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病变减轻的作用 ,与模型组比有明显差异 , 其作用机制可能不
完全相同。以往的研究主要从调节脂类代谢方面来分析解释
此类中药的降血脂及防治 AS 的机理。 然而从本实验的研究
结果看 ,通脑心脉灵除了有调节脂类代谢即使 TC 、TG 下降 ,
HDL-C 升高的作用外 , 尚对抗脂质过氧化的作用 , 起到了防
治动脉粥样硬化发生 、发展的作用。
参考文献:
[ 1]吴开云 ,高摄渊 ,袁融 ,等.维生素 D诱发大鼠动脉粥样硬化的实
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(收稿日期:2009-10-10)
海枫藤水煎液小鼠急性毒性和微核试验研究
岑晓江1 , 2 , 翟书华2 , 王德斌2 , 浦仕彪3 , 李婵娟3 , 赵云丽4
(1.云南师范大学生命科学学院 , 云南 昆明 650222;2.昆明学院生命科学与技术系 , 云南 昆明 650031;
3.云南中医学院 2007级研究生 , 云南 昆明 650500;4.云南省药物研究所 , 云南 昆明 650111)
　　摘　要:目的:对海枫藤水煎液的毒性作初步评价 , 为深
入研究提供依据。方法:小鼠急性毒性试验采用最大给药量
法;致突变试验采用小鼠骨髓细胞微核试验 , 以经口灌胃方式
给药。结果:小鼠海枫藤水煎液的最大给药量为 160g/
kg.bw ,为临床成人用药量的 941 倍;小鼠骨髓细胞微核试验
结果均显示海枫藤水煎液 4 个剂量组的微核发生率和 PCE/
200 比值与纯水对照组比较差异无显著性意义(P >0.05)。
结论:本试验条件下 , 海枫藤水煎液未引起小鼠明显的急性毒
性反应 ,没有明显诱发小鼠骨髓细胞微核发生率增加。
关键词:海枫藤;急性毒性试验;微核试验
中图分类号:R285.5 文献标识码:A
文章编号:1007-2349(2010)03-0054-02
海枫藤(Marsdenia officina lisT siang et P.T.Li)全株可药
用 ,有舒经通络 、散寒 、除湿 、止痛等功效。 海枫藤属于萝藦科
牛奶菜属 ,主产于西南地区和台湾省 , 藤本植物[ 1] 。在彝族地
区特别是哈尼族地区常用于治疗风湿 、关节炎等病症[ 2] 。有
关海枫藤毒性作用的研究国内尚未见报道 , 本实验以小鼠为
研究对象 ,通过经口急性毒性实验 、骨髓红细胞微核实验对海
枫藤的急性毒性和致突变性进行初步探讨。
1　实验材料
1.1　受试药物　海枫藤水煎液 , 临床常用量为每日 10～ 15 g
(3 ～ 5 钱),即 0.17 ～ 0.25 g/kg.bw , 水煮内服。本实验所用
受试物按下法提取:取海枫藤茎叶干燥粉碎物 1000 g 加水
1.2L 浸泡过夜后文火煎煮沸 1 h ,用 3 层无菌纱布滤过;药渣
再煮提 2 次 ,每次加水 1 L ,大火煮开 , 文火煮沸 1 h。 合并煮
提液 ,浓缩至 250 mL , 即得棕褐色浸膏 , 每 mL 相当于生药
4 g ,置 4℃冰箱保存 ,备用。实验时充分振摇 、混匀受试药物
原液(4 g/ mL), 取浓度为 4 g/m L的原药液 , 用纯化水稀释成
不同浓度供小鼠灌胃用。
1.2　动物　SPF 级 ICR 小鼠 , 3 ～ 4 周 , 体重 18 ～ 26 g , 雌雄
兼用 ,由昆明医学院实验动物中心提供 ,生产许可证号:SCXK
(滇)2005-0008。
1.3　仪器　日本产 CH -2 型 Olympus 普通显微镜;电子分
析天平:AL104 , 梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司;JJ2000
型电子天平 ,常熟双杰测试仪器厂。
1.4　药品及试剂　注射用环磷酰胺(CP), 白色粉末 , 纯度
