别
剂量
(g /kg)
PC-Ⅲ
(ng /ml)
Ⅳ-C
(ng /ml )
HA
(ng /ml)
正常对照 8． 853 ± 2． 235 22． 550 ± 5． 84 53． 251 ± 6． 85
模型对照 16． 823 ± 4． 214 29． 638 ± 6． 03 227． 86 ± 18． 74
秦岭柴胡 5． 6 9． 266 ± 2． 790 20． 720 ± 5． 448 181． 42 ± 10． 89
与模型对照组比较，P ＜0． 05;n = 8
2． 2 对肝纤维化大鼠血清中 AST的影响
表 2 秦岭柴胡水煎液对肝纤维化大鼠血清中 AST的影响(珋x ± s)
组别 剂量(g /kg) AST(mmol / l )
正常对照 1． 959 ± 0． 324
模型对照 2． 621 ± 0． 319
秦岭柴胡 5． 6 2． 016 ± 0． 258
与模型对照组比较，P ＜ 0． 05;n = 8;
由表 2 可见通过造模后模型组大鼠血清 AST 均高于空白
组(P ＜ 0． 05) ，而灌胃给药一周后，肝纤维化大鼠血清 AST 含
量较模型组有明显的下降。
3 讨论
肝脏是人体最重要的代谢器官，能合成 AST，ALT，TP，
ALB，CHE，ALP，TBIL等重要的蛋白质和酶类。酶活性的改变
和蛋白质水平的改变与肝实质受损程度呈一定相关性。这些
酶和蛋白在临床常用于反映肝功能的指标，在这些指标中 AST
和 ALT可以反映肝脏细胞受损及慢性炎性反应过程［7］，已有研
究证明肝纤维化过程与 AST 成正相关［8］。HA、PC-Ⅲ、Ⅳ-C 是
目前研究最多的肝纤维化血清学指标，动物试验及临床研究均
表明它们与肝纤维化程度呈正相关，是反映肝脏增生的指
标［9］，所以对肝纤维化的研究具有较高参考价值，这些指标含
量越高，说明肝纤维化越严重。
实验结果表明，秦岭柴胡水煎液可显著降低肝纤维化大鼠
血清内 PC-Ⅲ、IV-C、HA及 AST水平，表明秦岭柴胡具有较好的
抑制胶原蛋白合成、促进其降解的作用。这与临床上，秦岭柴胡
被用于治疗肝气不舒，黄疸、虚劳骨蒸等病症相一致。已有研究
表明，柴胡通过抑制肝炎和肝星状细胞(HSC)活化，抑制肝纤维
化进程，柴胡皂苷通过抑制 C /EBPβ 和 COX-2 发挥抗肝纤维化
效应，同时柴胡皂苷能抑制 AKT /ERK磷酸化和 NF -κB 活性的
下调抗肝纤维化［11］，柴胡皂苷对小鼠肝脏和肠道中的 CYP3A
具有一定的诱导作用［12］，秦岭柴胡中主要含有柴胡皂苷 a、c、d，
推测柴胡皂苷是作为主要物质基础发挥药效，关于秦岭柴胡抗
肝纤维化的机制，还需进一步实验研究。
参考文献
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12 王永辉，奇锦峰，林海． 等． 柴胡总皂苷对小鼠肠道首过效应肝脏
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～ 748
321中药药理与临床 2012;28(5)
Study on the effect of Bupleurum longicayle wall． es DC． var． giradii wolff on rats hepatic fibrosis
Liu Aping1，Jing Wanyan2，Li min1
(1 College of Pharmacy，Shaanxi University of Chinese Medicine ，Xianyang 712046
2 HengShan Public Health Bureau in Yulin Hengshan 719200)
Objective:To study the effect of aqueous extract of Bupleurum longicayle wall． es DC． var． giradii wolff(AEBG)against complex factors
induced liver fibrosis model in mice． Methods:To preparation liver fibrosis in mice by alcohol、CCl4 and high fat feed factors，then the con-
tents of AST，HA，PCⅢ，Ⅳ-C in serum were measured． Results:The contents of AST，HA，PCⅢ，Ⅳ-C in serum was decreased in the mice
