全 文 ： JTCVM 由表 1可知,阳性对照物(第Ⅴ组)小鼠的骨髓嗜多染红细 为第Ⅰ组的 3.0倍和 3. 4倍;第Ⅱ组小鼠骨髓细胞微核率与 组相比 ,小鼠骨髓细胞微核率差异极显著(P <0. 01), 是第Ⅰ
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调查研究
千里光提取物的小鼠骨髓微核试验
陈进军 ,于增杰 ,林红英 ,徐晓彬
(广东海洋大学农业生物技术研究所 , 广东湛江 524088)
摘 要: 制备了千里光 70%乙醇提取物冻干粉 ,用昆明种雌雄性小鼠进行了该提取物的微核试验。结果
发现 , 在雌性小鼠 , 中 、高剂量的千里光 70%乙醇提取物能够引起小鼠骨髓细胞微核发生率升高 , 而低剂量
(130. 9 m g /kg)千里光 70%乙醇提取物不能引起小鼠骨髓细胞微核发生率升高;在雄性小鼠,高剂量(1 309. 0 mg /kg)
千里光 70%乙醇提取物能够引起小鼠骨髓细胞微核发生率升高 , 而低 、中剂量的千里光 70%乙醇提取物不能引
起小鼠骨髓细胞微核发生率升高;而且小鼠骨髓细胞微核发生率与千里光 70%乙醇提取物具有剂量依赖性。说
明千里光 70%乙醇提取物仅在较高剂量时能够对小白鼠产生致突变作用。
关键词: 千里光提取物;微核试验;致突变作用;小鼠
中图分类号:S853. 75 文献标识码:A 文章编号:1000 - 6354(2007)01 - 0020 -03
千里光(Senecio scandens Buch. -H am. )系多年生蔓性
草本植物 ,为菊科 (Com positae)千里光属植物 , 在我国广泛
分布于陕西 、江苏 、浙江 、安徽 、江西 、湖南 、四川 、贵州 、云
南 、广东和广西等地 , 各地多自产自销。 千里光在我国作为
中草药应用始载于唐代《本草拾遗》, 异名有千里及 、九里
光 、九里明和一扫光等数十个。 1977年版《中国药典》(一
部)和《贵州省中药材质量标准》(1988年版)记载了千里
光的功效:“清热解毒 , 明目 , 止痒 。用于风热感冒 , 目赤肿
痛 , 泄泻痢疾 , 皮肤湿疹 , 疥疮” 。 《中药大辞典》也将千里
光收入其中 ,其功能主治为:“清热 , 解毒 ,杀虫 ,明目 。治各
种急性炎症性疾病 , 风火赤眼 , 目翳 , 伤寒 , 菌痢等 ” [ 1] 。
关于千里光的毒性 , 很早就有记载 , 《本草拾遗》称其:
“味苦 ,平 ,小毒 ”。 而《本草图经》云:“味苦甘 , 寒 , 无毒” 。
由此可见 ,历史上对其毒性的认识不一。现代研究发现 ,千
里光全草含有大量毛莨黄 ( flavox znth in)、菊黄素 (chry san -
them axanthin)及少量 β -胡萝卜素;还含生物碱 、挥发油 、黄
酮苷 、鞣质 、酚类 [ 2] 。据英国 MHRA称 , 千里光属的各类植
物均含有不饱和吡咯里西啶类生物碱(pyrrolizidine a lka lo ids,
PA s), 对肝脏造成严重损害 , 引起人类肝小静脉闭塞症。 不
饱和吡咯里西啶类生物碱对动物也显现致癌性 , 诱导有机体
突变和生殖毒性 [ 3]。 陈进军等利用 TLC法 , 用 PAs特异性
强的 Ehr lich试剂对千里光全草及其抗菌有效部位 (即 70%
乙醇提取物)中 PA s进行检测发现 ,千里光全草含有生物碱
和 PAs。进一步对千里光抗菌有效部位中总生物碱和 PA s
进行研究 ,结果未检出 PA s。可见进行千里光抗菌有效部位
筛选和精制 ,可以清除其中的 PA s, 提高千里光抗菌有效部
位的安全性 [ 4] 。但是千里光 70%提取物是否具有致突变性 ,
收稿日期:2006 -09 - 20
基金项目:广东省科技攻关计划重点引导项目(2004B20201007);广东