99%, 200 mg/瓶 ,室温保存 , 批号:06081621 , 江苏恒瑞医药股
份有限公司生产;甲醇 ,天津化学试剂三厂生产 , 批号 060303;
小牛血清 ,杭州四季青生产 ,批号:071005;Gimesa染液 , 自制。
2　方法
2.1　小鼠急性毒性实验　参照《中药 、天然药物急性毒性研
究技术指导原则》[ 3] 设计实验。选取健康 、成年 , 禁食 8h 后体
重 18 ～ 22g 的小鼠 40 只 , 雌雄各半 ,按性别和体重随机分为 2
组:空白对照组;海枫藤水煎液 160 g/ kg 剂量组 , 每组 20 只 ,
雌雄分笼 , 10 只/笼。按最大给药量法进行试验 , 灌胃容量为
40 mL/ kg , 灌胃后约 1h 给予饲料和水。给药后每天观察小鼠
的一般反应(表观行为 、动作 、呼吸 、毛色 、姿势等)和死亡情
况 ,连续观察 14 d。
2.2　微核实验　参照《药物遗传毒性研究技术指导原则》设
计实验[ 4] 。购回的小鼠先适应环境 , 观察 1 ～ 2 d , 无异常后开
始实验。选取健康 、成年 , 体重 22 ～ 26 g 小鼠 60 只 ,全雄 , 按
体重随机将小鼠分为 6 组 , 纯水对照 、环磷酰胺阳性对照 、海
枫藤水煎液 10.0、20.0、40.0 g、80.0 g 生药/kg.bw 4 个剂量
组。灌胃容量为 20 mL/kg ,连续灌胃给药 7 d , 阳性对照环磷
酰胺按 0.04 g/ kg.bw 腹腔注射给予。除环磷酰胺阳性对照
54 云 南 中 医 中 药 杂 志　　　　　　　　　　2010 年第 31 卷第 3 期DOI :10.16254/j.cnki.53-1120/r.2010.03.041
组仅腹腔注射 1次给药 , 于给药后 42 h 处死动物外 ,其余组均
于末次灌胃 24 h 后颈椎脱臼法处死小鼠 , 用止血钳挤出胸骨
骨髓液与玻片一端的小牛血清混匀 , 常规推片 , 每鼠推 2 张
片 ,自然晾干 , 将骨髓片浸入装有甲醇的容器中固定 5 ～ 10
min ,取出晾干。将骨髓片用 Giemsa应用液染色 10～ 15 min ,
自来水冲洗 ,晾干 , 贴上标签 ,阴凉干燥处保存。
选择细胞完整 、分散均匀的区域 ,在油镜下观察。每只小
鼠计数 1000 个嗜多染红细胞(PCE),观察含有微核的嗜多染
红细胞数 ,计算微核率 , 以千分率表示;同时观察 200 个红细
胞中见到的正染红细胞(NCE)数目 , 计算每只动物骨髓中
PCE/ 200 的比值。
2.3　数据统计　采用 SPSS 统计软件 , 体重统计采用多组均
数分析;PCE/200 比值采用单因素方差分析 , 方差齐用 LSD ,
方差不齐用 Tamhane s T2;微核发生率用泊松分布。
3　结果
3.1　急性毒性试验　给药组在灌胃后约 30 min 部分动物
出现活动减少 , 但 2 h 后恢复正常;此外还观察到给药组所
有动物在灌胃后约 3.5 h 排出药性稀便 。次日早观察所有
受试小鼠的表观行为 、动作 、呼吸 、毛色 、姿势等均无异常。
连续 14 d , 全部动物存活。小鼠体重明显增长 , 试验 1 、4 、7 、
14 d 体重组间比较差异无显著性意义(P >0.05), 试验前后
组内比较差异有显著性意义(P<0.01), 提示 2 组动物体重
均有增长。 14 d 后颈椎脱臼处死 , 解剖 , 肉眼观察小鼠的心 、
肝 、脾 、肺 、肾 、胃 、肠 、生殖腺等外形 、颜色 、质地 、大小等无异
常。体重变化情况见表 1。
对海枫藤水煎液进行 ICR小鼠灌胃给药急性毒性试验 ,
给药后连续观察 14 d。结果显示:小鼠体重增长 ,未发现明显
毒性反应和死亡。最大给药量为 160 g/40m L/kg.bw ,为临床
成人用药量的 941 倍。
表 1　海枫藤水煎液急性毒性试验对小鼠体重的影响　(-x ±s)
