全 文 ：FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
食 品 科 技
2009年 第 34卷 第 1期
一点红[Emilia sonchifolia (Linn.)DC.]属菊科一
年生或多年生草本植物，常见野生于广东、广西、
福建、贵州、江西等地的林间和路边。一点红性
微寒，具有较好的清热解毒、凉血消肿等功效。
在过去一点红只是作为清热消炎的野菜食用，然
而目前国内外对一点红的研究表明一点红具有抗
菌消炎的活性 [1]，可以在临床上用于治疗妇科炎
症。但是一点红起抗菌、消炎作用的活性成分却
并不清楚，有人推测可能与一点红黄酮有关 [2-3]。
本研究对一点红黄酮进行提取，并进一步探讨其抗
菌作用，以期找到与一点红抗菌消炎作用相关的生
物活性成分。
1 实验材料
1．1 试剂
一点红：干燥全草，广西花红药业提供；柱色
一点红总黄酮分离及抗菌研究
陈晓伟， 韦媛媛， 周吴萍， 潘明建， 李军生 *
(广西工学院生物与化学工程系，柳州 545006)
摘要： 目的：研究一点红总黄酮的提取、分离提纯及其抗菌作用。方法：乙醇回流提取，聚酰胺
柱层析和薄层层析分离提纯一点红总黄酮，滤纸片法测定一点红总黄酮抗菌作用。结果：石油
醚∶正丁醇∶醋酸(10∶6∶3)洗脱得到一点红总黄酮，0.8 g/mL总黄酮溶液对大肠杆菌、金黄色葡萄球
菌和枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径分别是 10、11、10 mm。结论：一点红总黄酮对大肠杆菌、枯草
芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌具有抑制作用。
关键词： 一点红；黄酮；抗菌作用
中图分类号： TS 201.2 文献标志码： A 文章编号： 1005-9989(2009)01-0163-03
Study on separations and the antimicrobial effects of the total
flavonoids of Emilia sonchifolia
CHEN Xiao-wei, WEI Yuan-yuan, ZHOU Wu-ping, PAN Ming-jian, LI Jun-sheng*
(Guangxi University of Technology, Liuzhou 545006)
Abstract: Objective: To study on the antimicrobial effects of the total flavonoids of Emilia sonchifolia. Methods:
The flavonoids of Emilia sonchifolia were extracted by aqueous ethanol refluxing and separated by TLC and
column of polyurethane. The antimicrobial effect of flavonoids was studied by paper dish diffusion. Rusults: The
result of TLC showed that petroleum ether ∶n-butyl alcohol ∶acetic acid (10 ∶6 ∶3) wash out flavonoids. The anti-
microbial experiment showed that the flavonoids had antimicrobial activity to escherichia coli, bacillus subtilis
and staphylococcus aureus in the concentration of 0.8 g/mL, and the average diameters of bacteriostatic zones
were 10, 11 mm and 10 mm, respectively. Conclusions: The total flavonoids of Emilia sonchifolia had the
antimicrobial effects.
Key words: Emilia sonchifolia; flavonoids; antimicrobial effect
收稿日期： 2008-05-21 *通讯作者
基金项目： 广西自然科学基金项目(桂科基 0575023)。
作者简介： 陈晓伟(1976—)，男，辽宁沈阳人，硕士，讲师，研究方向为天然产物化学。
提取物与应用