省湛江市科技攻关计划项目(湛科 [ 2006] 65号)
作者简介:陈进军(1967 - ), 男, 博士, 副教授 ,硕士研究生导师 ,国家
公派加拿大 Guelph大学访问学者 ,主要从事植物药药理学
和毒理学研究。 E -m ail:jjchen777@ yahoo. com. cn
尚未见报道。 笔者等采用小鼠骨髓微核试验 [ 5] , 研究了
千里光 70%乙醇提取物的致突变作用 , 以丰富千里光抗
菌有效部位的毒理学资料。
1 材料与方法
1. 1 千里光及其 70%乙醇提取物的制备
千里光于 8月份采于广东省湛江市麻章区 , 由广东海
洋大学农业生物技术研究所鉴定。 将千里光阴干 、粉碎
后 , 过 20目筛 , 称取 50 g, 用 70%乙醇 500 m l浸泡过夜 ,
超声波萃取 1 h, 85 ℃水浴回流 2 h, 过滤 , 将滤液热浓缩
至 50 m l, 用乙醚萃取 3次脱色素等杂质 , 分装于干净的
青霉素瓶中 , 冷冻干燥成粉末 , 用石蜡封口后 4 ℃保存备
用。
1. 2 试验动物
昆明种小白鼠 100只 , 雌雄兼有 , 体重 (25±2)g, 购于
广西医科大学实验动物中心 , 合格证号:桂 SCX - 2003, 饲
养观察 1周后用于试验 。试验动物的饲养环境温度控制在
25 - 28 ℃, 湿度为 60% - 80%,室内无对流风 , 饲料为广东
医学院实验动物中心提供的小鼠全价颗粒料 , 自由采食 、饮
水 , 每天更换饮水 1次 , 隔天更换 1次垫料。
1. 3 试验器材
冷冻干燥机(德国 Virtis公司 , 型号:BENCHTOP), 旋转
蒸发器(上海沪西仪器厂 , 型号 RE - 52), 超声波振荡仪(宁
波新芝仪器研究所 , 型号:SB - 5200), PHS - 3C型数字酸度
计(杭州梵隆仪器有限公司 , 型号:PHS - 3C), 高压蒸汽灭菌
器(上海博讯实业有限公司医疗设备厂 , 型号:YXQ - SG46 -
280S),带油镜头显微镜 , 细胞计数器。
1. 4 试剂
乙醇 (分析醇), 甲醇 (分析纯 ), 甘油(分析纯), 小牛
血清 (长春宝泰克生物制剂公司), 环磷酰胺 (江苏恒瑞医
药股份有限公司产品 ), 生理盐水。 吉姆萨储备液 , 取吉
姆萨染料 1 g, 甘油 66 m l, 甲醇 60 m l。 先将染料置于研钵
内 , 加入少量甘油混合研细 , 再分次加入剩余的甘油继续
研磨 , 然后转移置烧杯内 , 加入少量甘油混合研细 , 于 60 ℃
DOI牶牨牥牣牨牫牳牪牫牤j牣cnki牣j tcvm牣牪牥牥牱牣牥牨牣牥牥牱
JTCVM
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静置 2 h,冷却后加入甲醇 ,混和静置 2周 , 过滤于棕色瓶内 ,
存放于阴凉处。临用时用 pH 6. 4的磷酸盐缓冲液配成 10%
的应用液。
1. 5 试验方法
将昆明种小白鼠 50只 , 随机分为 5组 , 每组 10只 , 雌
雄各半。 Ⅰ组为阴性对照组 , Ⅱ 、Ⅲ 、Ⅳ组分别给予不同剂
量的千里光 70%乙醇提取物 , Ⅴ组为阳性对照组。其中阴
性对照组给予生理盐水 (SW ), 阳性对照组给予环磷酰胺
(cyclophospham ide, CP)40 m g /kg, 千里光 70%乙醇提取物
的 3个剂量分别为 1 /3 LD50 、1 /10 LD50和 1 /30 LD50(已测
得千里光 70%乙醇提取物的 LD50为 3 927 mg /kg), 腹腔注
射 , 连续 2次 ,间隔 24 h。在第 2次给予供试物后 6 h, 将各
组小鼠脱颈椎处死 , 分别取其两侧股骨制骨髓涂片 , 将干燥
的涂片置于甲醇液中固定 5 -10 m in,取出晾干 , 固定好的涂