组别 剂量(g/ kg) n
体重(g)
第1 d 第4 d 第7 d 第14 d
水对照组 / 20 19.7±0.7 20.2±0.90 24.7±3.1 28.3±3.21＊＊
海枫藤水煎液 160 20 21.3±1.3 23.4±1.8 24.53±4.2 28.5±4.9＊＊
　　与本组第 1 d比较 , ＊＊P<0.01
3.2　小鼠骨髓细胞微核试验　小鼠连续灌胃给予海枫藤水
煎液 7 d ,给药组和纯水对照组小鼠体重均明显增长;环磷酰
胺阳性对照组小鼠骨髓微核率发生为 16.3‰,与有关文献报
道基本相符 ,明显高于 10.0、20.0、40.0 、80.0 g/ kg.bw 4 个剂
量组和纯水对照组 ,差异有显著性意义(P<0.01), 而 4 个剂
量组的微核发生率和 PCE/ NCE 比值与纯水对照组比较差异
无显著性意义(P >0.05)。见表 2。
小鼠骨髓细胞细胞微核试验结果显示:小鼠连续灌胃海
枫藤水煎液 7 d , 未诱发微核发生率增加和 PCE/ 200 比值下
降 ,无致突变作用。
表 2　对小鼠微核发生率及 PCE/NCE比值的影响　(-x ±s)
组别
剂量
(g/kg)
n
体重(g)
给药前 给药第3 d 第7 d
PCE数
(个)
微核数
(个)
微核率
(‰)
PCE/200
溶媒对照 ——— 10 23.5±1.2 26.0±1.8 26.0±1.9 10×1000 18 1.8±0.6　 0.77±0.11
环磷酰胺 0.04 10 23.1±0.8 26.0±1.5 26.2±3.4 10×1000 163 16.3±4.4＊＊ 0.43±0.07＊
10.0 10 23.5±1.5 25.9±1.7 27.5±1.6 10×1000 18 1.8±0.9　 0.80±0.08
海枫藤 20.0 10 23.5±1.4 26.0±2.4 27.2±2.1 10×1000 22 2.2±1.1　 0.80±0.06
水煎液 40.0 10 23.9±1.3 25.3±1.6 25.8±2.9 10×1000 15 1.5±0.8　 0.88±0.06
80.0 10 23.7±1.2 25.2±1.8 26.3±2.7 10×1000 17 1.7±0.95　 0.76±0.04
　　与溶媒对照组比较 ,＊＊ P<0.01
4　讨论
海枫藤(M arsdenia o fficinalisT siangetP.T.Li)属于萝藦
科(Asclepiadaceae)牛奶菜属(Marsdenia R.Brow n)植物 ,在彝
药中叫哦劳非耐 , 被记载于《云南省志》七十卷(医药志)[ 5] 。
彝族民间利用海枫藤的根来接骨 , 叶敷外伤止血 、止痛 , 全株
用来散寒 、除湿和舒经通络等[6] 。目前尚未见到海枫藤水煎
液毒性作用的研究报道。
最大给药量往往被选为动物的终身试验剂量 , 能检测出
任何可能存在的致癌危险性 , 是急性毒性实验最常用的参数
之一 , 也常被作为小鼠骨髓微核实验剂量分组的参考依据[ 7] 。
微核实验是目前筛选化学物质遗传毒性快速 、敏感的常规方
法之一。根据微核形成的原理 , 中药诱发小鼠微核率的变化
可以反映出所检测药物对试验性小鼠的遗传毒性[ 8] 。
本研究结果表明 , 在本实验设计的剂量范围内 , 没有观察
到海枫藤水煎液的明显毒性作用和和致突变作用。小鼠骨髓
微核发生率环磷酰胺阳性对照组明显高于纯水对照组 , 证明本
实验系统是可靠的。本实验对海枫藤水煎液的毒性作用进行
了基础安全性研究 ,为以后的开发研究起到参考和指导作用。
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(收稿日期:2009-11-19)
552010 年第 31 卷第 3 期　　　　　　　　　　云 南 中 医 中 药 杂志