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2009年 第 34卷 第 1期
反应类型 现象 结果
碱反应 浅黄色，加热，黄色不变 可能含有黄酮类
锌粉盐酸反应 无色变为浅红色 可能含有黄酮类、黄酮醇类、二氢黄酮类、二氢黄酮醇类
三氯化铝反应 浅黄色絮状沉淀 可能含有 4-羟基黄酮醇或 7-4′-二羟基黄酮醇
铅盐沉淀反应 浅黄绿色絮状沉淀 可能含有邻二酚羟基或兼有 3-OH、4-酮基或 5-OH、4-酮基结构的黄酮
表 1 一点红总黄酮的化学检识
谱聚酰胺：80~100目，浙江省台州市路桥四甲生
化塑料厂；聚酰胺薄层板、聚酰胺粉：80~100目，
浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂；芦丁对照品：
中国生物制品检验所，批号 080-9002；营养琼脂
粉：广东环凯微生物科技公司；注射用硫酸链霉
素：大连美罗大药厂；其他试剂为分析纯。
1．2 菌种
本实验所用的菌种为金黄色葡萄球菌(Staphy-
lococus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)和枯草
芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。
1．3 实验仪器
UV-2100型紫外可见分光光度计：尤尼柯上
海有限公司；LRH-250-Ⅱ生化培养箱：广东省医
疗器械厂；W-CJ-1B标准型净化工作台：苏净集
团苏州安泰空气技术有限公司。
2 实验方法
2．1 一点红总黄酮分离提取
2．1．1 粗提 水乙醇浸提法，1000 mL圆底烧瓶中
放入剪碎风干的一点红全草 50 g，约 600 mL无水
乙醇，水浴加热回流提取 3次，每次 1.5 h，抽滤，
浓缩，得墨绿色浸膏。
将浸膏加热水溶解，石油醚萃取至石油醚层
无色，保留水层并用乙酸乙酯反复萃取至乙酸乙
酯层无色。对乙酸乙酯层减压浓缩，60 下烘干，
备用。
2．1．2 分离提纯 经活化的聚酰胺(80~100目)湿法
上柱，对一点红粗提物进行柱分离，以石油醚∶乙
酸乙酯∶醋酸(11∶2∶1)溶液为洗脱剂洗脱杂质，以石
油醚∶正丁醇∶醋酸(10∶6∶3)为洗脱液洗脱黄酮，60 ℃
下烘干，得到淡黄色总黄酮样品。
2．1．3 黄酮检识 化学检识：根据文献[4-5]的方
法，取少量粗提物及色谱柱分离提纯的样品分别
进行锌粉盐酸反应、碱反应、铅盐沉淀反应、三
氧化铝反应。
将粗提物、提纯的样品与芦丁标准品分别点
样于聚酰胺薄层板，以正丁醇∶水∶醋酸(10∶5∶1)为展
开剂展开，喷 1%三氯化铝乙醇溶液，于紫外灯下
显色。
2．2 一点红总黄酮抗菌实验
2．2．1 药液配制 称取一点红黄酮粉末，用 10%
吐温-80无菌水稀释成 800、400、200 mg/mL三个
浓度待试液，并制备无菌水作为空白对照液，10%
吐温-80对照溶液，以及 0.25 mg/mL 注射用硫酸
链霉素作为阳性对照液。以上各溶液分别用微孔
滤膜(孔径 0.45 mm)过滤，装入已灭菌小瓶子备用。
2．2．2 培养基制备 称量 33 g 营养琼脂加 1000
mL水溶解，121 ℃灭菌 20 min待用。
2．2．3 菌悬液制备[6] 将供试的各种菌种进行斜面
活化，取一定量已活化的供试菌于装有 9 mL无菌
水的试管中，制成菌悬液，再用无菌吸管取 1 mL
充分混合的菌悬液于试管中，加入 9 mL无菌水，
用显微镜直接记数法测菌体个数，调至浓度为含
菌体为 108 cfu/mL的菌悬液，备用。
2．2．4 抑菌圈的测定 本实验采用用滤纸片法测
定抑菌圈。在净化工作台上将各种待试菌悬液各
吸取 0.2 mL均匀地涂布于平板表面，37 ℃下正置
培养 1 h，制成含菌平板。用无菌镊子夹取 6 mm
无菌滤纸片，浸泡黄酮待试液 20 s，沥干后，轻
贴在平皿上。并依次用相同方法放置溶媒对照、
阳性对照、空白对照。37 ℃恒温正置培养 1 h后
倒置培养 24 h，观察抑菌情况，并测量抑菌圈直
径，抑菌圈直径以毫米测量。每种菌重复实验 3
个平板，求其平均值，评价其抑菌效果[7]。
3 结果与分析
3．1 提取分离结果
3．1．1 一点红总黄酮化学检识 一点红粗提物及
色谱柱分离提纯样品，经化学检识均显黄酮阳性
反应，结果如表 1。
3．1．2 一点红总黄酮薄层色谱分析 在紫外光下
聚酰胺薄层板上，芦丁及粗提物中 g、h两个斑点
产生黄绿色荧光(见图 1 A)，此为黄酮特征反应，
可推测出 g、h两个斑点为一点红中的黄酮类化合
物。分离提纯样品中只含 g、h斑点(见图 1 B)，为
一点红总黄酮。
提取物与应用
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3．2 一点红黄酮抑菌结果