片用 1∶10吉姆萨 -磷酸盐缓冲液(pH 6. 4)染色 20 m in, 染
色后的涂片放入二甲苯中透明 6 m in, 取出后立即滴加中性
树胶 ,覆以盖玻片后平置 , 采用双盲法阅片。每张盖玻片计
数 1 000个嗜多染红细胞 (po lychrom atic E ry throcy te, PCE),
并计数含微核的嗜多染红细胞数 , 微核率按下式计算 , 并以
千分率表示:
嗜多染红细胞微核率(‰)=(含微核的嗜多染红细胞数 /嗜多
染红细胞总数)× 1 000
用 t检验比较各组供试小鼠微核率的差异 [ 5- 7] 。
2 结果
各剂量组药物对小鼠微核率的影响结果见表 1。
表 1 千里光 70%提取物对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率
的影响
组别 剂量
/mg. kg -1
动物数
/只
雌 雄
PCE数
/个
雌 雄
微核数
/个
雌 雄
微核率
/‰
雌 雄
Ⅰ SW 5 5 5 000 5 000 28 23 5. 6±0. 8C 4. 6±1. 5B
Ⅱ 130. 9 5 5 5 000 5 000 32 34 6. 4±0. 8aC 6. 8±1. 3aB
Ⅲ 392. 7 5 5 5 000 5 000 84 38 16. 8±3. 2bA 7. 6±1. 9aA
Ⅳ 1 309. 0 5 5 5 000 5 000 95 82 19. 0±4. 6bA 16. 4±3. 1cA
Ⅴ 40(CP) 5 5 5 000 5 000 109 68 21. 8±5. 8c 13. 6±2. 8b
注:a、b和 c分别表示供试提取物不同剂量组与阴性对照组比较 ,差异不
显著(P >0. 05)、差异显著(0. 01
异显著(0. 01
胞微核率最高 ,阴性对照物(第Ⅰ组)最低。在雌性小鼠试验中 ,
第Ⅴ组分别与阴性对照组(第Ⅰ组)和千里光 70%乙醇提取物低
剂量组(第Ⅱ组)相比较, 小鼠骨髓细胞微核率差异均极显著
(P <0. 01, P <0. 01);第Ⅲ组和第Ⅳ组小鼠骨髓细胞微核
率分别和第Ⅰ组比较 , 均差异显著(0. 01
第Ⅰ组相比 ,差异不显著(P >0. 05)。在雄性小鼠试验中 , 第
Ⅴ组分别与第Ⅰ组和第Ⅱ组相比较 , 小鼠骨髓细胞微核率均
差异显著(0. 01
组的 3. 6倍;但第Ⅲ组和第 Ⅱ组分别与第Ⅰ组相比 , 小鼠骨
髓细胞微核率差异不显著(P >0. 05, P >0. 05)。
综上所述 , 在雌性小鼠 , 中 、高剂量的千里光 70%乙
醇提取物能够引起小鼠骨髓细胞微核发生率升高 , 而低
剂量 (130. 9 m g /kg)则不能引起小鼠骨髓细胞微核发生
率升高;在雄性小鼠 , 高剂量 (1 309. 0 m g /kg)千里光
70%乙醇提取物能够引起小鼠骨髓细胞微核发生率升
高 , 而低 、中剂量则不能引起小鼠骨髓细胞微核发生率升
高;而且小鼠骨髓细胞微核发生率对千里光 70%乙醇提
取物具有剂量依赖性。
3 讨论
本研究采用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验 , 对千里
光 70%乙醇提取物的致突变作用进行了评价。 研究结果
表明 , 在雌雄兼有小白鼠 , 1 309. 0 m g /kg的千里光 70%
乙醇提取物能够引起小鼠骨髓细胞微核率显著升高 ,
130. 9 m g /kg的千里光 70%乙醇提取物不能引起小鼠骨
髓细胞微核率升高 。而 392. 7 m g /kg的千里光 70%乙醇
提取物能够引起雌性小鼠骨髓细胞微核率升高 , 但不能使
雄性小鼠骨髓细胞微核率升高。因此可以说 , 130. 9 m g /kg
及其以下剂量的千里光 70%乙醇提取物不能引起小鼠骨髓