that treatment with AEBG． Conclusion:aqueous extract of Bupleurum longicayle wall． es DC． var． giradii wolff(0． 5ml /100g)have a thera-
peutic effect on liver fibrosis induced by alcohol and CCl4 in mice．
Key words Bupleurum longicayle Wall． es DC． var． giradii wolff(秦岭柴胡) ;liver fibrosis
诃子乙醇提取物的抗氧化作用研究
*
王金华1，孙芳云2，袁东亚2，张 敏2，秦海林1，杜冠华1＊＊
(1 中国医学科学院 ＆中国协和医科大学药物研究所，北京 100052;
2西藏民族学院医学院，咸阳 712082)
摘 要 目的:研究诃子乙醇提物的抗氧化作用及其机制。方法:测定诃子醇提物对 FeSO4 /Cys氧化体系对肝微粒体脂质过
氧化的抑制率，对 H2O2 引起红细胞溶血的抑制效果、自氧化溶血的抑制率和清除 DPPH 自由基实验。结果:诃子乙醇提取物 12．
5ug /ml对肝微粒体脂质过氧化有显著抑制作用，能够抑制 H2O2 引起的红细胞溶血和自氧化引起的溶血，乙醇提取物浓度在 3ug /ml
对 DPPH自由基有显著的清除作用。结论:诃子具有较强的抗氧化能力，具有很好的应用前景和开发价值。
关键词 诃子、抗氧化;溶血;自由基
诃子是最常用的藏药之一，在藏药学经典著作 ＜ ＜晶珠本
草 ＞ ＞里，诃子被称藏药之王。诃子在蒙药中也是使用频率
最高的药物，大多数处方都有使用。文献记载，诃子具有良好的
涩肠止泻、降火利咽、调和药性、解毒等功效;现代药理实验证明
具有抗癌、降血糖、抗病毒、涩肠敛肺、降火利咽等功效［1］。国
外有关诃子抗氧化活性的报道主要集中在对诃子酸、诃子醇等
的活性研究，Lee等报道，诃子酸可保护大鼠肝细胞免受氧化损
伤、具有清除自由基和还原铁离子活性［2］。Senthilkumar等报道
诃子醇提物可控制糖尿病大鼠体内过氧化氢含量，发挥抗氧化
剂的作用［3］。国内研究也表明诃子粗提取物、诃子多酚［4］和诃
子多糖［5］具有较强抗氧化活性。但其研究方法较少，系统抗氧
化作用及机理研究报道不多，本文对诃子醇提取物的抗氧化作
用及其机理进行了多种方法及深入研究。
1 材料和方法
1． 1 试验药物 诃子生药材，购自藏医学院藏药厂。诃子果
实 5Kg，粉碎，用 60%乙醇加热回流提取 3 次，合并提取液，
浓缩至适量(相当于药材量的一半) ，加入等量的 95%乙醇，搅
匀，静置过夜，滤过． 滤渣用 60%乙醇洗涤，洗液与滤液合并，
减压回收乙醇，干燥得提取物 2． 5 Kg，相当于原生药 2g /g。
1． 2 动物 18g ～ 22g 昆明小鼠、280 ～ 330g Wistar 大鼠均由
中国医学科学院动物中心提供。
1． 3 试剂 半胱氨酸，Sigma公司产品;H2O2，硫酸亚铁，北
京化工厂产品;Vit E，购自北京贝丽莱日用化工厂;硫代巴比妥
酸(thiobarbituric acid，TBA) ，上海试剂二厂产品。
1． 4 仪器 酶标仪 Zenyth 200rt (Made in Australia) ;
SCR20BA型高速冷冻离心机，日本 HITACHI公司产品。
1． 5 方法
1． 5． 1 抗脂质过氧化作用 微粒体制备［6］:大鼠禁食过夜，断
头处死，用冷的 TMS 缓冲液(Tris-HCl 0． 05 mmol /L，蔗糖 0． 2
mmol /L，MgCl2 3 mmol /L，pH 7． 4)经门静脉冲洗肝脏至土黄色，
取肝脏制成匀浆，3000 g 离心 20 min，上清液 105 000 × g 离心
60 min，沉淀即为微粒体。将肝微粒体重悬于 TMS缓冲液中，稀
释至蛋白含量为 15 g /L(用考马斯亮兰法测蛋白浓度) ，储存于-
60℃冰箱备用。以上操作在 4℃条件下完成。
反应体系中含微粒体 0． 1 ml，加入溶剂或不同浓度的待测
药物 0． 01 ml(阳性对照不加待测药物) ，半胱氨酸(0． 01 mol /
L)0． 02 ml，硫酸亚铁(1 mmol /L)0． 05 ml(空白对照不加硫酸亚
铁) ，用 0． 1 mol /LPBS (pH 7． 4)补充至总体积为 1 ml。37℃共
温育 30 min后，加三氯乙酸和 TBA 显色剂，测定脂质过氧化物
丙二醛的含量。待测药物的作用以 MDA 的抑制率(IR%)表
421 中药药理与临床 2012;28(5)
* 基金项目:08 年国家民委科研项目:NO:08XZ03;创新药物筛选技术平台，863 重大专项． No2002AA2Z343B ＊＊通讯作者