一点红黄酮提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄
球菌和枯草芽孢杆菌的抑菌圈结果见表 2。
由表 2可知，空白对照无抗菌现象，用 10%
吐温-80无菌水做溶剂，不产生抑菌圈，说明所使
用的溶剂无抗菌性能，对抑菌实验结果没有影响；
而 0.25 mg/mL硫酸链霉素作为阳性对照液对大肠
杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌均有高度
敏感性，证实实验可行性；一点红黄酮在 200～800
mg/mL 范围内，对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金
黄色葡萄球菌均产生抑菌圈；对大肠杆菌的抑菌
圈随浓度变化不大，为轻度敏感；对枯草芽孢杆
菌在 200～400 mg/mL 浓度范围内，敏感度较差，
而在 800 mg/mL 浓度时，呈现中度敏感；随浓度
增大，一点红黄酮对金黄色葡萄球菌的抑菌圈变
化呈一定的剂量依赖性，在 800 mg/mL 浓度时也
呈现中度敏感。
4 讨论
本实验采用无水乙醇浸提，石油醚、乙酸乙
酯萃取除去部分杂质，并通过聚酰胺柱分离纯化，
得到两种较纯的黄酮化合物，此两种黄酮与芦丁
的化学结构相似，但其结构仍有待进一步证实。
本实验中一点红黄酮不同浓度对 3种受试菌种均
能产生抑菌圈，说明这 3种菌对一点红黄酮较敏
感，实验中由于一点红黄酮水溶性较差，故使用
增溶剂吐温-80。
参考文献：
[1] Muko K N, Ohiri F C. A preliminary study on the anti-in－
flammatory properties of Emilia sonchifolia leaf extracts[J].
Fitoterapia,2000,71:65-68
[2] 高建军,程东亮.一点红化学成分的研究.中国中药杂志,
1993,18(2):102-103
[3] Shylesh B S, Padikkala J. Antioxidant and anti-inflamma－
tory activity of Emilia sonchifolia[J]. Fitoterapia,1999,70:
275-278
[4] 姚新生.天然药物化学.北京:北京人民卫生出版社,1988:
191-240
[5] 李秀信,王荣花,杨秀萍.一点红黄酮成分的分析及含量
测定[J].西北植物学报,2003,23(4):671-673
[6] 罗超坤.广藿香水提物的抗菌实验研究[J].中药材,2005,28
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[7] 王玲,张富宝.中药大黄提取色素的抑菌作用研究[J].食品
工业科技,2000,(6):27-28
溶剂前沿
j e芦丁点
h f乙酸乙酯萃
g 取物原点
i g黄酮点
h黄酮点
i杂质点
j杂质点
起始线e f
溶剂前沿
e芦丁点
f过柱后样品原点
g黄酮点
h黄酮点
起始线
h
g
e f
A.粗提物(f)与芦丁(e) B.分离提纯样品(f)与芦丁(e)
图 1 一点红黄酮类化合物的薄层色谱分析
表 2 一点红黄酮抑菌圈直径 mm
空
白
10%吐
温-80
硫酸链霉
素 0.25
mg/mL
大肠杆
菌 - - 24 10 9 10
枯草芽
孢杆菌 - - 23 11 8 9
金黄色
葡萄球
菌
- - 24 10 7 -
一点红黄酮
800mg/mL 400mg/mL 200mg/mL
供试菌
注：“- ”表示无抑菌圈；表中数据为 3次实验平均值。
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递传事食
提取物与应用
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《原产地域产品 龙口粉丝》 改为 《地理标志产品 龙口粉丝》 并增加了对食品添加剂的要求， 修改了 “断条率” 计算公式和
二氧化硫含量测试方法。
山东招远是龙口粉丝的发源地， 有着 “中国粉丝之都” 的称号。 现有粉丝生产加工企业 100 多家。 为了确保企业按新的
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业注意新旧标准的差别， 以保证产品符合新标准的要求。 这次标准宣贯， 对于保证龙口粉丝的产品质量， 保持这一地理标志
产品的百年品牌有着积极的现实意义和深远的历史意义。 (高天海)
烟台市：新龙口粉丝国家标准实施
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