细胞微核率升高 ,不具有致突变作用 。而 392. 7 m g /kg的千
里光 70%乙醇提取物对雌性小鼠具有致突变作用 , 但对雄性
小鼠却无致突变作用。
参考文献:
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及其对策探讨 [ J] . 中国中医药信息杂志 , 2004, 11(7):
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国中药杂志 , 2006, 31(2):93 - 97.
[ 4] 徐晓彬 ,林红英 , 冯羽裳 , 等. 千里光植物化学预试及抗
菌有效部位化学成分检查 [ J] . 中兽医医药杂志 , 2006,
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[ 5] 曹 佳 ,林 真 , 余争平.微核试验原理方法及其在人群
监测和毒性评价中的应用 [ M ] . 北京:医学科学出版社 ,
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1980, 29 - 80.
JTCVM
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Bone -marrow m icronucleus test of extract from Senec io scandens Buch. -Ham. in m ice
CHEN Jin - jun, YU Zeng - jie, LIN H ong - y ing, XU X iao -b in
(Institute of Ag ricu ltura l Bio techno logy, Guangdong Ocean University, Zhan jiang Guangdong 524088, China)
Abstract:F rozen - vacuum - dried powder o f ex trac t from Senecio scandens Buch. -Ham. w ith 70% of e thano l so lution was
prepared and a range o f fem a le and m a le Kunm ing m ice we re em ployed to conduct the bone -m arrow m icronuc leus te s.t It was
found that ex tract from S. scandens Buch. -H am. cou ld increase them icronuc leus rate in the fem a le m ice at bo th m ed ium and high
do ses, bu t had no effect a t low dose (130. 9 m g /kg); that the ex tract cou ld increase the m ic ronucleus ra te in m ale m ice at high
do se(1 309. 0 mg /kg), bu t had no effect a t bo th low and m edium doses, and that the m icronuc leus ra te re lied on the dose o f the
extrac.t Those re su lts indica ted that only h igher dose o f the extrac t from S. scandens can cause mu tation in m ice.
Keyw ords:Ex trac t from Senecio scandens Buch. -ham. ;bone -m arrow m icronucleus te st;m utation;m ice
临 床 集 锦
止嗽汤加减治疗家畜外感久咳
外感久咳为临床常见病症 , 多由上呼吸道感染 、急性支
气管炎 、肺炎等引起。 近年来 , 笔者自拟止嗽汤治疗家畜外
感久咳 50例 , 治愈 45例 ,好转 3例 ,总有效率为 96%。疗效
满意 ,报道如下。
1 症状
临床表现为咳嗽迁延不止 , 干性或湿性咳嗽 , 听诊两肺
呼吸音粗厉 ,或伴有散在的干 、湿啰音 ,诱咳呈阳性 ,舌质红 、
舌底黄 、苔薄白 , 脉弦浮。
2 治疗
止嗽汤:紫菀 、百部各 40 g, 荆芥 、白前 、桔梗 、蝉蜕 、僵
蚕 、白芍 、丝瓜络各 30 g, 甘草 15 g。偏风寒者加紫苏叶
25 g;风热者加金银花 45 g;湿性咳嗽加苦杏仁 25 g;干性咳
嗽加川贝母 30 g。 1剂 /天 ,一般 2 - 3剂 , 研末开水冲泡 , 胃
管投服。
3 病例
2000年 12月 3日 , 患马咳嗽已 40余天 , 他医按感冒治
疗后其它症状消失 , 唯咳嗽未见好转。症见:精神沉郁 , 双
侧肺泡呼吸音粗厉 , 支气管呼吸音增强 , 诱咳阳性 , 呈湿性
咳嗽 , 耳 、鼻 、四肢末端发凉 , 舌红 、苔薄白 , 脉弦浮 。治用止
咳汤加紫苏叶 25 g, 苦杏仁 25 g, 研末 , 开水冲调 ,胃管一次
投服 , 2剂后症状大减 , 继服 1剂咳止病愈。
4 体会
外感咳嗽 、久咳不愈 , 其病因多为外感表邪除而未尽 ,导
致痰气郁结 ,肺失宣肃 , 引发咳嗽迁延不愈。治以疏风宣肺 、
止咳化痰为主。方中紫菀 、百部止咳化痰 , 外感咳嗽不论新
久 ,皆可取效;荆芥疏风解表 ,使表邪去而肺气宣 ,咳嗽宁;白
前 、桔梗 、甘草宣肺利气 ,止咳消痰;蝉蜕轻升开宣肺窍;僵蚕
祛风解痉 ,清热利咽 , 两药相伍 , 对痉挛性咳嗽和干咳有卓
效;久咳伤阴 , 久病入络 , 故用白芍养阴血而除肺燥;丝瓜络
通肺络和血脉 , 化痰顺气。诸药合用, 有宣肺疏解 、养阴和
营 、解痉止咳 、降气化痰、利咽止痒之效 , 用于外感久咳, 具有
止咳效果好 、无毒副作用等优点。
(青海省平安县草原站 810600 李得庆;
乐都县蒲台乡兽医站 赵元灏)
自拟拔毒散治疗家畜湿疹 、无名肿毒
近几年来 , 笔者采用自制拔毒散治疗家畜湿疹 26例(马
2例 ,山羊 11例 , 猪 10例 ,牛 3例);无名肿毒 11例(牛 6例 ,
马 3例 , 羊 2例),均收到满意的效果。
1 药物配制
雄黄 、枯矾各等份 ,共为细末 , 过筛即成。
2 治疗方法
2. 1 如患部流出黄色液体者 ,可将药粉撒布 , 直至表面无渗
出液 , 结痂后 ,再用纯芝麻油将药粉调成糊状涂擦。
2. 2 若患部表面有干痂者 ,可先将干燥的痂皮除去 , 再撒布
药粉。
2. 3 无名肿毒患畜 ,用食醋将药粉调成糊状涂抹患处 ,药物
干后 , 再用食醋浸润 , 2 -3次 /天 ,隔天换药一次 , 直到痊愈。
3 病例
例 1 2000年 6月 , 崇礼乡马庄村 10组马某的一头
母牛 , 右下颌骨后侧有一个直径约 12 cm 的肿块 ,触之有热
痛感 , 患牛食欲减少 ,反刍少而无力。 遂用拔毒散 120 g, 食
醋 205 m l, 将药粉调成糊状涂于患处 , 每天浸润食醋 3次 , 6
天后治愈。
例 2 2001年 8月 , 东岸张胡庄村胡某的一只山羊 ,
头部 、胸部 、肘后等患部均流出黄色液体 , 部分有结痂。他医
按疥癣治疗多次不见效果 , 遂用拔毒散治疗 , 4次治愈。
4 体会
雄黄具有清热解毒 、止痒的作用 , 枯矾能收敛 、渗湿 , 二
者配合有明显疗效。该药物配制方便 , 价格低廉 ,使用方法
简单易行。
(河南省上蔡县动检站 463800 付 泰 贾保生;
上蔡县畜牧站 胡红伟 邱玉环)